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国家自然科学基金(81260173): 作品数：14 被引量：32H指数：3; 相关作者：官志忠赵亮孔欣禹文峰邓成敏更多>>; 相关机构：贵州医科大学贵阳护理职业学院贵州省人民医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技厅重大专项长江学者和创新团队发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

洛伐他汀对大鼠海马神经元毒蕈碱样型乙酰胆碱受体的影响及与ERK信号通路的关系被引量：1: 2017年; 目的:观察洛伐他汀对大鼠原代海马神经元毒蕈碱样型乙酰胆碱受体(mAChRs)及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的作用。方法:选择大鼠原代培养海马神经细胞,(1)将细胞分为对照组、Atropine处理组及U0126处理组,观察mAChRs拮抗剂Atropine及ERK1/2通路抑制剂U0126对M1 mAChR和ERK1/2信号通路的影响;(2)将细胞分为对照组、Atropine及洛伐他汀处理组、洛伐他汀组、U0126及洛伐他汀处理组,观察洛伐他汀联合Atropine或U0126对M1 mAChR和ERK1/2信号通路的影响;采用蛋白印迹法(Western blotting)检测M1 mAChR、总ERK1/2(p-ERK1/2)及磷酸化ERK(phospho-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:(1)与对照组相比,Atropine和U0126分别处理细胞后,phospho-ERK1/2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),M1 mAChR和pERK1/2表达水平未见明显改变;(2)与对照组相比,0.1μmol/L洛伐他汀处理神经细胞,M1 mAChR及phosphoERK1/2蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与洛伐他汀处理组相比,联合应用洛伐他汀与Atropine处理细胞,M1 mAChR及phospho-ERK1/2蛋白表达水平的升高未受到明显影响,但联合应用洛伐他汀与U0126处理细胞,phospho-ERK1/2蛋白表达水平明显下降(P<0.01),M1 mAChR的升高未受到明显影响。结论 :洛伐他汀能够活化ERK1/2信号通路,并上调mAChRs表达水平,但洛伐他汀上调mAChRs表达水平的作用与ERK1/2信号通路无关。; 谭龙春赵亮邓成敏刘仙红官志忠; 关键词：洛伐他汀 ERK1/2信号通路海马

非痴呆性血管性认知功能障碍患者ChAT和CHE活性变化及其临床意义被引量：1: 2013年; 目的通过检测非痴呆性血管性认知功能障碍(VCIND)患者血胆碱乙酰转移酶(ChAT)及胆碱酯酶(CHE)活性的变化,初步探讨VCIND的发生机制。方法选择61例VCIND患者作为研究组,其检测符合Rockwood认知功能障碍诊断标准但未达到NINDS-ARIIEN血管性痴呆诊断标准。同期相匹配的75例健康者作为对照组,两组均清晨空腹抽取静脉血并分离血清。应用分光光度法检测血清ChAT及CHE活性。结果血管性认知功能障碍组ChAT活性(120.94±23.93)U/mL较对照组(64.88±12.23)U/mL明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),CHE活性两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 VCIND患者血清ChAT活性增加,促进乙酰胆碱的合成,可能是VCIND患者机体维持认知功能的一种代偿作用。; 王凡李毅肖雁徐源刘健官志忠; 关键词：胆碱乙酰化酶胆碱酯酶

AβOs对大鼠原代海马神经细胞丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的影响被引量：1: 2016年; 目的:观察β-淀粉样蛋白寡聚体(AβOs)对原代培养大鼠海马神经细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的影响。方法:原代培养大鼠海马神经细胞,用免疫荧光染色鉴定纯度,制备并鉴定AβOs,用不同浓度AβOs(0.25、0.5、1及10μmol/L)处理细胞48 h,采用CCK-8试验检测细胞的存活率,蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及p38磷酸化及总蛋白表达水平。结果:免疫荧光染色结果显示原代大鼠海马神经细胞的体外培养纯度达85%以上;低于0.5μmol/L AβOs对原代神经细胞无明显毒性作用,但可见phospho-ERK1/2和phospho-JNK蛋白表达升高;1μmol/L及更高浓度的AβOs对原代神经细胞有细胞毒性作用,同时可引起phospho-ERK1/2和phospho-JNK蛋白表达水平均降低,但总ERK1/2及总JNK蛋白表达水平未受明显影响,而phospho-p38及总p38蛋白表达水平与AβOs作用浓度呈负相关。结论:AβOs与MAPK信号通路之间的作用可因AβOs的作用浓度不同而出现差异。; 赵亮官志忠; 关键词：阿尔兹海默病

