国家高技术研究发展计划(2006AA02A102)
- 作品数：33 被引量：49H指数：4
- 相关作者：卢光琇林戈袁丁周静潘艺更多>>
- 相关机构：中南大学国家工程研究中心同济大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 携带Bcl-xl基因的重组慢病毒的制备和鉴定
- 2010年
- 目的制备携带Bcl-xl基因的重组慢病毒,并鉴定其感染细胞有效性。方法从本所以前构建的重组质粒pAAV-Bcl-xl获得Bcl-xl基因的编码序列,将其置换掉慢病毒质粒pSin-EF2-SOX2-Pur中的SOX2基因编码序列,从而得到重组慢病毒质粒pSin-EF2-Bcl-xl-Pur。然后利用这一质粒包装制备了携带Bcl-xl基因的重组慢病毒颗粒,用其感染细胞后用Western blot和流式检测仪分析了感染前后细胞中Bcl-xl基因的表达情况。结果感染后细胞中Bcl-xl蛋白的表达水平显著高于感染前。结论携带Bcl-xl基因的重组慢病毒颗粒包装成功,能高效感染细胞,为后续的遗传改造树突细胞打下了基础。
- 李工博卢光琇
- 关键词：BCL-XL基因重组慢病毒树突细胞
- 人胚胎干细胞向神经上皮祖细胞的诱导分化被引量：5
- 2010年
- 人胚胎干细胞具有自我更新和多向分化潜能,是研究早期胚胎发育和细胞替代治疗的重要细胞来源.采用一种与小鼠成纤维细胞共培养的方法进行人胚胎干细胞的神经诱导,可产生高纯度的神经上皮祖细胞,其神经上皮特异性基因的表达有一定的时空性;诱导生成的神经上皮祖细胞具有增殖潜能并可分化为神经元和星型胶质细胞,是潜在的神经干细胞.人胚胎干细胞来源的神经上皮祖细胞为研究神经发育和神经诱导提供了新材料,也为神经系统疾病的细胞替代治疗提供了新的细胞来源.
- 袁丁林戈卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞
- 人类胚胎干细胞分化过程中DPPA2基因的表达情况分析(英文)被引量：3
- 2010年
- DPPA2(Developmental Pluripotency-Associated gene2)是近年来发现的在多能性细胞中特异表达的一个基因,它被认为参与维持干细胞的"干性".但目前为止,并没有关于该基因在人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化过程中的表达情况的报道,其功能也尚不清楚.通过Real-time PCR对DPPA2基因在hESCs分化过程中的表达情况进行分析,此外还对其在异常核型hESCs,人类胚胎癌细胞(human embryonic carcinoma cells,hECCs)NTERA-2以及其它5种癌细胞中的表达情况进行检测.结果表明DPPA2基因在hESCs中特异表达,其表达水平随着hESCs的分化而显著下调.该基因在异常核型hESCs和NTERA-2细胞中也有表达,但在其它肿瘤细胞中未检测到该基因的表达.此外,以EGFP-N1系统为基础的亚细胞信号定位结果表明,DPPA2是一个核蛋白.这些结果提示,DPPA2基因可能在维持hESCs特性的过程中发挥着重要的作用.
- 陈天姬杜娟杜丽丽欧阳琦卢光琇
- 关键词：人类胚胎干细胞干性核蛋白
- 锌指蛋白297B协同Myocardin调节平滑肌细胞的分化被引量：4
- 2010年
- 目的探讨锌指蛋白297B在平滑肌细胞分化过程中的表达及相关机制。方法用定量实时多聚酶链反应检测锌指蛋白297B在人、大鼠和小鼠平滑肌细胞中体内/体外的表达量及在平滑肌细胞体内和体外分化或增殖过程中的表达变化;构建锌指蛋白297B-Myc表达质粒,免疫荧光检测锌指蛋白297B-Myc在大鼠平滑肌细胞中的表达分布;用荧光素酶活性检测及免疫共沉淀实验检测锌指蛋白297B与Myocardin的结合及相互作用。结果锌指蛋白297B在平滑肌细胞中特异性高表达,在小鼠胚胎干细胞向平滑肌细胞分化过程中表达上调,在血小板源性生长因子BB刺激的平滑肌细胞增殖过程中下调,在大鼠颈动脉球囊损伤内膜修复过程中表达先上调后下降。锌指蛋白297B主要分布于细胞核及核周的细胞质。锌指蛋白297B能与Myocardin蛋白结合,荧光素酶活性检测显示锌指蛋白297B的表达受Myocardin的调控。结论锌指蛋白297B可能在平滑肌细胞分化过程中起到重要正向调控作用,这一作用很可能是通过锌指蛋白297B与Myocardin的协同作用来完成。
- 孙璇卢光琇
- 关键词：MYOCARDIN平滑肌细胞分化
- 层黏连蛋白和Matrigel对人胚胎干细胞源性神经上皮祖细胞向神经分化的影响
- 2010年
- 目的比较层黏连蛋白和Matrigel在人胚胎干细胞源性神经上皮祖细胞向神经细胞分化过程中的作用。方法人胚胎干细胞诱导分化的神经上皮祖细胞,比较其在层黏连蛋白和Matrigel处理的培养皿上贴壁增殖能力,免疫荧光染色检测神经上皮祖细胞标记Nestin和Musashi,神经元标记Tuj1和星型胶质细胞标记GFAP。结果神经上皮祖细胞在2种细胞外基质上贴壁率相近,但层黏连蛋白组的神经突起形成率和Tuj1阳性细胞比例分别为(97±2)%和(75±5)%,明显高于Matrigel组的(89±3)%和(50±5)%(P<0.05)。结论层黏连蛋白是神经上皮祖细胞向神经元分化的重要细胞外基质。
- 袁丁林戈卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞神经分化层黏连蛋白
- 人胚胎干细胞系chHES-20表达生殖细胞分化相关基因
- 2010年
