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基础研究重大项目前期研究专项(2001CCA00900)

作品数：9 被引量：99H指数：6
相关作者：周金林周勇志龚海燕程天印张维谊更多>>
相关机构：中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所湖南农业大学安徽农业大学更多>>
发文基金：基础研究重大项目前期研究专项上海市自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 9篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 8篇农业科学
  • 3篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 4篇唾液
  • 4篇唾液腺
  • 4篇镰形扇头蜱
  • 4篇基因
  • 2篇蛋白
  • 2篇蛋白酶
  • 2篇新基因
  • 2篇克隆
  • 2篇寄生
  • 2篇寄生虫
  • 2篇功能分子
  • 2篇分子
  • 2篇分子研究
  • 2篇氨酸
  • 2篇半胱氨酸
  • 2篇半胱氨酸蛋白
  • 2篇半胱氨酸蛋白...
  • 2篇CDNA文库
  • 1篇信息技术
  • 1篇氧化酶

机构

  • 10篇中国农业科学...
  • 3篇湖南农业大学
  • 1篇安徽医科大学
  • 1篇广西大学
  • 1篇安徽农业大学

作者

  • 10篇周金林
  • 8篇周勇志
  • 6篇龚海燕
  • 3篇程天印
  • 2篇张维谊
  • 2篇施启顺
  • 2篇林矫矫
  • 1篇刘毅
  • 1篇曹杰
  • 1篇黄维义
  • 1篇向飞宇
  • 1篇陈灵芝
  • 1篇李培英
  • 1篇沈杰
  • 1篇王玉霞

传媒

  • 2篇中国人兽共患...
  • 2篇中国预防兽医...
  • 1篇中国兽医学报
  • 1篇畜牧与兽医
  • 1篇动物医学进展
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇中国兽医寄生...
  • 1篇中国畜牧兽医...

