国家高技术研究发展计划(2011AA10A211)
- 作品数：24 被引量：85H指数：6
- 相关作者：贾怀杰景志忠张永光何小兵潘丽更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- A型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效力评价被引量：3
- 2013年
- 【目的】研制A型口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)新型合成肽疫苗,为畜牧业减少经济损失。【方法】应用两种含有口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)AF/72株VP1[131-159]、VP4[20-35]、3A[21-35]和3B[29-42]4个抗原表位的合成肽联合CpG寡聚脱氧核苷酸(5'-TCGCGAACGTTCGCCCGATCGTCGGTA-3')在豚鼠上进行了免疫效力评价。【结果】2.5μg/只的合成肽364能保护4/5的豚鼠免受FMDV AF/72株的攻击,灭活苗组获得完全保护,其他组的保护效力仅为3/5;保护效力最高的两组的外周血CD4+T淋巴细胞含量高达33.7%和36.6%,而其他组不超过27.7%,PBS组仅为18.1%。【结论】本研究筛选出一组免疫效力较好的口蹄疫A型合成肽疫苗,可以作为候选疫苗进行进一步评价。
- 唐华刘新生方玉珍蒋守田潘丽吕建亮张中旺周鹏张永光王永录
- 关键词：合成肽CPG寡聚脱氧核苷酸CD4+T淋巴细胞
- 型内嵌合口蹄疫病毒全长感染性cDNA克隆的构建被引量：2
- 2012年
- 【目的】近年来,O型口蹄疫的不断暴发严重危害了我国畜牧业的发展,其病原——O型口蹄疫病毒已演化出3种谱系:中国型猪毒系、泛亚系和缅甸98系。其中中国型猪毒系病毒高度嗜猪,对养猪业危害最大。目前应用的疫苗已不能有效保护中国型猪毒系变异株的流行,这给我国猪口蹄疫的防控带来了极大的困难。为了进一步发展免疫原性好、抗原谱广的猪O型口蹄疫疫苗候选株,本研究以O/HN/93现用疫苗毒株的感染性克隆为骨架,用流行的新猪毒系病毒的部分VP3和VP1基因(主要是替换VP1蛋白上的B-C环和G-H环)替换疫苗毒株的相应部分,构建了嵌合的FMDV全长cDNA克隆。【方法】线化的嵌合全长质粒和表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,体内转录拯救嵌合病毒。【结果】嵌合全长质粒转染BHK-21细胞36h后,出现明显的FMDV致细胞病变效应。对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光、电子显微镜观察结果证实成功拯救到嵌合的FMDV。拯救的病毒乳鼠致病性试验结果表明该拯救病毒对乳鼠的致病力减弱。该嵌合病毒的成功拯救为研制口蹄疫新型疫苗等奠定了基础。
- 李平花白兴文卢增军孙普祁国财韩成昊刘在新
- 关键词：口蹄疫病毒
- 痘病毒病:值得高度重视的一类人兽共患病被引量：6
- 2011年
- 痘病毒（poxvirus）是已知的病毒粒子中基因组最大、最复杂的以及宿主范围最广和成员最多的病毒家族,其大部分成员又都能引起动物源性人兽共患病。目前猴痘、羊口疮、禽痘、鼠痘及羊痘在国内外普遍流行、危害严重。本文通过对动物源性人兽共患痘病毒病的介绍,来促进我国加强对痘病毒病的基础理论研究以及防控技术战略储备,以保障人类、动物健康和国家安全。
- 景志忠贾怀杰周涛
- 关键词：痘病毒公共卫生
- 猪O型口蹄疫基因工程疫苗候选株的构建及其免疫原性分析被引量：3
- 2011年
- 近年来,O型口蹄疫病毒已演化出多种谱系。目前应用的疫苗已不能有效保护多谱系口蹄疫的流行,这给我国猪口蹄疫的防控带来了极大的困难。为了进一步发展免疫原性好、抗原谱广的猪O型口蹄疫疫苗候选株,本研究以O/HN/93现用疫苗毒株的感染性克隆为骨架,构建了含VP3(58位)和VP1(43、48、137、139、140、141和142位)氨基酸改造的全长克隆。线性化的全长cDNA和T7RNA聚合酶质粒共转染BHK细胞后获得拯救病毒。RT-PCR和乳鼠致病性试验表明拯救病毒遗传稳定,具有与亲本病毒相似的致病性。用拯救的基因工程病毒灭活疫苗免疫猪28d后分别用中国谱系、泛亚谱系和缅甸98谱系猪源毒的流行毒攻击,结果均获得了完全保护(16/16)。O/HN/93灭活疫苗免疫猪能完全保护泛亚谱系和缅甸98谱系猪源病毒的攻击(16/16),但不能完全保护(12/16)中国谱系猪源病毒的攻击。结果表明基因工程病毒制备的灭活疫苗提高了对中国型猪源谱系病毒的免疫保护,拓展了抗原谱,是具有良好开发前景的疫苗候选株。
- 李平花白兴文孙普李冬卢曾军包慧芳曹轶梅付元芳陈应理谢宝霞殷宏刘在新
- 关键词：猪口蹄疫免疫原性分析
- 口蹄疫病毒病毒样颗粒研究进展被引量：7
- 2014年
