湖南省教育厅科研基金(05C471)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：张艳黎村艳刘志杰余敏君于文更多>>
- 相关机构：南华大学湖南省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅科研基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 幽门螺杆菌空泡毒素的研究进展
- 2007年
- 幽门螺杆菌可引起人类多种消化道疾病，全球人群感染率达50％以上。空泡毒素（VacA）是该菌主要致病因子，其致病性随其基因型不同而异。VacA除具有细胞空泡毒素活性以外，还可引起宿主细胞凋亡，并可通过诱导巨噬细胞凋亡、抑制T细胞增殖、干扰B细胞对抗原肽的加工和提呈等多种途径抑制宿主免疫应答，从而有助于幽门螺杆菌在宿主体内长期感染。研究VacA基因型及其致病性对阐明幽门螺杆菌的致病机制和防治具有重要意义。
- 黎村艳张艳
- 关键词：螺杆菌细菌毒素细胞凋亡疫苗
- 幽门螺杆菌VacA N端真核表达载体的构建、鉴定及其诱导巨噬细胞空泡化和凋亡的观察被引量：2
- 2008年
- 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)空泡毒素(Vacuolating cytotoxin,VacA)基因的真核表达载体pDsRed-Monomer-C1/vacA,并在THP-1巨噬细胞中表达,为研究VacA单一毒力决定簇的致病性奠定实验基础。方法用Primer 5.0软件设计引物,以HP基因组为模板,PCR扩增vacA目的基因片段,克隆入真核表达载体pDsRed-Monomer-C1中,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定后,转染THP-1巨噬细胞中,荧光显微镜和Western-blot检测VacA蛋白在细胞中的表达;电镜观察巨噬细胞(MΦ)的空泡样变和凋亡;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果PCR扩增得到了大小约为1 428bp的目的片段,双酶切及测序鉴定证明成功构建了HP真核表达重组载体;转染后24h,重组质粒组部分细胞中有聚集的荧光颗粒,部分细胞发生空泡样变和凋亡改变;细胞凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),细胞核因子-κB(nuclear factorkappaB,NF-κB)的抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制细胞的凋亡。结论VacA蛋白瞬时高表达促进THP-1巨噬细胞空泡样变和凋亡。NF-κB可能参与调节VacA诱导的巨噬细胞凋亡。
- 黎村艳张艳刘志杰余敏君于文
- 关键词：幽门螺杆菌空泡毒素巨噬细胞凋亡
- 幽门螺杆菌Lpp20真核表达重组载体的构建及鉴定
- 2007年
- 目的以幽门螺杆菌外膜脂蛋白Lpp20为目的基因,构建H.pylori Lpp20基因的真核表达重组载体pcD-NA3.1(+)-Lpp20,为H.pylori核酸疫苗的研制奠定实验基础。方法用Pri mer5.0软件分析GenBank中H.pylori外膜脂蛋白Lpp20基因序列,设计合成相应特异性引物,引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,以H.pylori26695株基因组为模板,PCR扩增Lpp20目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1(+)-Lpp20;通过酶切分析,PCR鉴定及测序鉴定,筛选阳性重组体。结果以H.pylori26695株基因组DNA为模板扩增出特异的Lpp20基因片段,大小约为528bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了H.pylori真核表达重组载体pcD-NA3.1(+)-Lpp20。结论PCR扩增得到了大小约为528bp的H.pylori Lpp20目的基因片段;并成功构建了pcD-NA3.1(+)-Lpp20真核表达重组载体。
- 刘志杰张艳余敏君方明礼黎村艳
- 关键词：幽门螺杆菌LPP20
- 幽门螺杆菌VacA N端在巨噬细胞中表达对其细胞因子分泌功能的影响被引量：5
- 2008年
- 构建pDsRed-Monomer-C1/vacA N端真核表达载体,研究幽门螺杆菌空泡毒素单一毒力决定簇对THP-1巨噬细胞细胞因子分泌的影响。PCR扩增vacA目的基因片段,克隆入真核表达载体pDsRed-Monomer-C1中,经酶切、PCR及测序鉴定后,转染THP-1巨噬细胞中,Western blot和荧光显微镜鉴定VacA蛋白在细胞中的表达;电子显微镜和中性红摄入法观察巨噬细胞的空泡样变;ELISA法检测巨噬细胞培养上清TNF-α、IL-1β含量。重组质粒转染THP-1巨噬细胞24h,部分细胞胞浆中出现大小不等的空泡,且重组质粒组培养上清中TNF-α、IL-1β含量明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)下调细胞因子的分泌。结果显示,成功构建pDsRed-Monomer-C1/vacA真核表达载体;VacA蛋白瞬时高表达上调THP-1巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β;核因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)可能参与调节VacA诱导的THP-1巨噬细胞的分泌。
- 黎村艳张艳刘志杰余敏君于文
- 关键词：幽门螺杆菌空泡毒素巨噬细胞细胞因子
