国家高技术研究发展计划(2006AA02A111)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：梁英民韩骅尹郸丹梁亮李国辉更多>>
- 相关机构：第四军医大学唐都医院第四军医大学第四军医大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 内皮细胞靶向的可溶性Notch配体hD1R蛋白对脐血造血干/祖细胞增殖和植入的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨内皮细胞靶向的可溶性Notch配体hD1R蛋白对脐血造血干/祖细胞增殖和植入的影响.方法 诱导、表达及纯化内皮细胞靶向的可溶性hD1R融合蛋白.以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为支持细胞,联合应用5种人源性生长因子SCF、TPO、FL、IL-6、IL-3及hD1R蛋白,与人脐血CD34＋细胞共培养,分析在PBS组（PBS代替hD1R）、hD1R组、sup组（HUVEC上清代替HUVEC）、fix组（被固定HUVEC代替HUVEC）、Day 0组（未培养的CD34＋细胞）5种不同培养条件下CD34＋细胞增殖、凋亡及细胞周期,并将培养后的细胞经尾静脉移植给亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠,12周后用流式细胞术分析人源性细胞在小鼠体内植入的情况.结果 hD1R组的培养条件对CD34＋细胞有最佳的扩增作用,hD1R组扩增的细胞是Day 0组的87.50倍,是PBS组的7.98倍.hD1R组扩增的细胞约77.0％处于G0/G1期,hD1R明显抑制细胞凋亡,促进细胞增殖.体内移植实验显示hD1R组扩增的细胞在小鼠体内有明显植入优势.结论 成功建立了基于Notch信号的体外扩增体系,hD1R蛋白促进脐血造血干/祖细胞体外增殖及体内植入.
- 田登梅梁英民韩骅张永清
- 关键词：增殖植入
- 急性髓系白血病染色体核型及免疫表型分布及治疗后临床疗效分析被引量：3
- 2015年
- 目的探讨急性髓系白血病染色体改变在急性髓系细胞白血病诊断及预后的意义.方法对48例急性髓系白血病患者进行染色体核型分析及免疫表型分析,并评估治疗后的临床疗效.结果异常核型32例(67%),其中M3患者100%检出t(15;17),M2患者中t(8;21)多见,三体8在数目异常中最为常见.45例初诊AML患者中,共13例患者CD96(28.9%)表达阳性,15例患者CD123(33.3%)表达阳性,CD96及CD123与染色体异常存在显著相关性(r=0.376,0.498,P<0.05).参与治疗的41例患者中首次治疗完全缓解率为46%,核型低危组、中危组、高危组首次完全缓解率分别为58%、43%、37%,其中参与治疗的8例t(15;17)M3患者首次完全缓解率为88%.结论患者免疫表型与染色体核型具有较好相关性,相关检测对于急性髓系白血病的诊断及预后评估具有重要意义.
- 谷芳娜李国辉刘利
- 关键词：急性髓系白血病染色体核型免疫表型
- Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34^+细胞的扩增作用被引量：1
- 2011年
- 背景:Fms样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力。目的:构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34+细胞的扩增作用。方法:克隆hFLext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体。转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。磁珠分选脐血CD34+细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用。结果与结论:成功克隆hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白。Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34+细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础。
- 刘强郑瑾赵星成尹郸丹陈任安刘利郝淼旺梁英民
- 关键词：FLT3配体CD34+
- Abd-Bcr／Abl原核表达载体的构建和表达被引量：2
- 2008年
- 构建Bcr/Abl-Abd原核表达载体,并表达、观察对白血病细胞K562的影响。以慢性白血病PGD210质粒为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增出Abd编码区序列,克隆入pMD18t载体,经酶切测序鉴定正确。再通过酶切重组克隆入原核表达载体pET32a,构建pET32a-Abd重组表达质粒,经酶切、测序鉴定,序列、读码框均正确。通过转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达,纯化。结果PCR扩增出特异性的501bp的目的片断,以此构建的重组质粒pET32a-Abd能够在上清中表达约36.6kd的目的蛋白,Western blot鉴定为特异表达。证明成功构建了原核表达载体pET32a-Abd,并表达在上清中,表达蛋白约占菌体总蛋白的6%,纯化后达到74.3%,Western blot检测为特异性表达,为进一步研究该蛋白对慢性白血病细胞的作用奠定了分子基础。
- 康志杰李国辉黄斯勇梁亮尹郸丹何飞胡兴斌韩骅梁英民
- 关键词：慢性髓细胞性白血病BCR/ABL基因
- Plenti/V5-myc-KyoT2-IRES2-EGFP慢病毒载体的构建与鉴定
- 2009年
- 构建含有myc-KyoT2融合基因片段的病毒载体,并在真核细胞中表达鉴定。方法:由科室保存质粒分别酶切得到Plenti/V5、IRES2-EGFP和myc-KyoT2基因片段,分别将myc-KyoT2基因片段插入质粒pIRES2-EGFP得到myc-KyoT2-IRES2-EGFP,然后将myc-KyoT2-IRES2-EGFP基因片段插入质粒Plenti/V5-GFP,构建病毒载体Plenti/V5-myc-KyoT2-IRES2-EGFP,应用免疫印记和荧光显微镜检测融合蛋白与绿色荧光蛋白的表达。获得了质粒myc-KyoT2-IRES2-EGFP和Plenti/V5-myc-KyoT2-IRES2-EGFP,myc-KyoT2融合蛋白和绿色荧光蛋白均正确表达。说明成功构建了含有myc-KyoT2-IRES2-EGFP融合基因的病毒载体,并在真核细胞中正确表达,为进一步研究急性T淋巴细胞白血病与Notch信号转导通路之间的关系奠定了基础。
- 牛晓丽梁英民韩骅李国辉梁亮张萍
- 关键词：急性T淋巴细胞白血病NOTCH慢病毒载体
