河北省自然科学基金(2004000631)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
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- 小鼠IFN-γ基因佐剂对分泌型柯萨奇病毒B3 VP1核酸疫苗免疫作用的影响被引量：4
- 2006年
- 目的构建小鼠IFN-γ真核表达质粒,观察其对分泌型柯萨奇病毒B3(CVB3)核酸疫苗的影响.方法以RT-PCR扩增小鼠IFN-γ基因,构建真核表达重组质粒pcDNA3/mIFN-γ,检测其在cos-7细胞内的表达;将分泌型pcDNA3/sVP1,pcDNA3/sVP1+pcDNA3/mIFN-γ肌注免疫小鼠,每2wk注射1次,共3次,每次免疫后13d取血测血清抗体水平.末次免疫后2wk,以500TCID50的CVB3腹腔内感染,观察小鼠的存活情况.结果成功构建了pcDNA3/mIFN-γ并能有效表达;pcDNA3/sVP1组和pcDNA3/sVP1+pcDNA3/mIFN-γ组均能诱导小鼠产生中和抗体,抗体滴度随免疫次数的增加而提高,但两组小鼠抗体滴度和生存率无显著性差异;混合质粒注射组血清的病毒滴度明显低于pcDNA3/sVP1组,且心肌病理损伤明显减轻.结论IFN-γ作为基因佐剂,在一定程度上增强了分泌型CVB3VP1基因疫苗的免疫保护作用.
- 揣侠高志云房文亮金玉怀张永红谢立新王永祥
- 关键词：小鼠
- 小鼠IFN-γ真核表达质粒的构建及表达
- 2006年
- 目的构建重组小鼠干扰素γ(mIFN-γ)真核表达系统,并检测其在cos-7细胞中的表达。方法用RTPCR方法,从ConA活化的小鼠脾细胞中扩增出mIFNγcDNA,将其克隆至pGEMT载体上,测序正确后,再定向连接到真核表达载体pcDNA3中,经DEAEDextran转染至cos7细胞,检测其在细胞内外的表达。结果RTPCR扩增的mIFNγcDNA与GenBank中mIFNγ序列一致。构建的真核重组表达质粒pcDNA3/mIFNγ转染cos7细胞后,可检测到mIFN-γ的转录和表达。结论已成功构建了mIFNγ真核表达系统,为抗病毒基因疫苗的研究奠定了基础。
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- 关键词：干扰素Γ克隆真核表达小鼠
- 接头长度对MDC与CVB3VP1融合基因疫苗免疫效果的影响被引量：11
- 2007年
- 目的构建表达不同接头(linker)长度的巨噬细胞源趋化因子(MDC)与CVB3VP1融合基因疫苗,观察接头长度对融合基因疫苗免疫效果的影响。方法构建表达接头长度分别为10、15和19个氨基酸的重组质粒pcDNA3/MDC-L-VP1;将6～8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为A～E5组,分别肌肉注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-L10-VP1、pcDNA3/MDC-L15-VP1和pcDNA3/MDC-L19- VP1,每次接种100μg/只,4周注射1次,共3次,每次免疫后第14天眼眶静脉采血,用微量中和试验滴定血清中和抗体效价。第3次免疫后3周,每组取3只小鼠,制备脾细胞,用CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性;每组取3只小鼠以3LD_(50) CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血中病毒滴度。结果成功构建了3种不同接头长度的质粒;第3次免疫后,E组中和抗体滴度和小鼠脾淋巴细胞特异性CTL杀伤活性显著高于其他各组,血中病毒滴度显著低于其他各组(P<0.01)。结论融合基因疫苗pcDNA3/MDC-L19-VP1能诱导小鼠对CVB3VP1产生较强的体液和细胞免疫,有效地抑制了病毒的增殖。
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- 关键词：柯萨奇病毒B3接头基因疫苗
