国家自然科学基金(31071174)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：丁丽华叶棋浓刘婕张亚楠周蕾更多>>
- 相关机构：军事医学科学院首都医科大学附属北京世纪坛医院福建农林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- VEGF启动子活性的测定被引量：2
- 2013年
- 目的构建含有VEGF基因的不同片段启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测VEGF启动子不同片段的活性。方法用PCR扩增出VEGF启动子的不同片段,插入到荧光素酶报告基因载体pGL4-basic中,确定所扩增的DNA序列后,将其转染至293T细胞中,检测其不同片段的活性。结果测序结果表明,扩增的不同片段的VEGF启动子序列正确;荧光素酶活性实验表明,VEGF启动子+72～-128 bp至+72～-528 bp片段具有较高的活性。结论构建了VEGF启动子5'端缺失不同片段突变体报告基因表达载体,为VEGF转录因子的筛选及功能研究提供了重要基础。
- 刘婕林娅红张亚楠丁丽华叶棋浓
- 关键词：荧光素酶报告基因转录活性
- 慢病毒介导RNA干扰HPIP蛋白抑制肿瘤细胞增殖被引量：2
- 2011年
- 目的:建立高效稳定的造血相关的PBX相互作用蛋白质(HPIP)小干扰RNA(siRNA)细胞导入方法,检测HPIP的表达对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法:构建人HPIP慢病毒siRNA干扰载体,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测Lenti-H1 HPIP siRNA的干扰效果;将Lenti-H1 HPIPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞,包装成慢病毒后,感染宫颈癌HeLa和肝癌HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞进行Western印迹检测;用结晶紫实验检测其对肿瘤细胞生长增殖的影响。结果:构建的Lenti-H1 HPIP siRNA能有效抑制HPIP的表达;结晶紫实验显示,慢病毒介导的HPIP siRNA导致细胞增殖的显著抑制。结论:慢病毒介导的HPIP敲减能明显抑制肿瘤细胞的增殖,HPIP可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。
- 徐小洁范忠义韩永健张浩丁丽华韩聚强王凌雪杨智洪杜楠叶棋浓
- 关键词：RNA干扰慢病毒细胞增殖
- DEK真核表达载体的构建及其对p53启动子活性的影响
- 2013年
- 目的:构建DEK的pcDNA3-Flag表达载体,研究其对抑癌基因p53启动子活性的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增DEK编码序列,克隆到pcDNA3-Flag载体,构建成pcDNA3-Flag-DEK,转染293T细胞,Western印迹鉴定pcDNA3-Flag载体介导的DEK的表达,萤光素酶报告基因活性实验研究DEK对p53启动子活性的影响。结果:双酶切实验证实得到pcDNA3-Flag-DEK阳性克隆;Western印迹实验发现DEK在293T细胞内表达;转录活性实验表明在ZR75-1乳腺癌细胞中,DEK呈剂量依赖性抑制p53启动子的活性。结论:构建了DEK的真核表达载体,并发现此表达载体能在ZR75-1乳腺癌细胞中抑制p53启动子活性。
- 刘婕闫志风张亚楠林娅红丁丽华叶棋浓
- 关键词：DEK萤光素酶报告基因
- 血管内皮细胞生长因子启动子突变体萤光素酶报告基因载体的构建
- 2013年
- 目的:构建含有不同片段血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的启动子的萤光素酶报告基因载体,并定位缺氧诱导因子1α(HIF-1α)结合VEGF启动子的区域。方法:以VEGF全长启动子为模板,PCR扩增VEGF启动子的不同片段,插入萤光素酶报告基因载体pGL4-basic,确定所扩增的DNA序列后,将其与HIF-1α表达载体共转染293T细胞,定位HIF-1α结合VEGF启动子的区域。结果:测序结果表明扩增的不同片段的VEGF启动子序列正确;萤光素酶活性实验表明,-1128^-728 bp片段是HIF-1α与VEGF相互作用激活VEGF启动子转录活性的区域。结论:克隆了VEGF启动子5'端缺失突变体报告基因表达载体,为调控VEGF表达的转录因子的筛选及功能研究打下了良好基础。
- 张述刘婕刘世翠林娅红张亚楠丁丽华叶棋浓
- 关键词：血管内皮细胞生长因子启动子萤光素酶报告基因转录活性
- 四个半LIM结构域蛋白1对人肝癌细胞紫杉醇耐药影响的研究被引量：3
- 2017年
