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国家自然科学基金(30530410): 作品数：21 被引量：64H指数：4; 相关作者：陈林苏楠赵玲杜晓兰李福兵更多>>; 相关机构：第三军医大学大坪医院重庆工学院绵阳市疾病预防控制中心更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划重庆市科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠h1-calponin的RNA干扰载体: 2009年; 目的利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠碱性调宁蛋白(h1-calponin)的RNA干扰载体并对其干扰效率进行验证。方法利用在线软件设计三段针对小鼠h1-calponin cDNA的寡核苷酸(A、B、C)片段,经退火成为双链后分别装入pSOS-HUS载体,得到载体调宁蛋白-PS-A/B/C;再将h1-calponin cDNA插入该载体和GFP一起融合表达,得到调宁蛋白RNAi-A/B/C3个载体;对上述载体经酶切和测序鉴定后,转染至HEK293T细胞株,通过倒置荧光显微镜观察GFP荧光强度来判断上述载体的干扰效果。结果经酶切和测序证明针对小鼠h1-calponin的3个RNA干扰载体构建成功,荧光显微镜下观察显示,和空载体pSOS-HUS(未插入RNA干扰片段)相比,A组的荧光强度减弱最明显,B的基本不变,C的荧光强度稍有减弱。结论成功构建了针对h1-calponin的RNA干扰载体。; 孙启荻苏楠陈锚锚金旻赵玲陈林; 关键词：RNAI

成纤维细胞生长因子受体2在成年小鼠骨折愈合过程中的表达模式: 2008年; 目的阐明成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）在成年小鼠骨折愈合过程中的表达模式。方法制备小鼠胫骨不稳定骨折模型，分别于骨折后3、5、7、10、14和21d6个时相点对小鼠的骨痂摄X线片，行HE染色及FGFR2、骨钙蛋白、Ⅱ型胶原、X型胶原的原位杂交检测，明确FGFR2在成骨细胞和软骨细胞中的表达变化。结果骨折后3～5d，FGFR2与骨钙蛋白在骨折处骨膜下成骨细胞中共表达；在骨折后7～14d，FGFR2与X型胶原在软骨痂肥大前软骨细胞和肥大软骨细胞中共表达。结论FGFR2参与了骨折愈合过程，并且可能是潜在的调节骨折愈合的靶基因。; 陈波陈林尹良军苏楠陈剑; 关键词：骨折原位杂交

小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立被引量：11: 2008年; 目的建立小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型，为探讨成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用奠定基础。方法利用24h内新生小鼠颅骨和4～8周龄成年小鼠四肢长骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞，采用间接接触的培养模式将接种了骨髓单核细胞的玻片或骨片置入提前24h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养。共培养一定时间后进行破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）染色鉴定和骨吸收功能检测，并进一步采用RT-PCR对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、TRAP和组织蛋白酶K（CathepsinK）的表达进行检测。结果共培养5天后可见TRAP（＋）多核细胞形成，13天础（＋）多核细胞数目达到高峰；骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现，随着培养时间的延长，陷窝面积呈增加趋势；破骨细胞标志基因TRAP在共培养3天时开始表达，而MMP-9和CathepsinK则在共培养5天后表达。结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著，诱导的破骨细胞具有噬骨能力，该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究。; 鲁秀敏陈林苏楠李福兵赵玲; 关键词：成骨细胞破骨细胞共培养

成骨细胞特异性过表达h1 calponin转基因小鼠的建立: 2008年; 目的为从整体动物水平研究碱性调宁蛋白(h1-calponin)在骨形成过程中的直接作用,我们构建了成骨细胞中特异性过表达h1-calponin的转基因小鼠模型,并对其表型进行了初步分析。方法构建在成骨细胞特异性启动子(collagen I promoter)驱动下表达h1-calponin的载体(pColI-calponin),纯化DNA片段,再以显微注射的方法将转基因片段导入小鼠受精卵,经移植后得到小鼠。PCR法检测整合到小鼠基因组中的外源基因,提取F1代阳性小鼠原代成骨细胞RNA,RT-PCR检测h1-calponin在小鼠成骨细胞中的表达情况,并观察转基因小鼠表型及体重变化情况。结果PCR检测结果显示1只G0代转基因鼠中检测到阳性信号,RT-PCR显示F1代转基因小鼠成骨细胞中表达h1-calponin较野生对照小鼠明显增加,且转基因小鼠体重与野生小鼠相比有明显降低。结论成功构建了在成骨细胞特异性过表达h1-calponin的转基因小鼠,为深入研究h1-calponin在骨骼发育中的作用提供了良好的动物模型。; 陈锚锚苏楠赵子瑜雷子贤赵玲李福兵陈林; 关键词：成骨细胞转基因小鼠