年份

  • 2篇2006
  • 2篇2005
  • 5篇2004
  • 1篇2003
共 9 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
亚洲璃眼蜱差异表达新基因P18的克隆和鉴定被引量：2
2006年
为了进行抗蜱和蜱传病疫苗的研究,本实验对亚洲璃眼蜱雌蜱吸血前后唾液腺消减文库中获取的一个全长编码基因P18进行了研究。该基因全长519bp,共编码170个氨基酸,分子量为18.36Ku,等电点为4.28。BLAST分析表明,该基因预测的氨基酸与肩突硬蜱、篦子硬蜱唾液腺的抗凝血小肽有30%～40%低度同源性。将该基因亚克隆到pET-32a(+)表达载体,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,重组融合蛋白以可溶性形式高效表达。将可溶性重组蛋白免疫小鼠后获得的抗血清。经免疫印迹分析表明,该重组蛋白抗体可特异性的识别半饱雌蜱唾液腺中的天然蛋白抗原,而未吸血雌蜱唾液腺中则不显现特异条带。RT-PCR结果进一步证实,该基因在蜱吸血后的唾液腺中差异表达。
王玉霞周金林周勇志龚海燕向飞宇程天印刘毅
关键词：唾液腺基因
亚洲璃眼蜱唾液腺一新功能基因的克隆与测序被引量：3
2005年
HaB1是亚洲璃眼蜱雌成蜱唾液腺差异表达基因文库中的一个片段,根据其序列设计引物HaB1-GSP1和HaB1-GSP2,以唾液腺总RNA为模板,RACE法扩增获得HaB1的未知3′-末端。测定该末端序列,进行序列拼接,设计全长引物5-′CCAGTCCGAAGGAAGGGCG-3′和5-′TCTC-CGGGCACGTGAAGTGTC-3′。以cDNA第一链为模板,扩增获得基因全长。经核查表明,该基因为一新基因(登录号AY803896)。
程天印周金林施启顺周勇志林矫矫
关键词：唾液腺基因克隆体外寄生虫
镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达及表达产物免疫保护性分析被引量：5
2005年
目的在大肠杆菌中高效表达镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶(cysteinase)CysA和CysB,并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法将cysA和cysB基因亚克隆到pET-32a载体,转化感受态大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达;表达产物免疫家兔,首次免疫抗原剂量免为300μg/兔,二次免疫和三次免疫均为150μg/兔。三次免疫后进行攻击蜱试验,观察免疫保护效果。结果在IPTG诱导下,重组质粒pET32a-cysA和pET32a-cysB在大肠杆菌中获得高效表达,产生Trx-cysA和Trx-cysB融合蛋白,这两种融合蛋白经纯化后免疫家兔,分别使成蜱的吸附率降至17%和17%,饱血率降至42%和22%。结论重组质粒pET32a-cysA和pET32a-cysB在大肠杆菌中高效表达,表达产物能诱导家兔产生一定程度的抗蜱保护性免疫力。
陈灵芝周金林李培英周勇志龚海燕
关键词：半胱氨酸蛋白酶基因表达免疫保护
蜱的功能分子研究及其应用前景被引量：58
2004年
蜱既是常见的吸血外寄生虫 ,又是人和动物许多重要疾病的媒介。为了持续地吸血 ,蜱唾液腺可分泌大量生物活性分子 ,并在抗凝血、抗炎症、免疫抑制等方面发挥重要作用。现已分离鉴定出的蜱抗凝血多肽 (TAP)等新型抗凝血和其他多种具有免疫调节的功能分子。此外 ,抗蜱基因工程疫苗候选抗原分子、酶及酶的抑制剂分子、抗药性相关分子、抗菌多肽和毒素等也在被深入研究。这些功能分子不仅在蜱及蜱传染病防制中显示着重要作用 ,同时也在医药生物制剂开发研制上表现出潜在的重要价值 。
周金林
关键词：功能分子体表寄生虫生物技术信息技术
蜱的功能分子研究及其应用前景
蜱既是常见的外寄生虫,又是人和动物许多重要疾病的媒介。蜱及蜱传播疾病的防治目前主要依靠药物,但环境和食品的污染以及蜱的抗药性问题,需要新的防治策略。因此,蜱的功能分子研究在蜱及蜱传病防治中的重要性十分明显,同时也在医药生...
周金林沈杰
关键词：功能分子
文献传递
镰形扇头蜱两个组织蛋白酶L-样半胱氨酸蛋白酶新基因的克隆与序列分析被引量：11
2004年
蜱是动物常见的外寄生虫 ,并且传播多种人和动物的疾病 ,严重危害畜牧业发展和人类健康。为了寻找基因工程疫苗候选抗原基因 ,根据半胱氨酸蛋白酶的保守性氨基酸序列及镰形扇头蜱氨基酸密码子偏好设计引物 ,PCR扩增、测序并分析得到 2个镰形扇头蜱的半胱氨酸蛋白酶基因片段cysA和cysB ,再通过RACE的方法得到全长基因序列。cysA全长 1168bp ,编码 3 3 2个氨基酸 ;cysB全长 1153bp ,编码 3 3 5个氨基酸。经过分析 ,CysA和CysB均与其他蜱种或物种的组织蛋白酶L 样半胱氨酸蛋白酶有高度同源性 ,两者均含有半胱氨酸蛋白酶活性位点处的保守性氨基酸序列 ,因此cysA ,cysB均为镰形扇头蜱两个新的组织蛋白酶L 样半胱氨酸蛋白酶基因。RT PCR分析表明 。
