国家重点基础研究发展计划(2011CB944200)
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 相关作者：许成盛李小兵叶雷李红李思更多>>
- 相关机构：中国科学院广州生物医药与健康研究院吉林大学云南农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 利用CRISPR/Cas9系统构建TiKi1和TiKi2双基因敲除兔
- 2020年
- Tiki基因为新发现的基因,在蛙上的功能研究证实Tiki在头部诱导的过程中起着决定性的作用。由于TiKi基因包含TiKi2和TiKi1两种类型,因此建立一种同时敲除TiKi2和TiKi1两种基因的兔模型,能更好地研究TiKi基因是否影响兔头部的早期发育。本研究通过CRISPR/Cas9系统结合原核期受精卵RNA胞质内显微注射来建立家兔双基因打靶技术体系。考虑到TiKi1和TiKi2的同源性比较高,可能相互之间存在补偿效应,于是设计了一个gRNA能同时靶向TiKi1和TiKi2。将200 ng/μL Cas9 mRNA和20 ng/μL gRNA注射到51个处于原核期的家兔受精卵的胞质内,移植到6只受体兔体内,共计生出12只仔兔,经测序鉴定其中有1只仔兔为TiKi1和TiKi2双等位基因敲除模型。结果表明CRISPR/Cas9系统对于家兔双基因修饰研究是一种高效和简便的工具,成功建立的TiKi1和TiKi2双基因敲除兔模型在评估新药疗效、基因治疗等的研究领域中将具有很大的应用潜力。
- 吴彩霞刘朝明颜泉梅张全军欧阳振赵宇樊娜娜赖良学
- 关键词：家兔
- 利用TALEN系统对兔进行Tiki1基因敲除被引量：1
- 2020年
- 【目的】利用转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)系统获得Tiki1基因敲除的兔模型,为研究Tiki1对动物早期发育作用机理提供兔源的动物模型。【方法】基于TALEN系统设计了靶向兔Tiki1基因的打靶载体,分别将10和50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到原核期的家兔受精卵胞质中,然后收集发育至囊胚期的胚胎,鉴定囊胚率和基因修饰效率,通过测序检验囊胚的基因突变。为了进一步获得Tiki1基因敲除兔,后续将50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到17个原核期的家兔受精卵胞质中,将受精卵分别移植到2只受体兔体内。【结果】注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚率(64%)与注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚率(57%)差异不大,但注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚基因修饰效率(100%)显著高于注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚基因修饰效率(14.3%)。测序结果表明,Tiki1基因的突变范围从1到28 bp缺失不等。经过胚胎移植共生出3只仔兔,其中有2只兔子能检测到基因突变。【结论】所建立的TALEN技术体系可以对家兔Tiki1基因进行高效的敲除。
- 吴彩霞刘朝明颜泉梅张全军欧阳振赵宇樊娜娜赖良学
- 关键词：TALEN囊胚基因敲除基因修饰
- 成年版纳微型猪近交系克隆猪的制备被引量：11
- 2012年
- 本研究以版纳微型猪近交系成年母猪为材料,采用冷胰酶消化法获得成年猪成纤维细胞后,进行细胞的生物学特征检测,研究其作为供体细胞对体细胞核移植效果的影响。结果表明,版纳微型猪近交系成年猪的成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,细胞冻存前和复苏后存活率分别为97.2%和92.6%(P>0.05),生长曲线呈"S"形,细胞群体倍增时间为36h,体外培养14代后仍能保持正常核型。以其作为核移植供体细胞,核移植重构胚卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数分别为61.9%、13.0%和37枚,移植了重构胚的3头代孕母猪均妊娠,并且有1头母猪产下1头正常的克隆猪。综上所述,利用版纳微型猪近交系成年猪能建立稳定的成纤维细胞系,该细胞系作为核移植供体细胞可获得版纳微型猪近交系克隆猪。
