国家自然科学基金(30100079)
- 作品数：6 被引量：34H指数：4
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- 相关机构：第四军医大学西京医院延安大学绍兴文理学院更多>>
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- 延迟整流钾通道在人AGS胃癌细胞的表达及Kv1·5对AGS细胞生长的影响
- 2005年
- 目的观察9种延迟整流钾通道在人AGS胃癌细胞的表达及下调Kv1·5表达对AGS细胞生长的影响。方法用RT-PCR方法检测Kv1·1、Kv1·2、Kv1·3、Kv1·5、Kv1·6、Kv2·1、Kv2·2、Kv3·1和Kv3·2α亚单位在AGS细胞的表达;用间接免疫荧光法证实Kv1·5的蛋白表达后,采用小干扰RNA(siRNA)下调Kv1·5表达,用MTT及流式细胞术观察其对细胞生长、细胞周期分布的影响。结果在AGS细胞中可检测到7种延迟整流钾通道的表达,其中Kv1·3、Kv1·5和Kv2·1的mRNA水平较高,Kv1·6和Kv3·1的水平较低。间接免疫荧光法证实Kv1·5主要表达于AGS的细胞膜上。用siRNA下调内源性Kv1·5的表达后,AGS细胞生长明显减慢,细胞阻滞于G1期,细胞增殖指数明显降低。结论在AGS细胞中有多种延迟整流钾通道的表达,Kv1·5可能通过对细胞周期的影响而参与胃癌细胞的增殖调节。
- 兰梅时永全韩者艺郝志明潘阳林樊代明
- 关键词：延迟整流钾通道逆转录聚合酶链反应
- 缺氧诱导因子HIF-1α在胃癌细胞系中的表达和意义被引量：14
- 2005年
- 目的 研究缺氧诱导因子HIF-1α在人多种胃癌细胞系中的表达及意义。方法 分别利用RT-PCR和Westernblot的方法检测多种胃癌细胞系中HIF-1α的表达水平。结果 常氧条件下,在永生化的胃粘膜上皮细胞系GES及多种胃癌细胞系(包括耐药细胞)中均能检测到HIF-1αmRNA的表达,其表达水平无明显差异;对部分细胞系中HIF-1α蛋白表达进行检测,同样发现常氧时即有HIF-1α的表达,但表达水平明显不同。结论 常氧时在多种胃癌细胞系及永生化的胃粘膜上皮细胞系中均有HIF-1α的表达;在胃癌细胞系中,HIF-1α的调节可能主要在翻译水平而非转录水平;HIF-1α在常氧时胃癌细胞系的异常表达,提示除缺氧刺激外,非缺氧因素可能也在胃癌的发生、发展中发挥了一定的作用。
- 兰梅时永全魏茂富王淑兰韩者艺潘阳林王晋乔泰东樊代明
- 关键词：缺氧诱导因子-1基因表达蛋白表达胃肿瘤
- 细胞内钙在人胃癌细胞缺氧诱导因子-1表达及转录激活中的作用
- 2007年
- 目的观察细胞内钙变化对氧调节性亚单位HIF-1α表达及其HIF-1转录激活的影响。方法常氧时,采用通透性细胞内钙的螯合剂BAPTA-AM或钙的离子载体Ionomycin降低或升高细胞内钙,用Western-blot检测其对SGC7901细胞中HIF-1α蛋白表达的影响,然后采用间接免疫荧光法、双荧光素酶报告系统及ELISA法检测改变细胞内钙对HIF-1α转位、HIF-1转录活性及其靶基因血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌的影响。结果用BAPTA-AM降低细胞内钙,能诱导HIF-1α的表达,促进HIF-1α的转位,增强HIF-1的转录活性,增加HIF-1调节基因VEGF的分泌。用Ionomycin升高细胞内钙,虽然也有微弱的促HIF-1α稳定及转位作用,但对HIF-1转录活性及VEGF的分泌并无明显影响。结论螯合细胞内钙能诱导胃癌细胞中HIF-1α的表达及HIF-1的转录激活,提示细胞内钙变化可能在胃癌细胞的缺氧信号转导过程中发挥了重要作用。
- 兰梅时永全韩者艺宁晓喧樊代明
- 关键词：胃癌细胞细胞内钙缺氧诱导因子-1转录活性
- 电压门控钾通道Kv1.5反义核酸对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用被引量：5
- 2004年
- 目的 构建电压门控钾通道Kv1 5分子的反义核酸 (Kv1 5AS)的真核表达载体 ,建立Kv1 5AS转染的胃癌SGC790 1细胞亚系 ,探讨Kv1 5分子对胃癌细胞生长的抑制作用。方法 通过DNA重组技术 ,将Kv1 5全长cDNA片段从 pBK Kv1 5载体反向亚克隆至真核表达载体pcDNA3 1 ,构建表达Kv1 5反义核酸的重组载体 pcDNA3 1 Kv1 5AS。借助脂质体将pcDNA3 1 Kv1 5AS转导入胃癌细胞SGC790 1。通过MTT实验绘制细胞生长曲线 ,肿瘤细胞集落形成实验检测集落形成率 ,流式细胞仪进行细胞周期分析 ,并利用Westernblot检测Kv1 5和CyclinD1蛋白在基因转染细胞中的表达。结果 限制性酶切鉴定结果提示 ,重组载体 pcDNA3 1 Kv1 5AS构建成功。Westernblot结果表明 ,转染pcDNA3 1 Kv1 5AS后 ,Kv1 5蛋白在SGC790 1细胞中的表达显著降低。与转染空载体的对照细胞相比 ,转染Kv1 5AS表达载体后 ,SGC790 1细胞生长变缓 ,集落形成率显著降低 ,细胞发生了G1 期阻滞。Westernblot结果证实 ,CyclinD1蛋白在Kv1 5AS转染细胞中表达降低。结论 电压门控钾通道Kv1 5反义核酸可抑制胃癌细胞SGC790
