吉林省科技厅科研基金(20060564)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 一种迅捷、经济及高效回收DNA片段方法的建立被引量：1
- 2008年
- 目的:建立一种迅捷、经济、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:以二氯二甲基硅烷硅化晴纶纱,以硅化的晴纶纱作为过滤垫层,冻融处理凝胶,离心收集液体,计算不同硅化晴纶纱厚度、不同冻融时间、不同离心力、不同离心时间和不同DNA片段长度的DNA回收率。结果:用硅化晴纶纱从凝胶中回收DNA时,0.5～2.0mm硅化晴纶纱厚度DNA片段回收率均在85%左右,提示不同硅化晴纶纱厚度对DNA片段回收率影响较小;冻融时间在30min前,随着冻融时间延长,回收率上升明显,至30min回收率达85%,再增加冻融时间回收率变化不显著,提示冻融时间对回收率影响较大,冻融时间应为1h;在5000r.min-1前,随着离心力增加,回收率上升明显,至5000r.min-1回收率达85%,再增加转速,回收率有略微上升,提示离心力对回收率影响较大,离心力应超过10000r.min-1(约合10000g);以10000r.min-1离心,30min前,离心时间对回收率影响较大,至30min时,回收率达85%,增加离心时间,回收率不再增加;250～2000bp长度DNA片段,回收率为80.7%～88.4%,即使100bp小片段回收率也能达到76%以上,表明片段大小对回收率影响较小,说明本方法的有效性。结论:硅化晴纶纱厚度0.5～2.0mm,冻融时间≥1h,离心力≥10000g,离心时间30minDNA回收率较高;硅化晴纶纱法可以高效地从电泳凝胶中回收目的DNA片段。
- 杨春伟孙妙囡孙德军
- 关键词：DNA回收
- 牛胰脏RNA Ⅱ的制备
- 2007年
- 目的：改进从牛胰脏制备RNAⅡ的方法，以降低成本，减少污染排放，提高产品的质量和收率。方法：采用酶-苯酚-氯仿稀盐法，替代传统方法的大剂量苯酚多次萃取法从牛胰脏提取RNAⅡ。结果：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ，制剂A260／A230、A260／A280的比值分别达到2．1和1．9以上，传统工艺为1．44和1．63；DNA含量控制在2％以下，传统工艺为6．2％；有机试剂消耗降低明显，由传统工艺的18000mL苯酚·kg^-1牛胰脏降低到600和300mL氯仿·kg^-1牛胰脏；成本由原来的253元·g^1牛胰脏核糖核酸降到11～14元·g^1牛胰脏核糖核酸。结论：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ中蛋白、多糖含量较低，纯度较传统方法有较大提高；该方法可减少有机试剂用量，减少污染排放，使生产成本大幅度下降；本工艺适合大规模生产RNAⅡ。
- 赵轶卓孙妙囡孙德军