洛伐他汀对抗人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白的非胆固醇依赖性保护作用: 2016年; 目的:观察洛伐他汀对过表达APP670/671的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞活性及β-淀粉样蛋白(Aβ)二聚体合成的影响。方法:转染并鉴定过表达APP670/671的SH-SY5Y细胞,筛选无细胞毒性、不影响细胞胆固醇水平浓度的洛伐他汀处理SH-SY5Y细胞24 h,采用CCK-8试验检测细胞的存活率,蛋白印迹法检测Aβ二聚体的蛋白表达水平。结果:过表达APP670/671的SH-SY5Y细胞中APP的蛋白及mRNA表达水平均明显高于野生型细胞;用0.1μmol/L的洛伐他汀处理SH-SY5Y细胞,未见明显细胞毒性作用,胆固醇水平亦未见明显改变;0.1μmol/L洛伐他汀预处理SH-SY5Y细胞24 h,能提高细胞存活率,减少Aβ二聚体的分泌。结论:洛伐他汀具有神经保护作用,可能与减少毒性Aβ的合成有关。; 赵亮官志忠; 关键词：洛伐他汀 Β-淀粉样蛋白淀粉样前体蛋白阿尔兹海默病

β-淀粉样肽对大鼠原代海马神经细胞中SIRTs表达的影响被引量：2: 2016年; 目的:探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)对原代培养海马神经细胞中沉默信息调节因子(SIRTs)表达的影响。方法:分离出生24 h内SD乳鼠大脑海马区域,培养原代神经细胞,CCK-8试验观察0、0.1、0.2、0.5、1.0、1.5及2.0μmol/L Aβ寡聚体(AβOs)对细胞增殖的影响,选取恰当浓度的AβOs进行后续实验;将实验分为对照组(Control)和Aβ组,Aβ组给AβOs处理24 h后,运用Western blotting方法及Realtime PCR方法检测SIRT1、SIRT3、SIRT4及SIRT5的蛋白及mRNA表达水平。结果:CCK-8结果显示,0.5μmol/L AβOs作用于大鼠原代海马神经细胞24 h时细胞存活率明显低于对照组(P<0.05),且不影响细胞的存活率;0.5μmol/L AβOs处理大鼠原代海马神经细胞24 h后,与Control相比,SIRT1、SIRT3、SIRT4及SIRT5蛋白及mRNA表达水平均不同程度降低(P<0.05或0.01)。结论:AβOs可使海马神经细胞中SIRTs蛋白及mRNA表达水平降低,这可能与AD病人发病后学习记忆能力减退有关。; 董阳婷谭龙春官志忠; 关键词：阿尔茨海默病海马神经元沉默信息调节因子

洛伐他汀上调体外培养神经细胞毒蕈碱型乙酰胆碱受体及对抗β-淀粉样肽对该受体表达的抑制作用被引量：1: 2017年; 目的观察洛伐他汀是否对毒蕈碱型乙酰胆碱受体(mAChRs)有上调作用,探讨其是否具有抗β-淀粉样肽(Aβ)的作用。方法选择原代培养的大鼠海马神经细胞和SH-SY5Y细胞,采用洛伐他汀和Aβ寡聚体(AβOs)分别或联合处理培养细胞24~48 h后,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞中M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平。结果免疫荧光染色显示原代大鼠海马神经细胞的体外培养纯度达85%以上;不同浓度洛伐他汀处理神经细胞24 h后,M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05);0.5μmol/L AβOs处理神经细胞48 h后,其M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P<0.05);但预先用0.1μmol/L洛伐他汀处理神经细胞24 h,可减轻AβOs导致的M1 mAChR和M3 mAChR表达水平下降。结论洛伐他汀可能具有上调mAChRs表达水平的作用,对抗Aβ对该受体的作用。; 谭龙春赵亮邓成敏刘仙红官志忠; 关键词：洛伐他汀 Β淀粉样肽

洛伐他汀对抗AβOs引起的SH-SY5Y细胞毒性作用被引量：1: 2017年; 目的:观察洛伐他汀对抗Aβ寡聚体(AβOs)引起的SH-SY5Y细胞毒性作用。方法:生长至80%~90%并用无血清培养基培养12 h的SH-SY5Y细胞分为对照组、洛伐他汀处理组(0.1μmol/L洛伐他汀处理24 h)、AβOs处理组(0.5μmol/L AβOs处理48 h)和洛伐他汀加AβOs处理组(0.1μmol/L洛伐他汀处理24 h,再加入0.5μmol/L AβOs继续处理48 h),采用CCK-8法检测各组细胞活性,使用相应的试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量。结果:0.5μmol/L AβOs处理SHSY5Y细胞48 h后,与对照组相比,SH-SY5Y细胞活性、SOD及GSH-Px活性显著降低,MDA含量明显增加(P<0.05);在0.5μmol/L AβOs处理SH-SY5Y细胞前,预先用0.1μmol/L洛伐他汀处理细胞24 h,可减弱AβOs引起的细胞活性、SOD和GSH-Px活性及MDA含量的改变(P<0.05)。结论:洛伐他汀可对抗AβOs引起的SHSY5Y细胞毒性作用,其保护机制可能与抑制氧化应激有关。; 谭龙春吴昌学赵亮董阳婷刘仙红官志忠; 关键词：洛伐他汀 AΒ寡聚体细胞毒性 SH-SY5Y细胞

