国家杰出青年科学基金(39625022)
- 作品数：29 被引量：161H指数：6
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- 相关机构：中山医科大学中山大学中山大学附属第二医院更多>>
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- 重新去极化对小脑颗粒神经元c-Jun的影响被引量：3
- 2002年
- 【目的】观察重新去极化 (redepolarization ,2 5mmol/LK+ )对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元蛋白质c Jun的影响 ,对去极化挽救神经元过程中c Jun的作用及其调节机制进行初步探讨。【方法】用Westernblotting检测原代培养的大鼠小脑颗粒神经元胞内c Jun总量及磷酸化水平 ;用逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscription polymerasechainreaction ,RT PCR)检测编码基因c jun表达水平 ;用免疫共沉淀 (coimmunoprecipitation)检测c Jun氨基末端激酶 (c JunN terminalkinase ,JNK)活性 ;用二乙酸荧光素 (fluoresceindiacetate ,FDA)染色检测神经元存活率。【结果】复极化 (repolarization ,5mmol/LK+ )使小脑颗粒神经元的c junmRNA、c Jun总量及磷酸化水平迅速增加 ,神经元存活率随后明显下降 ;复极化 2h后重新去极化 ,c junmRNA、c Jun总量及磷酸化在 2h内恢复至正常水平 ,而神经元存活率维持在正常水平 ;JNK活性在极化转换前后未改变。【结论】c Jun的抑制可能介导了重新去极化挽救小脑颗粒神经元的作用 。
- 黄奕俊龚守芳邱鹏新苏兴文颜光美
- 关键词：去极化C-JUN小脑颗粒神经元凋亡细胞凋亡
- 热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用被引量：6
- 2002年
- 【目的】热刺激预处理诱导热休克蛋白表达 ,观察它对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。【方法】热刺激处理诱导热休克蛋白产生 ,复极化诱导体外培养的小脑颗粒神经元凋亡 ,FDA荧光染色计算细胞存活率 ,相差显微镜分析细胞形态 ,Hoechst332 5 8染色分析核形态 ,琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段 ,Westernblotting检测HSP70 表达。【结果】小脑颗粒神经元在去极化条件 (2 5mmol/LKCl)下生长良好 ,复极化 (5mmol/LKCl )后 2 0h ,相差显微镜下神经元胞体缩小 ,突起断裂。Hoechst 332 5 8染色见核固缩和凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡的典型生化特征—DNA梯状条带。预先对小脑颗粒神经元进行热刺激处理 (4 4℃ )不同时间 (6 0min ,90min)再复极化 ,神经元凋亡数明显减少 ,且随热处理时间延长 ,保护作用增强。Westernblotting结果 :随热刺激 (4 4℃ )处理时间延长 ,HSP70 表达量逐渐增加。【结论】热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡具有保护作用。这一保护作用可能涉及HSP70 。
- 陈丽君苏兴文邱鹏新蔡翔郑素秋颜光美
- 关键词：热休克蛋白质类小脑颗粒神经元凋亡
- 特异性p^(38)MAPK抑制剂SB203580对乳鼠小脑颗粒神经元的保护作用
- 2000年