- 口蹄疫病毒病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是不含口蹄疫病毒RNA的空衣壳结构,由口蹄疫病毒的4种结构蛋白体外自组装形成的,形态上与天然病毒粒子相似,具有很强的免疫原性和生物学活性。文章介绍了口蹄疫病毒衣壳的组装、口蹄疫病毒VLPs在国内外的研究进展和影响VLPs形成的因素,并对VLPs在疫苗研制等方面的应用前景作了展望。
- 张庆勋刘新生周鹏方玉珍王永录张永光
- 关键词：口蹄疫病毒病毒样颗粒疫苗
- 重组A型FMDV VP1基因乳酸杆菌穿梭表达质粒的构建及在大肠杆菌BL21中的表达被引量：3
- 2015年
- [目的]构建FMDV乳酸杆菌穿梭表达载体。[方法]从A型FMDV中克隆出VP1基因后,根据乳酸杆菌密码子偏好性对VP1进行优化,与表达载体p SIP411进行连接,并将连接产物转化到DH5α中筛选出阳性克隆菌,重组质粒酶切和PCR鉴定成功后再转化到BL21中,采用杆菌肽进行诱导表达。[结果]表达产物经SDS-PAGE和Western blottmy检测在24 k D处有明显的条带,证明VP1-p SIP411重组表达载体构建成功并在BL21中成功表达。[结论]为后续乳酸杆菌表达VP1蛋白研究奠定了基础。
- 王淼周鹏潘丽张永光
- 关键词：口蹄疫病毒VP1乳酸菌
- 牛外周血T淋巴细胞增殖试验条件的优化被引量：2
- 2012年
- 淋巴细胞增殖试验是体外检测T淋巴细胞功能的一种方法。淋巴细胞在体外培养条件下，与特异性抗原或非特异性有丝分裂原共同培养，使淋巴细胞的代谢和形态发生一系列的变化，可以使较小的淋巴细胞转化为体积较大、代谢旺盛，且能进行有丝分裂的淋巴母细胞。转化的淋巴细胞不仅能呈现出成熟的母细胞形态及蛋白质和核酸的增加，还能合成和释放细胞因子。因此可以使用淋巴细胞增殖试验反映机体的免疫状态。
- 肖进王楠巴利民齐鹏
- 关键词：外周血T淋巴细胞增殖试验体外培养条件淋巴细胞转化有丝分裂原特异性抗原
- 口蹄疫病毒Asia Ⅰ/HeB株不同宿主适应毒及其多克隆抗体的鉴定被引量：1
- 2012年
- 口蹄疫病毒接种乳鼠、豚鼠及BHK-21细胞,获得相应的适应毒。以各组织液中的口蹄疫病毒RNA为模板,反转录并扩增VP1基因,PCR产物琼脂糖凝胶电泳,回收目的片段,测序。测序结果与核酸数据库中口蹄疫病毒VP1基因比对,并将各适应毒扩增的VP1基因序列相互比对。结果表明:此毒为口蹄疫病毒,各适应毒间序列同源性达98%。并用口蹄疫病毒抗原进行SDS-PAGE,分别与大肠杆菌表达的口蹄疫病毒HeB株P1蛋白制备的多克隆兔抗及健康对照血清进行Western blot,对多克隆兔抗进行鉴定,并用间接ELISA测定此多克隆兔抗的效价。确定此多抗能中和FMDV结构蛋白,抗体效价>1∶800。
- 郭少娟张中旺张永光王永录潘丽吕建亮周鹏
- 关键词：口蹄疫病毒多克隆抗体
- 一种新型T细胞免疫原的原核表达及对口蹄疫疫苗的免疫增强作用被引量：1
- 2011年
- 主要探讨了T细胞免疫原TI对口蹄疫疫苗的免疫增强作用。设计并原核表达产生了一种包含口蹄疫病毒VP1,VP4,3A和3D蛋白上多个T细胞表位与两个通用T细胞表位的T细胞免疫原,命名为TI;同时表达了O和Asia 1两个型口蹄疫病毒VP1蛋白的串联编码基因,表达产物命名为OA-VP1。将上述T细胞免疫原分别与OA-VP1和口蹄疫灭活疫苗按不同剂量组合免疫小鼠,于免疫后不同时间测定各组小鼠的体液与细胞免疫应答情况。采用微量中和试验检测小鼠O型和Asia1型中和抗体,采用流式细胞检测技术和测定γ-干扰素的水平来分析不同免疫组小鼠细胞免疫的水平。结果显示,与灭活疫苗或OA-VP1单独免疫组相比,添加TI抗原后灭活疫苗(P<0.01)和OA-VP1免疫组(P<0.05)小鼠均能产生高水平的特异性中和抗体;且CD4+T细胞数量显著增多I,FN-γ产生水平显著升高(P<0.01)。说明TI抗原具有很好的诱导特异性体液与细胞免疫应答的作用,是一种很好的免疫增效剂,可作为口蹄疫蛋白亚单位疫苗和灭活疫苗中的一种有效成分,以提高疫苗的免疫效果。
- 赵清孙普刘在新李平花包慧芳曹轶梅白兴文付元芳卢曾军李冬
- 关键词：口蹄疫病毒T细胞表位灭活疫苗亚单位疫苗
- 正痘病毒干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径被引量：3
- 2011年
- 正痘病毒属的牛痘病毒、痘苗病毒以及猴痘病毒等成员是最重要的动物源性人兽共患病病原。作者围绕这些正痘病毒编码的干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径,重点介绍了病毒阻断宿主干扰素反应、抑制宿主TNF诱导的反应以及失活宿主防御反应的免疫成分等策略,以加深对痘病毒感染的宿主特异性、免疫逃避以及致病的分子机制的理解。
- 景志忠贾怀杰周涛何小兵
- 关键词：病毒感染宿主免疫反应分子机制