- 目的探讨人胚胎干细胞系chHES-20能否表达生殖细胞分化相关基因。方法反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测chHES-20细胞系生殖细胞特异基因的表达情况,以人正常睾丸组织作为阳性对照,以人成纤维细胞为阴性对照。结果胚胎干细胞系chHES-20表达全能性相关基因OCT4、NANOG和SOX2,同时表达减数分裂前生殖细胞标志基因DAZL和FRAGILIS;不表达减数分裂特异标志基因联会复合体基因3(SCP3)和生殖细胞分化后期标志基因VASA。结论 chHES-20胚胎干细胞系具有向生殖细胞诱导分化的潜能。
- 彭翠英卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞生殖细胞分化基因反转录-聚合酶链反应
- 拟胚体法诱导人胚胎干细胞神经分化的研究
- 2010年
- 目的研究胚胎干细胞（human embryonic stem cells,HESC）向神经祖细胞分化时,拟胚体（embryoidbody,EB）大小和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对诱导效率的作用。方法采用人胚胎干细胞形成的EB,按照其直径大小分为3组,拟胚体阶段添加或不添加bFGF分组,检测各组的贴壁效率和神经诱导效率。结果直径350~251μm的EB组和EB阶段未添加bFGF组的贴壁率与神经诱导效率高于其他组EB。结论优化EB大小和培养基成分可促进EB的神经诱导分化。
- 袁丁林戈卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞拟胚体神经祖细胞
- sTRAIL基因引起人恶性畸胎瘤细胞与人胚胎干细胞凋亡比较
- 2010年
- 目的:评估sTRAIL基因引起人胚胎干细胞[human embryonic stem(hES)cells]和人恶性畸胎瘤(human malignant teratoma)细胞NTERA-2凋亡的作用。方法:本室已构建的pAAV-PEG3-sTRAIL质粒,转染NTERA-2和hES细胞,用流式细胞仪和定量PCR检测NTERA-2和hES细胞的早期凋亡及sTRAIL基因的受体的表达。结果:NTERA-2细胞经瞬时转染pAAV-PEG3-sTRAIL质粒后,早期凋亡比例达24.4%±2.1%,sTRAIL的死亡受体DR4、和DR5的表达分别上升2和3倍,而hES细胞转染pAAV-PEG3-sTRAIL质粒后,早期凋亡比例仅2.3%±1.2%,受体DR4、DR5、DcR1和DcR2的表达未有明显变化。结论:pAAV-PEG3-sTRAIL质粒可有效地引起人恶性畸胎瘤细胞NTERA-2的凋亡,但是对人胚胎干细胞尚未发现可见的细胞凋亡现象。
- 蒋祥龙潘艺卢光琇
- 关键词：STRAIL凋亡胚胎干细胞
- 小鼠多潜能干细胞来源的内皮细胞的基因表达及功能特点被引量：1
- 2010年
- 目的探讨小鼠成纤维细胞来源的多潜能干细胞向内皮细胞诱导分化的能力。方法采用单层贴壁诱导及流式细胞术进行Flk1+细胞分化与分选,进而与OP9基质细胞共培养,并用VE-cadherin为标志纯化内皮细胞(O9-EC);采用免疫荧光检测分化细胞的内皮细胞特异蛋白表达,检测分化的内皮细胞体外成血管能力,吞噬DiI-Ac标记的低密度脂蛋白和结合荆豆凝集素的功能;采用定量实时PCR检测分化过程中的基因表达。结果流式细胞仪分选得到的分化细胞能表达CD31、VE-cadherin、vWF等表面标志,吞噬DiI-Ac-LDL,结合荆豆凝集素,并能在matrigel上形成血管样结构。分化过程中内皮细胞特异性基因如CD31、Tie2、eNOS等表达上调,而Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc这四种诱导多潜能干细胞形成的转录因子的表达显著下调。结论多潜能干细胞能向内皮细胞诱导分化。
- 孙璇卢光琇
- 关键词：多潜能干细胞内皮细胞诱导分化VE-CADHERIN
- 人孤雌胚胎干细胞与正常胚胎干细胞分化能力的比较被引量：4
- 2010年
- 目的比较人类孤雌胚胎干细胞(pESCs)系与正常胚胎干细胞(nESCs)系的分化能力,探讨pESCs是否和nESCs一样具有多向分化潜能。方法将pESCs和nESCs分别注射到重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内形成畸胎瘤,瘤体组织切片和HE染色后进行组织学分析;将pESCs和nESCs体外悬浮培养形成拟胚体(EB),利用RT-PCR检测3个胚层主要器官以及滋养层细胞发育关键基因的表达;将pESCs和nESCs定向诱导分化为滋养层细胞,通过流式细胞仪测定人绒毛膜促性腺激素-β(hCG-β)阳性细胞比例以及通过酶联免疫吸附测定(ELISA)进行hCG-β的定量分析。结果在体内生长和体外培养过程中,pESCs和nESCs均能够向3个胚层的细胞类型分化。在SCID小鼠体内可形成畸胎瘤,有神经上皮、软骨、腺上皮等3个胚层的衍生物产生;pESCs和nESCs来源的EB在体外自发分化5～21d后,均检测到3个胚层主要器官以及滋养层细胞发育关键基因的表达;pESCs定向分化为滋养细胞后,可以检测到hCG-β的表达,但其阳性细胞比例和分泌量均低于nESCs。结论 pESCs具有向3个胚层以及滋养层细胞分化的能力,但是向滋养层细胞分化的能力仍低于nESCs。
- 欧阳琦林戈周晓樱卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞孤雌胚胎干细胞分化细胞培养
