河北省自然科学基金(C2009001091)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
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- A族链球菌表面蛋白FbaA单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能研究被引量：2
- 2012年
- 目的通过侵袭抑制及攻毒试验检测A族链球菌表面蛋白FbaA的单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能，为进一步探索A族链球菌的致病机制和感染后的治疗策略奠定基础。方法通过亚克隆、全菌ELISA方法筛选稳定分泌高效价FbaAmAb2的杂交瘤细胞，并将其接种于小鼠腹腔制备腹水。通过侵袭试验对FbaAmAb2能否阻止H因子与A族链球菌的结合进行研究。而后将获得的腹水倍比稀释为1：1、1：2、1：4、1：8、1：16行试管凝集试验，选定合适的稀释度被动免疫动物后用致死量A族链球菌（FbaA’）标准菌株（7．5×10’个）攻击，连续观察15d计算保护率。结果侵袭试验中FbaAmAb2能够竞争性抑制H因子与A族链球菌表面蛋白FbaA的结合，减少了H因子介导的A族链球菌侵入上皮细胞的数量。与全菌结合的ELISA效价为1：1600，试管凝集效价为1：8。在单抗被动免疫试验中，腹水原液、1：2稀释组的动物保护率高达66．67％，1：4稀释组保护率为50％，经SPSSl0．0统计软件分析各实验组与PBS组保护率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FbaAmAb2有望用于紧急预防及治疗A族链球菌感染，并为深入研究A族链球菌的致病机制、治疗策略及疫苗预防方面提供新的靶标。
- 范秀华刘海楠郑艳张玲姚智燕李文建邢艳超宋小天马翠卿
- 关键词：A族链球菌单克隆抗体补体调节蛋白H因子
- A族链球菌(GAS)Fba蛋白单克隆抗体对应表位核心氨基酸的确定被引量：1
- 2009年
- 目的：对A族链球菌Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位。方法：以初步定位的表位区段为线索合成三段重叠多肽,dot-ELISA检测McAb2与合成肽的亲合力,并以McAb2为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,用竞争ELISA鉴定阳性克隆。结果：dot-ELISA检测结果表明Fba100-112肽段与McAb2的结合能力最强。经过3轮亲和筛选后,随机挑选20个噬菌体克隆,竞争ELISA对其与McAb2的亲和力做检测,其中12个克隆显示较强的阳性结果。阳性克隆DNA测序,与Fba基因第100位氨基酸至110位氨基酸中ITPDL同源性较高。结论：通过dot-ELISA将A族链球菌Fba蛋白McAb2对应的表位定位于100~112位氨基酸,结果同噬菌体随机肽库筛选的核心氨基酸位置吻合。为进一步研制表位肽疫苗、研究Fba蛋白及其单克隆抗体的生物学功能奠定了基础。
- 郭奕阳马翠卿魏澎王秀荣冯惠东阎婉依魏林
- 关键词：A族链球菌单克隆抗体表位噬菌体肽库
- 病原菌操控宿主固有免疫细胞以求生存的机制研究进展被引量：1
- 2011年
- 在急性感染和传统感染模式中,宿主利用固有免疫机制应对一系列病原体的入侵。然而,一些病原菌可以成功逃避、抑制或颠覆免疫检测、信号转导或有效杀伤。该文就病原菌如何操纵宿主细胞的防御功能,调节胞内杀伤、信号转导,破坏固有免疫系统受体间分子信号的交联作用,并最终使微生物在宿主体内适应性生长、持续感染等方面作一综述。
- 张玲梁文章陈敏马翠卿
- 关键词：固有免疫病原菌
- A族链球菌表面蛋白Fba保护性区段的鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的将A族链球菌表面蛋白Fba分段克隆、表达，免疫动物并攻毒，以鉴定各区段诱导的保护性免疫并确定保护性最强的区段。方法根据Fba蛋白的结构特点将其划分为4个重叠区域，以A族链球菌（GAS）的SSI-9为模板，PCR扩增4段蛋白的基因，克隆、表达后，Western印迹鉴定蛋白表达。4段蛋白纯化后分别免疫小鼠，同时设PBS对照组。ELISA检测各免疫组血清IgG水平，并用致死量的GAs（M＋Fba＋）攻击免疫3次后的小鼠，计算各组保护率。数据行方差检验和Fisher精确概率法。结果成功构建原核表达质粒pGEX-2T／FbaA1、pGEX-2T／FbaA2、pGEX2T／FhaA3和pGEX2T／FbaA4，成功表达了4段蛋白。Fba蛋白免疫小鼠后，实验组血清IgG随免疫次数的增加呈逐渐增高趋势。第3次免疫后，与PBS对照组比较，FbaA2蛋白组效价升高最为明显，达1：102400（F=1290．2，P〈0．01）。攻毒后，FbaA2蛋白组8只小鼠中有4只得到保护，FbaA1、FbaA3及FbaA4蛋白组各8只小鼠中，仅2只得到保护（P〈0．05）。结论成功构建、表达了Fba分段蛋白；初步确定FbaA2段可诱导较强的保护性免疫应答。
- 魏澎马翠卿郭奕阳顾海燕冯惠东王秀荣魏林
- 关键词：A族链球菌纤连蛋白类质粒
- A族链球菌诱导巨噬细胞坏死而非凋亡
- 2010年
- 为了研究A族链球菌(GAS)作用巨噬细胞系RAW264.7后,RAW264.7细胞增殖变化的情况,以进一步研究GAS的致病机制。将RAW264.7接种于96孔板,采用低菌量、中菌量和高菌量分别作用于该细胞,培养三天后行MTT检测;用TUNEL及ANNEXIN V-FITC法检测高菌量GAS作用后巨噬细胞是否发生凋亡;透射电子显微镜观察低、中、高菌量GAS作用RAW264.7后细胞超微结构的变化。结果显示低、中菌量GAS对RAW264.7细胞增殖有促进作用;高菌量GAS对细胞增殖有抑制作用,且高菌量GAS作用RAW264.7后诱导大部分细胞发生了坏死而非凋亡。结果表明高菌量GAS引起RAW264.7细胞发生坏死而非凋亡。
- 马翠卿胡光磊杨建岭胡洁张玲冯惠东杨丽娟魏林
- 关键词：巨噬细胞细胞坏死