- 韩者艺吴开春蒋海萍申慧琴时永全韩英刘长江薛妍刘娜郭长存乔泰东樊代明
- 关键词：胃癌细胞反义核酸SGC7901细胞电压门控钾通道限制性酶切
- 丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1对缺氧诱导因子-1转录活性调节机制的研究被引量：9
- 2005年
- 目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶- 1 (MKP -1)参与缺氧诱导因子- 1 (HIF- 1)转录活性调节的机制。方法 采用Western印迹检测常氧及缺氧状态下磷酸化细胞外信号调节激酶ERK和总ERK在胃癌细胞系SGC7901中的表达;利用脂质体将正义真核表达载体及针对MKP-1的小干扰RNA载体转入SGC7901细胞;借助双荧光素酶基因报告系统(dualluciferasereporter, DLR)检测ERK通路抑制剂PD98059对SGC7901细胞中HIF 1转录活性的影响。结果 ( 1 )缺氧时磷酸化ERK在SGC7901中的含量增加,而总ERK的表达不变; (2)缺氧12h时不同浓度的PD98059均能抑制HIF -1的转录活性;而p38通路抑制剂SB203580对HIF -1的转录活性无影响; (3)将针对MKP 1的小干扰RNA载体和空载体分别瞬时转入SGC7901细胞,转染24h后, 缺氧12h时磷酸化ERK在小干扰RNA载体转染细胞(U6M2)的表达高于空载体转染细胞(U6); (4)不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞中HIF- 1的转录活性,当PD98059浓度达50μmol/L以上时,U6和U6M2细胞中HIF- 1的转录活性差异无统计学意义。(5)不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞血管内皮生长因子(VEGF)的产生,当PD98059浓度达50μmol/L以上时,VEGF的分泌量在U6和U6M2细胞中差异无统计学意义。结论 在胃癌细胞系SGC7901中。
- 乔泰东刘长江时永全杜昱蕾韩霜樊代明
- 关键词：转录活性PD98059缺氧诱导因子-1HIF-1丝裂原活化蛋白激酶荧光素酶基因
- 缺氧状态下丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在胃癌细胞系SGC7901中的过表达及其意义被引量：7
- 2004年
- 目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1 (MKP 1)在缺氧胃癌细胞系SGC790 1中的表达及对缺氧诱导因子 1(HIF 1)的影响。方法 采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹检测MKP 1在常氧及缺氧状态下胃癌细胞系SGC790 1中的表达 ;借助DNA重组技术构建MKP 1基因的正义真核表达载体 ;利用脂质体将正义真核表达载体和空载体转入SGC790 1细胞 ;双荧光素酶报告基因 (DualLuciferaseReporter,DLR)检测系统检测荧光素酶活性并采用ELISA法检测SGC790 1细胞培养上清血管内皮生长因子 (VEGF)的变化。结果 (1)半定量RT PCR和Western印迹结果提示 ,MKP 1在胃癌细胞系SGC790 1中表达 ,缺氧时其表达上调 ;(2 )分别将MKP 1正义真核表达载体和pcDNA3.1空载体瞬时转入SGC790 1细胞 ;转染 4 8h后 ,缺氧 12h磷酸化HIF 1α在正义真核表达载体转染细胞 (SGC790 1 MKP 1)中的表达低于空载体转染细胞 (SGC790 1 空载体 )和未转染细胞(SGC790 1)。 (3)报告基因试验显示常氧情况下 3、6和 12h荧光素酶活性在SGC790 1细胞、SGC790 1 空载体细胞和SGC790 1 MKP 1细胞中差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;缺氧情况下 ,SGC790 1 MKP 1细胞中荧光素酶活性在 3、6和 12h均明显低于SGC790 1细胞和SGC790 1 空载体 (P <0 .0 1)
- 刘长江时永全韩者艺薛妍潘阳林申慧琴杜静平韩霜乔泰东樊代明
- 关键词：缺氧状态胃癌SGC7901细胞DNA重组技术基因表达调控
