国家科技重大专项(2014ZX09507003-003)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 相关作者：陈晨叶菜英鞠瑞李娟郭磊更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 羧胺三唑通过肿瘤相关巨噬细胞间接抑制肿瘤细胞的迁移被引量：1
- 2014年
- 目的通过体外诱导探索肿瘤相关巨噬细胞(TAM)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肿瘤细胞增殖和迁移的影响;在此基础上研究羧胺三唑(CAI)是否可以通过影响TAM及其来源的TNF-α间接抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。方法建立腹腔巨噬细胞或RAW264.7细胞与Lewis肺癌细胞(LLC)的共培养体系,研究巨噬细胞对LLC细胞增殖和迁移的影响;观察TNF-α或其中和抗体对LLC增殖或迁移的影响;向共培养体系中加入CAI和(或)地塞米松(DEX),观察药物对巨噬细胞诱导的LLC增殖的影响;用CAI和(或)DEX预先处理RAW264.7细胞,然后检测不同药物处理组RAW264.7细胞诱导LLC细胞迁移和TNF-α表达的差异。结果与腹腔巨噬细胞共培养的LLC细胞比单独培养的LLC细胞的增殖显著增加,在最为明显的一组中,前者比后者的增殖增加(422.5±77.7)%;与RAW264.7细胞共培养的LLC细胞比单独培养的LLC细胞迁移增加(98.8±6.2)%。在这两个过程中,TNF-α均发挥重要作用,0.1 ng/ml TNF-α增加LLC细胞增殖的作用显著,0.1μg/ml TNF-α中和抗体即可显著抑制巨噬细胞对LLC细胞的迁移诱导作用;CAI预处理的RAW264.7细胞促进LLC细胞迁移的能力减弱,其中TNF-α表达相比仅用LLC条件培养基诱导的对照组显著降低(CAI预处理组与对照组TNF-α的相对表达量为0.66±0.03 vs.1.00±0.05,P<0.01)。结论巨噬细胞和TNF-α对LLC细胞的增殖和迁移有显著影响;CAI可以通过下调肿瘤条件诱导的巨噬细胞中的TNF-α水平间接抑制肿瘤细胞的迁移。
- 鞠瑞陈晨郭磊李娟叶菜英张德昌
- 关键词：肿瘤坏死因子A细胞运动肿瘤相关巨噬细胞羧胺三唑
- 利用四唑盐染料WST反映巨噬细胞受脂多糖刺激活化后的氧化应激和代谢变化
- 2015年
- 目的通过四唑盐染料显色方法分析巨噬细胞受脂多糖刺激后的氧化应激和代谢变化,分析这种方法在炎症研究中的应用价值。方法通过活细胞计数方法和CCK-8检测试剂分别检测RAW264.7巨噬细胞的活力;用CCK-8和WST-1显色方法研究超氧阴离子的释放;用DCFH-DA荧光染色和流式细胞术检测细胞内活性氧的生成;用乳酸检测试剂盒和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD+(H)检测试剂盒分别检测上清中乳酸和细胞内NADH的含量。结果经脂多糖刺激的RAW264.7细胞的活细胞计数结果和CCK-8显色结果存在反差;相同数目的正常培养细胞和脂多糖刺激细胞的CCK-8显色比较,后者读数显著升高,超氧化物歧化酶能够下调CCK-8显色读数,WST-1显色结果与CCK-8一致,脂多糖刺激细胞中的活性氧含量显著增加;脂多糖导致RAW264.7细胞上清中的乳酸含量和细胞内的NADH含量显著增加。结论应用WST染料测定经脂多糖刺激的RAW264.7细胞活力时,测定结果会受到细胞中还原性物质——超氧阴离子和NADH含量变化的干扰。通过WST-1或WST-8显色实验,可验证脂多糖能够刺激RAW264.7巨噬细胞发生氧化应激和能量代谢变化。这一显色实验在炎症研究和药物筛选中可能有重要应用价值。
- 鞠瑞陈玮陈晨郭磊李娟叶菜英张德昌
- 关键词：脂多糖类氧化性应激能量代谢
- 羧胺三唑抑制肿瘤细胞诱导的巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α的释放被引量：2
- 2014年
