国家自然科学基金(30670636)
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 相关作者：张从纪夏章权杨彦春单佑安王涛更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学中国人民解放军第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
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- HBD3基因真核表达质粒载体的构建及其体外表达和活性鉴定
- 2012年
- 目的构建人β防御素3(HBD3)基因真核表达质粒载体,观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达,并检测其活性。方法利用RT-PCR方法从牙龈组织中扩增出HBD3基因片段,通过DNA重组技术将基因片段重组于pVIVO1-mcs真核表达质粒载体上,构建成pVIVO1-HBD3重组质粒载体,分别用酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组质粒载体进行鉴定。运用jetPEI转染试剂将重组质粒转染BMSCs后,RT-PCR、免疫荧光和蛋白质印迹法检测目的基因的表达。取转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液,采用K-B纸片扩散法进行抗菌活性实验。结果 (1)酶切电泳分析得到相应的目的片段,大小与理论计算值一致,DNA测序证实目的基因序列正确无突变,成功构建真核表达质粒载体pVIVO1-HBD3。(2)RT-PCR和免疫荧光、蛋白质印迹法分别从mRNA和蛋白质2个水平证实转染的BMSCs高表达HBD3。(3)转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液对白色念珠菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌产生明显的抑菌环,证实了表达分泌出的HBD3的抗菌活性。结论构建了pVIVO1-HBD3基因真核表达质粒载体,证实其转染BMSCs后基因的表达和活性。
- 夏章权张从纪王涛
- 关键词：Β防御素间质干细胞
- VEGF基因真核表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达被引量：6
- 2010年
- 目的探讨经腺病毒表达载体转染血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)165基因的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)体内外基因表达的特点。方法构建VEGF基因腺病毒表达载体,将VEGF165基因转染到MSCs中。用RT-PCR法检测转基因MSCs中基因表达情况。结果转基因MSCs及其分化的子代细胞均有VEGF165的表达,并持续2周左右时间。结论经腺病毒表达载体转染VEGF165基因的MSCs在体内外均有良好的基因表达。
- 张从纪杨彦春单佑安
- 关键词：血管内皮细胞生长因子骨髓间充质干细胞基因转移
- 蜕皮甾酮对口腔扁平苔藓上皮细胞TLRs/NF-κB信号通路的调节作用
- 2014年
- 目的:研究Toll样受体/核转录因子-κB(TLRs/NF-κB)信号通路在口腔扁平苔藓(oral lichen plus,OLP)病理过程中的作用,探讨蜕皮甾酮(ecdysterone,EDS)在OLP治疗中的作用效应。方法:(1)脂多糖(LPS)刺激人口腔黏膜角质形成细胞(HOK)建立体外OLP炎症模型,采用Real time RTPCR检测NF-κB p65、TLR4和肿瘤坏死因子-a(TNF-α)mRNA在该模型中的表达情况;(2)EDS干预HOK细胞后,RT-PCR检测NF-κB p65、TLR4和TNF-αmRNA的表达情况。结果:体外OLP炎症模型中NF-κB p65、TLR4和TNF-αmRNA表达量上调,且呈LPS浓度及作用时间依赖性,LPS浓度为10μg/mL,作用6h时表达量最高。EDS能够下调NF-κB p65、TLR4和TNF-αmRNA的表达,EDS最佳作用浓度是100μg/mL(P<0.01)。结论:EDS对OLP的抗炎及免疫调节作用与TLRs/NF-κB信号通路密切相关,EDS可能通过抑制TLRs的激活,调控NF-κB的表达,最终抑制OLP炎症介质活化与黏膜损伤。
- 曾旖杨军范舒张从纪
- 基因和干细胞疗法修复慢性难愈创伤的研究与应用
- 2012年
- 背景:许多疾病和因素都会使伤口久治不愈或延迟愈合,基因疗法和干细胞疗法为慢性难愈创伤的治疗提供了新的技术途径。目的:针对基因疗法和干细胞疗法用于治疗慢性难愈创伤的研究作一综述。方法:以"gene therapy,stem cell therapy和chronic wound"为检索词,检索Medline数据库(1980/2010-12),文献检索语种限制为英语。将近年发表的针对性强的文章纳入研究范围,同一领域的文献则选择近期发表或权威杂志的文章。排除与基因疗法和干细胞疗法相关性不强、陈旧的文献。结合自身的研究经验和纳入排除标准,对查阅到的最新研究成果详细分析并加以总结概括。结果与结论:初次检索到267篇文献,严格按照纳入标准,最终将33篇文献纳入研究。基因疗法和干细胞疗法都是新的治疗方法,其相关理论和技术已经成熟,为慢性难愈创伤的治疗提供了新的技术途径,它们的有效运用有望给慢性难愈创伤带来突破性的治疗效果。
- 夏章权张从纪王涛
- 关键词：基因疗法干细胞疗法愈合转染
- VEGF165/HBD3双基因共表达真核质粒载体的构建及其体外表达
- 2011年
- 目的构建人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor,VEGF165)和人β防御素3(humanbeta defensins,HBD3)双基因共表达真核质粒载体、观察其在293FT细胞中的表达,并检测其活性。方法利用RT-PCR方法分别从白血病细胞(HL60)和牙龈组织中扩增出VEGF165和HBD3基因片段,通过DNA重组技术将基因片段先后重组于pVIVO1-mcs真核表达载体上,构建成pVIVO1-VEGF165-HBD3重组质粒载体,分别用酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组质粒载体进行鉴定。运用脂质体转染的方法将重组质粒转染293FT细胞后,RT-PCR和Western blot法检测目的基因的表达。用转染重组质粒的293FT无血清上清刺激内皮细胞EA.hy926增殖,CCK-8法检测其增殖效应。取转染重组质粒的293FT无血清上清的浓缩液,采用K-B纸片扩散法进行抗菌活性实验。结果①酶切电泳分析得到相应的目的片段,大小与理论计算值一致,DNA测序证实目的基因序列正确无突变,成功构建真核表达质粒载体pVIVO1-VEGF165-HBD3。②RT-PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白质2个水平证实:转染重组质粒的293FT细胞高表达VEGF165和HBD3。③转染重组质粒的293FT无血清上清明显促进内皮细胞EA.hy926的增殖,证实了表达分泌出的VEGF165的活性。转染重组质粒的293FT无血清上清的浓缩液对大肠埃希菌(escherichia coli,EC)(ATCC 25922)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,SA)(ATCC 25923)、绿脓杆菌(pseudomonas aeruginosa,PA)(ATCC 27853)和枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis,BS)(ATCC62037)产生明显的抑菌环,证实了表达分泌出的HBD3的活性。结论构建了pVIVO1-VEGF165-HBD3双基因共表达真核质粒载体,证实其转染293FT细胞后双基因的表达和活性。
- 夏章权张从纪王涛
- 关键词：血管内皮生长因子165人Β防御素3基因表达