- 目的 研究 p38丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)选择性抑制剂SB2 0 35 80对乳鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用。方法 SD乳鼠小脑颗粒神经元培养 ,琼脂糖凝胶电泳 ,SAPK/JNK分析试剂盒作激酶分析。结果 PI 3 K的特异性抑制剂LY2 940 0 2诱导小脑颗粒神经元凋亡 ,但SB2 0 35 80通过抑制细胞凋亡而促进小脑颗粒神经元的存活 ,且有浓度依赖性。LY2 940 0 2诱导凋亡的颗粒神经元中c Jun的表达量和磷酸化水平均升高 ,JNK被激活。但是 ,当小脑颗粒神经元生长在含SB2 0 35 80的高钾培养基中 ,c Jun的表达量、磷酸化水平和JNK的活性都明显的降低。结论 SB2 0 35 80通过抑制JNK的活性 ,降低c Jun的表达和磷酸化水平 。
- 黎明涛王文雅林穗珍颜光美
- 关键词：小脑颗粒神经元
- T_4 DNA连接酶介导的5’RACE法克隆大鼠Nor 1全长cDNA被引量：3
- 2004年
- 目的:克隆75AEST全长cDNA序列。方法:抽提在25mmol/L KCl条件下培养7d的大鼠小脑颗粒神经元的总RNA后,用DNA连接酶介导的5’RACE法克隆75A表达序列标签(EST)cDNA5’端未知序列,其产物亚克隆到pGEM-Teasy后进行序列测定以及同源性分性。结果:首轮5’RACE扩增出2.5kb序列后,75A EST鉴定为神经来源孤儿受体1(Nor1)基因的部分序列;再经过二次轮5’RACE,我们首次克隆Nor-1的全长cDNA序列。结论:T_4DNA连接酶介导的5’RACE是一种效率较高的克隆mRNA5’端未知序列的好方法,为进一步研究Nor1在小脑颗粒神经元存活或分化过程中的作用奠定基础。
- 银巍黄奕俊苏兴文赵灵芝邱鹏新颜光美
- 关键词：小脑神经元
- 应用mRNA差异显示技术筛选大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型中差异表达基因被引量：2
- 2007年
- 目的:应用mRNA差异显示技术对大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型中差异表达基因进行筛选,克隆以及鉴定。方法:大鼠小脑颗粒神经元的分离和原代培养;对大鼠小脑颗粒神经元凋亡逆转模型进行荧光mRNA差异显示逆转录PCR(FDDRT-PCR,fluorescent differential display RT-PCR);EST片段亚克隆入pGEM-T Ea-syTM,克隆后测序并进行序列同源性检索;反Northern杂交重鉴定与筛选。结果:通过DDRT-PCR获得164个在小脑颗粒神经元凋亡模型中差异表达的ESTs;对其中的17个ESTs进行了克隆并测序;通过反Northern杂交的初步筛选初步鉴定出5个阳性片段。结论:阳性差异表达EST的筛选、克隆以及鉴定为神经元凋亡与保护分子机制研究奠定基础。
- 银巍黄奕俊皮荣标苏兴文赵灵芝邱鹏新颜光美
- 关键词：细胞凋亡差异表达基因小脑神经元
- 大鼠缺血脑中差异表达基因的研究
- 2004年
- 目的鉴定大鼠脑缺血差异表达基因。方法复制大鼠大脑中动脉栓塞急性脑缺血模型,采用荧光差异显示RT-PCR法结合反Northern杂交快速鉴定差异表达基因。结果发现差异表达的基因9个,其中6个已知的序列和3个未知序列;已知基因中上调的是musmusculusab1-interactor1,homosapiensCGI-99protein,tissueinhibitorofmetalloproteinase3,homosapiensnuclearreceptorco-repressor,下调的是homo-sapiensnuclearmatrixproteinp84和coatomerproteincomplex,subunitgamma2。结论荧光差异显示法结合反Northern杂交是一种有效的快速鉴定差异表达基因的方法;脑缺血时,缺血侧和非缺血侧存在基因的差异表达。
- 皮荣标银巍苏兴文苏涛邱鹏新郑素秋颜光美
- 关键词：脑缺血基因印迹法RNA逆转录聚合酶链反应
- 咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制被引量：7
- 2004年
- 目的 观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法 体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果 ① 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论 一定浓度的咖啡因可保护苯?
