国家自然科学基金(30670628)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：王东廖玲李梦侠曾林立杨宇馨更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院重庆市中医院更多>>
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- 人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1融合蛋白的构建、纯化及其功能的初步研究被引量：6
- 2009年
- 目的构建人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(hAEP1)原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,对其活性进行初步分析。方法用PCR法扩增hAEP1基因,克隆入pET28a载体中,获得重组质粒pET28a-hAPE1。将重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定。用His亲和层析技术进行蛋白纯化,得到hAPE1融合蛋白。用Western blot及电泳迁移率变动分析实验分析hAPE1融合蛋白的抗原性及活性。结果所构建的重组质粒pET28-hAPE1经双酶切及DNA测序鉴定表明构建正确。IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带,His亲和层析纯化后得到hAPE1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确。Western blot及电泳迁移率变动分析实验证明hAPE1融合蛋白具有抗原性、AP修复及氧化还原活性。结论成功构建了人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶的原核表达载体pET28a-hAPE1,并在E.coli BL21(DE3)中高效表达和纯化得到有抗原性及活性的hAPE1融合蛋白。
- 戴楠王东李梦侠曹晓静曾林立廖玲杨宇馨
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- APE1/Ref-1表达在小鼠放射性肺损伤形成中的变化特点被引量：3
- 2009年
- 目的观察小鼠放射性肺损伤过程中DNA损伤修复关键酶脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子(apurinic/aprimidinic endonuclease/redox factor-1,APE1/Ref-1)表达的动态变化,初步探讨APE1/Ref-1在放射性肺损伤发生、发展中的作用。方法雌性昆明小鼠30只,随机分为照射组18只和对照组12只。照射组用8MV直线加速器给予小鼠全胸20Gy单次照射,对照组佯装照射。在照射后1、3、7、14、28、56d共6个时相点,分批活杀小鼠(照射组3只,对照组2只),观察其全肺大体形态改变,取右肺组织,光镜下观察组织形态学变化,免疫组化SP法检测APE1/Ref-1;取左肺组织,Western blot方法检测APE1/Ref-1蛋白表达。结果正常小鼠肺组织上皮细胞和内皮细胞中APE1/Ref-1呈胞核表达为主,而在小鼠放射性肺损伤不同阶段肺组织上皮细胞和内皮细胞中APE1/Ref-1表达特征有所改变,呈核浆共同表达和胞浆表达为主;并且APE1/Ref-1表达呈现先增高后降低的趋势,照射后1d开始升高,3d达高峰,且明显高于对照组,此后随着小鼠放射性肺损伤发展逐渐降低,28d降至对照组水平,56d明显低于对照组。结论电离辐射可以刺激APE1/Ref-1蛋白的表达并使其表达发生由核内转向浆内和先增高后降低的特征改变,表明APE1/Ref-1可能在放射性肺损伤修复过程中起着重要作用。
- 余舒亮王东林俐卿毅杨宇馨廖玲李梦侠曾林立李增鹏
- 关键词：APE1/REF-1电离辐射放射性肺损伤
- APE1单核苷酸多态性与肺癌易感性关系的研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨中国重庆汉族人群脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)基因单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系。方法采用病例对照研究,应用相对的两对引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)技术检测455例肺癌患者和443例健康人APE1-141T/G和APE1 148Asp/Glu单核苷酸多态性(SNP)。结果 APE1-141G/G基因型相对于T/T基因型,显著减少了患肺癌的风险(OR=0.62;95%CI为0.42～0.91);单倍体分析中,APE1-141T/148Glu单倍体相对于-141T/148Asp单倍体,显著增加了患肺癌的风险(OR=1.28,95%CI为1.01～1.62)。结论 APE1基因与中国重庆汉族人群肺癌易感性密切相关,APE1-141T/148Glu单倍体可能是肺癌的重要遗传易感因素。
- 李峥李梦侠廖玲王东
- 关键词：肺肿瘤单核苷酸多态性
- DNA修复基因APE1 Asp148Glu多态性与中国西南地区女性宫颈癌风险及预后相关被引量：1
- 2021年
- 目的探讨中国西南地区女性DNA修复基因APE1多态性与宫颈癌风险和预后的相关性。方法调查2007年1月至2014年7月在陆军军医大学大坪医院就诊的290例宫颈癌患者的临床特征,以同期290例体检的健康志愿者为对照;并对患者的总生存期进行随访,使用PCR对APE1(Asp148Glu和-141T/G)进行基因分型。利用χ2检验和Hardy-Weinberg平衡分析病例与对照之间基因的多态性;采用多元Logistic回归模型评估基因多态性与宫颈癌风险的相关性,用Kaplan-Meier法评估患者的总生存与不同基因型的关系。结果与APE1 Asp148 Asp/Asp相比,Glu/Glu基因型显示出患宫颈癌的风险更低(OR=0.542,P<0.05),特别是具有以下临床特征的患者:生育次数<2次(OR=0.345,P<0.05),初潮年龄≥14岁(OR=0.522,P<0.05),未绝经患者(OR=0.324,P<0.05),绝经年龄≥45岁(OR=0.495,P<0.05),病理类型为鳞状细胞癌(OR=0.597,P<0.05)。而含有Glu的基因型具有更多的生存获益(P=0.001),但是APE1 pro-141T/G多态性与宫颈癌风险没有显著关联。结论纯合子APE1 Asp148 Glu/Glu基因型有较低的子宫颈癌风险及较好的预后。
- 许文婧张诗珩王东
- 关键词：宫颈癌APE1癌症风险