洛伐他汀对β-淀粉样肽诱导原代大鼠海马神经细胞氧化应激及凋亡的拮抗作用: 2017年; 目的观察洛伐他汀（lovastatin）对β-淀粉样肽（β-Amyloid peptide，Aβ）诱导的神经细胞氧化应激及凋亡水平升高的拮抗作用。方法体外培养的原代大鼠海马神经细胞，用Aβ寡聚体单独及联合洛伐他汀处理后，生化方法测定氧自由基（OH－、H2O2、O2·^－）水平、丙二醛含量、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性，蛋白印迹法检测细胞中Caspase-3及bcl-2蛋白表达水平。结果0.5 μmol/L Aβ寡聚体处理神经细胞48 h后，与对照组相比，氧自由基水平显著升高，丙二醛含量明显增加，SOD及GSH-PX活性显著降低，Caspase-3蛋白表达水平明显升高，bcl-2蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）。给予Aβ前用0.1 μmol/L洛伐他汀预处理神经细胞24 h，可减弱Aβ引起的氧自由基水平、丙二醛含量、SOD及GSH-PX活性、Caspase-3及bcl-2蛋白表达等改变（P〈0.05）。结论洛伐他汀可对抗Aβ的神经毒性作用，其神经保护机制可能与抑制氧化应激有关。; 谭龙春赵亮刘仙红邓成敏官志忠; 关键词：洛伐他汀淀粉样Β蛋白细胞

激活星形胶质细胞α7乙酰胆碱能受体抑制β-淀粉样蛋白的聚集被引量：6: 2016年; 目的研究在星形胶质细胞内加入尼古丁后能否激活细胞内α7尼古丁乙酰胆碱能受体（n AChR）以及激活的α7n AChR对β-淀粉样蛋白（Aβ）的降解作用。方法分离新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并纯化、传代,使用细胞免疫荧光法鉴定细胞的纯度。凝胶银染方法鉴定寡聚体聚集情况。试验分为正常对照组、激动剂组、拮抗剂组以及Aβ组激动剂＋Aβ组、拮抗剂＋Aβ组,用蛋白印迹法检测α7n AChR蛋白表达情况以及激活细胞内受体后对Aβ的降解作用。结果经过传代培养细胞得以纯化。体外制备好的Aβ1~42除了含少量的未聚集的单体（4 k D）外,主要以二聚体、三聚体、九聚体等不同聚集形式的寡聚体存在。尼古丁组与对照组相比α7n AChR表达明显升高（P〈0.01）,尼古丁组与拮抗剂组相比α7n AChR表达升高（P〈0.05）;收集的蛋白与上清液,尼古丁组与Aβ组相比Aβ的表达均明显降低（P〈0.01）,激动剂＋Aβ组与拮抗剂＋Aβ组相比Aβ的表达均明显降低（P〈0.01）。结论尼古丁可以激活星形胶质细胞内的α7n AChR,激活的α7n AChR对Aβ具有明显的降解作用,能够为预防和治疗阿尔茨海默氏病（AD）提供一个可能的方向。; 孔欣禹文峰官志忠; 关键词：尼古丁星形胶质细胞阿尔茨海默病 Β-淀粉样蛋白寡聚体

大鼠皮质星形胶质细胞尼古丁型乙酰胆碱受体的表达被引量：3: 2016年; 该文研究了尼古丁型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,n ACh Rs)不同亚单位在大鼠大脑星形胶质细胞的表达情况。分离新生大鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并纯化、传代鉴定后,运用RT-PCR方法、蛋白质印迹法检测正常大鼠大脑皮质星形胶质细胞n ACh Rs不同亚单位的表达情况。结果显示,α2、α3、α4、α7、β2等n ACh Rs亚单位在星形胶质细胞均有表达,而β3 n ACh Rs亚单位在星形胶质细胞没有表达,为深入研究星形胶质细胞的功能提供了可能。; 孔欣禹文峰官志忠; 关键词：星形胶质细胞神经保护

国家自然科学基金(81260173)

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