- 目的探讨四个半LIM结构域蛋白1(FHL1)对肝癌细胞紫杉醇耐药的作用机制。方法按照FHL1的表达状态,设置敲低FHL1表达的肝癌细胞株为实验组,表达FHL1的肝癌细胞株为对照组,分别给予紫杉醇药物处理,并同时以奥沙利铂作为实验参照。细胞活性测定不同表达的细胞活性的改变,细胞克隆实验检测不同表达细胞的克隆形成。实验组和对照组的细胞克隆接种于裸鼠,并给予紫杉醇治疗,观察两组的成瘤情况以及对紫杉醇的反应。进一步的凋亡蛋白Caspase-3活性测定实验分别对两组Caspase-3活性进行测定。结果紫杉醇药物处理后,实验组和对照组的细胞活性分别为0.41±0.02和0.70±0.02(HepG2细胞);0.44±0.02和0.63±0.03(SMMC 7721细胞),差异均有统计学意义(均P<0.05),且加入奥沙利铂后,实验组和对照组的细胞活性分别为0.70±0.02和0.71±0.02(HepG2细胞);0.64±0.02和0.63±0.03(SMMC 7721细胞),差异无统计学意义(P>0.05)。实验组与对照组的克隆形成计数分别为93.52±14.58和302.48±21.56(HepG2细胞);55.14±10.82和192.28±19.47(SMMC 7721细胞),差异均有统计学意义(均P<0.05);在裸鼠实验中,实验组与对照组肿瘤体积分别为0.02±0.02和1.89±0.51,差异统计学意义(P<0.05)。此外,Caspase-3活性实验显示,实验组与对照组Caspase-3表达分别为10.27±0.47和26.72±0.54,差异有统计学意义(P<0.05);加入抑制药Z-VAD-FMK后,实验组与对照组Caspase-3表达分别为8.87±0.36和29.96±0.68,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FHL^(-1)是紫杉醇耐药基因,FHL^(-1)敲低后,紫杉醇的抗肿瘤作用增强,促进Caspase-3激活,紫杉醇诱导的细胞凋亡作用增强。
- 周蕾姜妮周心娜王小利任军
- 关键词：紫杉醇肝癌细胞耐药
- 敲低SET7慢病毒载体的构建及对乳腺癌细胞生长的影响被引量：1
- 2016年
- 目的为了探讨组蛋白甲基转移酶SET7在乳腺癌发生发展中的功能,构建SET7基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,研究其对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法根据人SET7的c DNA序列,设计SET7基因短发夹RNA(shRNA)引物,并克隆到p SIH-H1-Puro载体上,包装成慢病毒,感染人乳腺癌细胞ZR75-1,通过实时定量(real-time)PCR以及Western印迹检测干扰效果,并通过生长曲线研究敲低SET7对ZR75-1细胞生长的影响。结果 DNA测序结果表明,SET7 shRNA慢病毒表达载体构建成功。实时定量PCR和Western印迹结果显示,SET7 shRNA能有效抑制SET7基因的表达。生长曲线实验表明,敲低SET7可抑制人乳腺癌细胞ZR75-1的生长。结论成功构建了SET7 shRNA慢病毒表达载体,感染人乳腺癌细胞ZR75-1后,有效抑制了内源SET7基因的表达,敲低SET7能抑制ZR75-1细胞的生长,为进一步研究SET7在乳腺癌中的功能奠定了基础。
- 周蕾姜妮王小利刘婕丁丽华
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰乳腺肿瘤
- E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白启动子的构建及活性测定被引量：1
- 2014年
- 目的构建含有E-钙黏蛋白(cadherin)基因和N-钙黏蛋白基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测E-钙黏蛋白启动子和N-钙黏蛋白启动子的活性。方法利用PCR技术从乳腺癌细胞ZR75-1基因组中扩增出E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白启动子片段,插入到荧光素酶报告基因载体p GL4-basic中,确定所扩增的DNA序列后,将其转染至乳腺癌细胞ZR75-1和肝癌细胞Hep G2中,检测启动子的活性。结果测序结果表明,扩增的E-钙黏蛋白启动子序列正确;荧光素酶活性实验表明,E-钙黏蛋白启动子和N-钙黏蛋白启动子在乳腺癌细胞ZR75-1和肝癌细胞Hep G2中表达都具有活性。结论成功构建了E-钙黏蛋白启动子和N-钙黏蛋白启动子报告基因表达载体,为进一步筛选调节E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白表达的转录因子提供了重要基础。
- 周蕾张亚楠刘婕丁丽华叶棋浓
- 关键词：E-钙黏蛋白启动子荧光素酶报告基因