- 赵灵芝苏兴文银巍江伟健黄亦俊邱鹏新颜光美
- 关键词：咖啡因苯妥因小脑颗粒神经元凋亡C-JUN
- 大鼠局灶性脑缺血模型及其与C反应蛋白变化的关系被引量：46
- 1999年
- 目的 改进大鼠大脑中动脉梗塞法 ,建立更接近于临床缺血性脑卒中及其再灌注的可靠模型 ,并观察其与血清 C反应蛋白变化的关系。 方法 沿大鼠右颈内动脉插入长 2 .1～ 2 .3cm直径 0 .2 0 5 mm的单股尼龙丝 ,直达大脑中动脉起始部开口 ,阻断其血流 ,观察大鼠神经病学改变及脑组织形态学变化 ,并测定血清 C反应蛋白含量。 结果 术后大鼠表现特殊体态及典型追尾征 ,6h大脑中动脉供血区出现缺血性外观 ( TTC染色 )及相应组织学变化 ( HE染色 ) ,模型成功率近95 % ( 71/75 ) ;并伴血清 C反应蛋白上升 ( 15 .9% ,n=2 0 ,P<0 .0 5 )。 结论 本方法既可构成缺血性病灶 ,又能形成再灌注模型 ,具有可逆性重复操作的特点 ;其神经病学与形态学的特殊表现及血清 C反应蛋白的升高 ,可作为鉴定模型可靠性的依据。
- 林春郑淑秋钟觉民颜光美
- 关键词：脑缺血C反应蛋白
- 胞内钙离子浓度与咖啡因保护小脑颗粒神经元作用的关系(英文)被引量：4
- 2000年
- 用凝胶电泳和 fura- 2荧光技术测定 [Ca2 + ]i方法研究咖啡因对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用与 [Ca2 + ]i 升高之间的关系 .将体外培养的小脑颗粒神经元从高钾 ( 2 5mmol· L-1KCl)培养基中转移到低钾 ( 5mmol· L-1KCl)培养基中 ,神经元发生凋亡 .但低钾引起的神经元死亡可被咖啡因 ( 5- 2 0 mmol· L-1)浓度依赖性地保护 ,且咖啡因的这种作用不受蓝尼定 ( ryanodine) -敏感钙释放阻断剂蓝尼定和丹曲林 ( dantrolene)的影响 ;也不被 L-型钙通道阻断剂硝苯地平 ,尼莫地平 ,维拉帕米和 NMDA受体阻断剂地佐环平抑制 .结果说明 [Ca2 + ]i 的升高并不是咖啡因对小脑颗粒神经元的保护作用所必需的 .
- 王文雅黎明涛邱鹏新苏兴文林穗珍颜光美
- 关键词：咖啡因小脑胞内钙离子
- 大鼠脑缺血后脑组织tPA和PAI-1蛋白的表达被引量：6
- 2000年
- 为了探讨鼠脑缺血后脑内组织型纤溶酶原激活物 ( t PA)及其主要抑制物 - 1型 ( PAI- 1)蛋白的表达。制备了大鼠全脑和局灶性脑缺血模型 ,用免疫组化法检测 t PA和 PAI- 1蛋白的表达。结果发现 ,在全脑、局灶性脑缺血不同时间和正常鼠脑膜、脉络膜、室管膜、血管内皮等部位均有 t PA、PAI- 1免疫阳性信号 ,但小脑、海马区未见该信号。局灶性脑缺血 6 h,缺血侧中心部位的胶质细胞和梗死灶周边的缺血半影区的神经元也显示 t PA强阳性信号 ,但该细胞不表达 PA I- 1蛋白 ;缺血 18h鼠缺血侧未见t PA、PAI- 1阳性信号。本研究提示 ,脑缺血后鼠脑组织和正常脑组织均有 t PA、PA I- 1蛋白表达 ,但全脑缺血后和正常对照鼠t PA蛋白表达无明显变化 ,而局灶性脑缺血 6 h鼠缺血侧比正常侧 t PA蛋白表达增高 ,脑缺血后鼠脑组织和正常鼠 PA I-
- 潘涌谢勉郑素秋苏兴文颜光美
- 关键词：脑缺血TPAPAI-1蛋白质表达神经元损伤