小鼠胚胎瘤来源细胞系ATDC5的体外软骨分化诱导研究被引量：1: 2009年; 目的在体外建立稳定有效的软骨细胞分化模型。方法复苏ATDC5细胞,在倒置显微镜下观察细胞形态及其生长情况,细胞90%融合时分别用不含Vc和含Vc的诱导培养基培养进行分化诱导。诱导21 d,阿力新蓝染色,RT-PCR检测Ⅱ、Ⅹ型胶原表达进行鉴定。结果含50μg/mL Vc的诱导培养基诱导1周便可见明显的软骨小结,细胞产生软骨基质明显增多,Ⅱ及Ⅹ型胶原表达明显增高,且Ⅹ型胶原表达呈提前。结论利用ATDC5细胞系可成功建立软骨细胞分化体外模型。; 金旻戚华兵苏楠杜晓兰杨京赵玲陈林; 关键词：软骨细胞分化

重组人甲状旁腺激素1-34促进小鼠间充质干细胞增殖及骨向分化被引量：2: 2011年; 目的研究重组人甲状旁腺激素1-34[recombinant human parathyroid hormone1-34,rhPTH(1-34)]间断处理对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)增殖以及骨向分化的影响,进一步探讨rhPTH(1-34)促骨形成的机制。方法无菌条件下分离6～8周的C3H雄性小鼠BMSC,传代培养,10 nmol/L rhPTH(1-34)间断处理或者Vehicle处理,MTT检测细胞增殖;BMSC成骨诱导后,分别在3、6、9 d进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和活性测定;RT-PCR检测成骨细胞功能标志基因核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)、骨桥蛋白(osteopontin,OP)、骨钙素蛋白(osteocalcin,OC)的表达水平;Western blot检测p-Erk1/2,p-P38信号通路。结果 rhPTH(1-34)间断处理促进BMSC增殖;诱导9 d时与对照组比较,显著增加ALP活性[D(405)/D(562):(0.625±0.049)vs(0.543±0.038),(P<0.05)];显著增加成骨功能相关基因Cbfα1(增加186.6%,P<0.01),OC(增加210.5%,P<0.01),OP mRNA(增加5.5%,P<0.05)的表达水平;p-Erk1/2,p-P38水平均增加。结论 rhPTH(1-34)间断处理通过激活下游的p-Erk1/2和p-P38通路,促进BMSC增殖,增强其向成骨细胞分化,使成骨细胞数量和活性增加,从而增加骨形成达到治疗骨质疏松的目的。; 易玲娴翁土军苏楠何启芬罗凤涛陈林; 关键词：甲状旁腺激素间充质干细胞成骨细胞骨形成

静电纺聚合物纳米纤维在骨组织工程研究中的进展被引量：4: 2010年; 组织工程骨在骨缺损、骨不连及骨折延期愈合等骨骼疾病的治疗中有重要应用前景，、组织工程支架是组织工程研究的核心内容之一，静电纺丝制备的纳米纤维以其优异的性能，近年来已开始成为骨组织支架材料的重要研究对象。综述了静电纺聚合物纳米材料包括天然高分子聚合物、人工合成聚合物及复合聚合物纺丝纤维在骨组织工程研究中的进展，提出复合聚合物电纺纤维及其改性是今后骨组织工程支架材料研究的重要方向之一；并探讨了其研究中存在的问题与应用前景。; 罗伟金旻罗凤涛陈林; 关键词：静电纺丝纳米纤维骨组织工程