陈灵芝周金林周勇志龚海燕李培英
关键词：镰形扇头蜱组织蛋白酶半胱氨酸蛋白酶
镰形扇头蜱唾液腺cDNA文库的构建被引量：8
2004年
构建了镰形扇头蜱唾液腺 c DNA表达文库。用 Trizol试剂提取镰形扇头蜱唾液腺总 RNA,经反转录合成 c DNA第 1链 ,应用 L D- PCR扩增方法 ,合成双链 c DNA。用 Sfi 内切酶修饰此双链 c DNA,使形成两端分别带有 Sfi A和Sfi B的粘末端。经 CHROMA SPIN- 4 0 0柱纯化 ,收集 4 0 0 bp以上的双链 c DNA片段 ,将其连接于带有 Sfi A和 Sfi B末端的λ Tripl Ex2噬菌体载体 ,经体外包装后 ,以 XL1 - Blue为受体菌构建 c DNA表达文库。经测定 ,库容量为7.0 8× 1 0 5,重组率为 95 .2 %。扩增后的文库滴度为 1 .4 5× 1 0 9pfu/ m L。随机挑取 2 0个克隆转化到质粒 p Tripl Ex2 ,经抽质粒、测序得到
张维谊周金林龚海燕周勇志黄维义
关键词：镰形扇头蜱唾液腺CDNA文库细胞色素氧化酶
四种硬蜱的实验室人工饲养和部分生物学特性的观察被引量：46
2003年
为了给蜱及蜱传疾病研究提供充足、有效的实验材料 ,我们对镰形扇头蜱 (Rhipicephalus haemaphysa-loideshaemaphysaloides)、亚洲璃眼蜱 (Hyalomma asiaticum asiaticum)、微小牛蜱 (Boophilusmicroplus)和嗜群血蜱(H aemaphysalis concinna)进行了实验室人工饲养。在 2 5°C,92 %相对湿度 ,黑暗条件下 ,以兔为唯一饲血动物 ,四种硬蜱均可完成整个生活史的发育。镰形扇头蜱完成一代需 86～ 12 0天 ,亚洲璃眼蜱需 10 4～ 14 7天 ,微小牛蜱需5 0～ 74天 ,嗜群血蜱需 88～ 12 5天。通过实验室人工饲养 ,成功进行了单雌蜱蜱群的繁殖。除微小牛蜱外 。
周勇志周金林曹杰龚海燕
关键词：硬蜱生物学特性传播媒介
镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA文库的构建被引量：8
2004年
目的 为了筛选抗蜱及蜱传疾病基因工程疫苗的抗原候选分子,构建了镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库。方法 用Frizol试剂提取镰形扇头蜱半饱血雌蜱总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用长链PCR(LD-PCR)扩增方法,合成双链cDNA。双链cDNA(ds cDNA)在Sfi I内切酶的作用下,形成两端分别带有Sfi I A和Sfi I B的粘性末端。经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集500bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有Sfi工A和Sfl I B末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA噬菌体表达文库。结果 经测定,库容量为4.2×106,重组率为96％。扩增后的文库滴度为2.04×1010pfu/ml。通过对文库中随机挑选的15个克隆进行序列分析,获得一个编码线粒体ATP酶第6亚基蛋白的全长cDNA序列。结论 结果显示,镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库已构建成功。
龚海燕周金林周勇志张维谊
关键词：镰形扇头蜱CDNA文库
亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因文库的构建及分析被引量：10
2006年
从单雌蜱克隆群中挑选未吸血雌蜱60只,随机分成两组。未吸血组直接剖取唾液腺。半饱血组于蜱吸血第5d采集,分离唾液腺。Trizol法提取总RNA,经第一链合成、LD-PCR、RasⅠ酶切、接头连接和抑制消减杂交(SSH)等步骤,获得差异表达基因的cDNA片段。将纯化的cDNA片段与pGEMT-Easy载体连接,转化DH5a,获得204个白色菌落。扩增检查表明,136个克隆含有插入片段,片段大小为250bp～850bp。测出有效序列120个。由10个cDNA片段的RT-PCR检查结果初步断定,本研究消减效果良好。由网上资源分析得:21个片段与其他蜱的基因,19个片段与按蚊、库蚊、钩虫、奥斯特线虫等其他吸血寄生虫的基因,9个与果蝇的基因具有同源性。
程天印周金林周勇志施启顺林矫矫
关键词：唾液腺同源性
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