- 目的观察体外培养的肿瘤细胞对巨噬细胞炎症因子——肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的诱导作用;初步探索羧胺三唑(CAI)对肿瘤诱导的巨噬细胞中TNF-α释放的影响。方法利用transwell装置,建立Lewis肺癌细胞(LLC)与RAW264.7巨噬细胞共培养体系,采用荧光定量PCR方法和ELISA方法分别分析RAW264.7中TNF-α的表达和释放;用LLC条件培养基(LCM)诱导RAW264.7,同时给予CAI处理,采用CCK-8方法分析LCM和CAI对RAW264.7活力的影响,采用ELISA方法分析CAI对诱导后的RAW264.7中TNF-α释放的影响。结果与LLC共培养24 h可显著增加RAW264.7中TNF-α相对表达量[单独培养vs共培养,(1.00±0.12)vs(2.23±0.17),P<0.01]和释放[单独培养vs共培养,(65.21±12.76)vs(143.92±19.22)pg/ml,P<0.05];LCM和CAI在1 h和4 h对RAW264.7活力没有影响,CAI可以显著抑制LCM对RAW264.7中TNF-α释放的诱导(4 h,P<0.01)。结论 LLC肿瘤微环境可以诱导RAW264.7中TNF-α的表达增加;CAI对这种诱导的抑制使其在肿瘤环境中表现出一定的抗炎作用,可能是其抗肿瘤作用的机制之一。
- 鞠瑞陈晨郭磊李娟叶菜英张德昌
- 关键词：肿瘤坏死因子巨噬细胞共培养羧胺三唑
- 羧胺三唑联合地塞米松有效缓解小鼠过敏性气道炎症
- 2017年
- 目的评价羧胺三唑(CAI)联合地塞米松对小鼠过敏性气道炎症的治疗效果,为哮喘性疾病探索安全、有效的联合用药方案。方法将小鼠分为对照组、模型组、40 mg/kg CAI治疗组(CAI40)、低剂量地塞米松治疗组(DL)、高剂量地塞米松治疗组(DH)、低剂量地塞米松联合20 mg/kg CAI治疗组(DL20)、低剂量地塞米松联合40 mg/kg CAI治疗组(DL40)。建立过敏性哮喘模型,取肺泡灌洗液(BALF),ELISA法检测其中IL-4、IL-13、IFN-γ水平;计BALF中总细胞数和嗜酸性粒细胞数;ELISA法检测血清中IgE水平;取左肺切片,HE染色后观察肺组织病理水平改变。结果与对照组相比,模型组小鼠呈现出明显的气道炎症反应,包括BALF中IL-4、IL-13水平及炎性细胞数明显升高,而IFN-g水平显著降低,血清中IgE水平显著升高,肺组织病理切片的HE染色结果呈现出明显的炎症细胞聚集浸润。与模型组相比,各治疗组均有缓解炎症的效果。联合用药组小鼠的BALF中IL-4、IL-13水平及炎性细胞数均低于CAI40组和DL组,而IFN-γ水平高于三个单药治疗组。联合用药组血清中IgE水平均低于三个单药治疗组。肺组织病理结果显示,联合用药组的肺组织炎症细胞浸润、杯状细胞增生、气道平滑肌增厚等气道重塑程度均低于CAI40组和DL组,与DH组相当。结论低剂量地塞米松联合低、高剂量羧胺三唑对卵清蛋白诱导的小鼠过敏性气道炎症有良好的治疗效果,比单药治疗组表现出更强的抗炎作用。因此,适当降低地塞米松剂量,通过联合羧胺三唑来治疗过敏性气道炎症,减少地塞米松耐药性和依赖性等不良反应,或可成为治疗过敏性气道炎的一种新方法。
- 孙芳蕊陈晨石婧鞠瑞朱蕾李娟叶菜英郭磊
- 关键词：羧胺三唑地塞米松哮喘气道炎症
- 羧胺三唑抑制肺癌Lewis细胞生长的机制及抑瘤作用优化探索被引量：1
- 2015年
- 目的研究羧胺三唑(CAI)对小鼠肺癌Lewis细胞(LLC)中环腺苷酸(c AMP)相关磷酸二酯酶(PDE)活性的影响;研究腺苷酸环化酶激动剂Forskolin是否能增强CAI的抑瘤作用。方法通过改良的Thompson和Appleman两步同位素法对LLC细胞中c AMP相关PDE的活性进行检测,以PDE4特异性抑制剂洛利普兰(Rol)作为CAI的阳性对照;通过台盼蓝斥染实验对LLC活细胞进行计数,检测Forskolin对CAI抑瘤作用的影响,以双丁酰环腺苷酸(db-c AMP)验证LLC细胞对c AMP含量增加的敏感性。结果 CAI可剂量依赖性地抑制LLC细胞中c AMP相关PDE的活性,CAI与Rol的IC50分别为5.62×10-6 mol/L和1.88×10-8 mol/L。Forskolin和db-c AMP均可剂量依赖性地抑制LLC细胞的活性。CAI与Forskolin合用的抑瘤作用显著优于CAI单用,CAI5μmol/L单用时的抑制率为(32.9±10.3)%,与Forskolin 10μmol/L合用后抑制率可达(67.4±3.76)%(P<0.05)。结论抑制c AMP相关PDE的活性可能是CAI抑制LLC细胞活力的机制之一。通过与升高c AMP的药物如Forskolin合用,可进一步优化CAI的抗肿瘤作用。
- 鞠瑞陈晨陈玮郭磊李娟叶菜英张德昌
- 关键词：羧胺三唑环腺苷酸FORSKOLIN