软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析被引量：3: 2009年; 目的获得在软骨细胞中条件性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析。方法通过PTEN条件性基因敲除小鼠（Pten^flox/flox小鼠），与软骨细胞特异表达Cre重组酶的小鼠（Col2αCre）交配，获得在软骨细胞中特异敲除PTEN基因小鼠（Co12αCre：Pten^flox/flox）；同时，利用Pten^flox/flox小鼠与FGFR3增强型点突变小鼠（Fgfr3^G369C/小鼠，即ACH小鼠）交配，子代杂合子小鼠（Pten^flox/＋：ACH）之间再交配，获得Pten^flox/flox：ACH小鼠；通过Col2αCre：Pten^flox/flox和Pten^flox/flox：ACH交配即可获得在软骨细胞中特异性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠（Col2αCre：Pten^flox/flox：ACH）。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定，免疫荧光染色检测PTEN基因的敲除效率，通过X光平片摄影对小鼠的表型进行初步分析。结果获得了在软骨细胞中敲除PTEN的FGFR3点突变小鼠，免疫荧光染色证实Col2αCre：Pten^flox/flox：ACH小鼠软骨细胞中PTEN蛋白因为基因敲除而表达很低。初步的表型分析显示：Col2αCre：Pten^flox/flox：ACH小鼠身长、尾长均较Pten^flox/flox：ACH小鼠长（P〈0．05，n=5）。Col2αCre：Pten^flox/flox：ACH小鼠表型，较Pten^flox/flox：ACH小鼠的侏儒表型有所缓解。结论采用基于Cre／LoxP系统的条件性基因敲除策略，获得了在软骨细胞中敲除PTEN基因的FGFR3增强型突变小鼠，表型分析初步显示，软骨细胞特异性敲除PTEN基因可部分缓解由FGFR3增强型点突变所导致的小鼠侏儒表型。该小鼠的获得，为研究P13K／AKT信号通路在FGFR3突变介导的软骨生长抑制中的作用提供了实验动物平台。; 雷子贤戚华兵苏楠赵子瑜陈锚锚何启芬赵玲金旻谢杨丽李福兵杜晓兰陈林; 关键词：PTEN FGFR3 软骨发育不全小鼠

欧几里德几何距离矩阵法对FGFR2 Ser252Trp点突变小鼠头颅形状特征的分析被引量：4: 2009年; 目的通过定量分析模拟Apert综合征患者的FGFR2 Ser252Trp突变小鼠模型和野生型小鼠头颅表型,并与Apert患者所表现出来的异常头颅颜面特征进行比较,探讨所建立的Apert小鼠模型能否真实地模拟Apert综合征患者的头颅表型。方法采用蚂蚁啃食的方法制备Ser252Trp突变小鼠和同窝对照小鼠头颅标本,用三维坐标测量仪检测头颅27个标记点的三维坐标值,用欧几里德几何距离矩阵法(euclidean distance matrix analysis,EDMA)对突变小鼠和对照小鼠头颅三维数据进行处理和统计分析。结果Ser252Trp突变小鼠头颅形状与同窝对照组相比具有统计学差异(P<0.01),突变小鼠头颅长度缩短,且头颅前端缩短比后部缩短更严重,头颅面部鼻骨长度、前颌骨、上颌骨及颧骨长度明显缩短(P<0.01),眼间距和额骨宽度变宽,颅腔长度有所缩短,宽度增加,颅顶升高(P<0.01),这与Apert患者颅面的临床表现高度相似:眼间距增宽,面中部发育不良,鼻骨缩短,上颌骨发育低下,突眼,颅腔变宽呈圆鼓状。结论FGFR2 Ser252Trp突变小鼠从表型上真实地反映Apert患者的头颅颜面特征,可以作为人类Apert综合征的较好模型用于有关疾病致病机制、手术及药物治疗的研究模型。; 杜晓兰陈志尹良军何启芬段亚琪陈林; 关键词：小鼠模型 APERT综合征

FGFR3在骨骼发育和疾病中作用的研究进展被引量：10: 2006年; FGFR3是成纤维细胞生长因子受体(fibroblastgrowthfactorreceptors,FGFRs)家族成员之一,在骨骼发育中起重要作用。FGFR3的激活突变引起一系列骨骼发育缺陷性疾病,如软骨发育不全(achondroplasia,ACH)、季肋发育不全(hypochondroplasia,HCH)和致死性骨发育不全(thanatophoricdysplasia,TD)。目前研究认为,FGFR3在骨骼发育中抑制软骨形成的作用是明确的,但其对骨形成的作用尚不明确,需要进一步研究。; 苏楠陈林; 关键词：FGFR3 骨骼发育软骨形成骨形成

国家自然科学基金(30530410)

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