- 叶雷李红魏红江许成盛卿玉波潘伟荣李鸿辉成文敏富国文信吉阁李思魏太云李小兵张崇义汪霞曾养志
- 关键词：细胞培养生物学特征体细胞核移植
- BDNF及其信号通路在酒精成瘾和毒性中的作用被引量：2
- 2012年
- 酒精摄入以及由此产生的相关问题已经是人类社会面临的一个重要的公共卫生问题,但是关于其发生的机制和相关应对措施一直没有取得很好的进展。近年来,BDNF（Brain Derived Neurotrophic Factor）信号通路被作为药物成瘾研究的靶标，在酒精成瘾和毒性方面也得到了很多研究。本文综述几年来酒精成瘾机制研究取得的一些进展，详细介绍BDNF及其信号通路在酒精成瘾和毒性方面的作用，以及BDNF基因多态性跟酒精依赖和酒精相关特征的关联性，期待能够对国内相关领域的研究人员提供参考。
- 杨延磊李力燕
- 关键词：酒精成瘾胎儿酒精综合征脑源性神经营养因子
- 神经退行性疾病转基因猴模型的构建及相关技术体系建立
- 2020年
- 非人灵长类动物因与人有最近亲缘关系而成为研究人类生命领域最高级模式动物。本研究采用慢病毒载体技术结合胚胎工程技术,拟建立一套高效简便转基因猴制作技术体系,建立小脑共济失调转基因猴模型,为该病研究提供最为理想动物模型,同时为建立其他疾病转基因猴模型提供技术路线。利用卵泡浆内单精子显微注射技术(Introeytoplasmiesperm injection,ICSI)技术总共构建88个体外受精胚胎,经过体外培养共计32枚发育到原核期并进行病毒注射后移入7只受体猴输卵管内。B超妊娠检测,怀孕3只,其中:1只未能发育到期中间流产,1只发育到期生1死胎,1只顺产生1只活试管猴,经过人工喂养奶粉后健康存活,但经检测转基因为阴性。本研究虽然未能通过病毒注射获得阳性转基因猴,但对食蟹猴(Macaca fascicularis)超数排卵及B超监测卵泡发育技术、卵母细胞回收及体外成熟培养技术、电刺激采精及精子获能技术、食蟹猴体外受精技术和胚胎体外培养技术以及胚胎移植等技术体系进行多次探索和优化,并成功建立相关技术平台,将为后续利用试管猴技术结合高效的TALEN和CRISPR/Cas9等基因编辑工具获得各种疾病模型奠定基础。
- 吴彩霞刘朝明张全军颜泉梅赵宇张秀娟刘晓明欧阳振樊娜娜赖良学
- 关键词：卵胞浆内单精子显微注射体外受精疾病模型
- 糖尿病和心血管病相关的重要靶点基因PPARγ过表达转基因克隆猪模型的建立被引量：3
- 2020年
- 动物模型是科学研究不可缺少的工具,特别是对于人类疾病相关的研究,受到取材和伦理道德的限制,很多研究无法直接在人体中进行,必须首先依靠动物模型进行广泛的试验和评估。猪的心血管系统在结构和功能上与人类非常相似,例如脉搏,在静息状态下,人的脉搏每分钟60~90次,猪的则为65~80次。猪的动脉循环系统几乎是人的动脉循环系统的复制品。目前,以猪作为动物模型来研究动脉粥样硬化和心肌梗塞等心血管疾病,是猪作为人类疾病模型应用最为成功的范例之一。PPARγ是噻唑烷二酮类药物的靶点,科学家们利用小鼠的研究结果表明,噻唑烷二酮类药物在治疗糖尿病的同时对心血管系统也有保护作用,但由于小鼠心血管系统与人类相差甚远,使得小鼠的研究结果与近年临床上观察到的病人心脏毒副作用不一致。因此,科学家们急需建立与人类更为接近的大动物模型来研究糖尿病及其心血管并发症,由于猪的心血管系统与人类接近,猪成为理想的研究糖尿病和心血管疾病的动物模型。我们共计构建了1100枚重构胚胎,分别移植到5头受体猪内,经B超鉴定3头怀孕,共计出生8头猪,经PCR鉴定8头全为阳性猪模型。结果表明我们利用体细胞核移植技术成功建立了糖尿病和心血管病相关的重要靶点基因PPARγ过表达转基因克隆猪模型。
- 吴彩霞刘朝明颜泉梅张全军欧阳振赵宇樊娜娜赖良学
- 关键词：糖尿病PPARΓ转基因克隆猪模型
