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环孢霉素A逆转Pgp多药耐药机理的研究被引量：8: 2002年; 目的　探讨环孢霉素 A (Cs A)逆转糖蛋白 Pgp耐药细胞株 K5 6 2 /ADR耐药的机理。方法　采用RT- PCR、荧光法、MTT和共聚焦激光扫描显微镜等方法 ,研究 Cs A对柔红霉素 (DNR)在 Pgp耐药细胞株 K5 6 2 /ADR蓄积、毒性及分布的影响。结果　 Cs A可明显增加 DNR在耐药细胞内的蓄积 ,恢复 DNR在耐药细胞核、浆的弥漫分布 ,提高耐药细胞对 DNR的敏感性。结论　 Cs A通过增加耐药细胞内化疗药物含量和逆转化疗药物异常分布的作用 ,恢复耐药细胞对化疗药物的敏感性。; 龚玉萍刘霆贾永前邓承祺欧阳仁荣; 关键词：环孢霉素A 多药耐药逆转

Bcr/abl特异性RNA干扰真核表达载体的构建被引量：1: 2005年; 目的:构建特异性的抗慢性髓细胞白血病融合基因bcr/ablmRNA的siRNA真核细胞表达载体,探索RNA干扰(RNAi)分子靶向治疗慢性髓细胞性白血病(CML)的作用。方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(SmallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER/shRNA1、pTER/shRNA2,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。结果:构建慢性粒细胞白细胞bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER/shRNA1、pTER/shRNA2,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。结论:抗慢性粒细胞白细胞bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体的构建成功。; 席亚明刘霆孟文彤汪宇辉顾玲陆晓茜龚玉萍; 关键词：慢性髓细胞性白血病 BCR/ABL融合基因真核表达载体 CML

碱基错配对短发夹RNA逆转白血病细胞耐药作用的影响: 2006年; 目的探讨碱基错配对短发夹RNA(shRNA)逆转白血病细胞耐药作用的影响。方法针对mdr1基因mRNA合成一条序列正确的shRNA及正义链少1个碱基的对应错配shRNA,构建一对抗mdr1 shRNA真核表达载体,脂质体介导转染白血病耐药细胞株K562／A02。采用实时荧光定量RT- PCR检测mdr1 mRNA表达;柔红霉素泵出实验检测P-gp外排泵功能;MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果序列正确和对应错配shRNA真核表达载体均明显下调mdr1 mRNA的表达,降低细胞膜P-gp外泵功能,60 min柔红霉素泵出率分别为6％和10％。显著低于对照组的45％;细胞内柔红霉素平均荧光强度分别为9．51和7．09,明显高于对照组的2．80;对阿霉素药物敏感性的相对逆转率为90％和87％。结论正义链碱基错配shRNA对RNA干扰功能无明显影响,与序列正确的shRNA一样可有效逆转mdr1所致的耐药。; 顾玲刘霆龚玉萍孟文彤; 关键词：RNA干扰碱基错配多药

bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定: 2005年; 目的构建bcr/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/ablmRNA和P210蛋白的影响。方法根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶启动子H1的真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/ablmRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达。结果构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24h后,pTER117、pTER363分别使bcr/ablmRNA的相对水平下降52%、43%,使P210蛋白分别下降47%、40%。结论bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达。; 席亚明刘霆孟文彤汪宇辉顾玲陆晓茜龚玉萍; 关键词：慢性髓细胞性白血病 BCR/ABL融合基因真核表达载体 K562

RNA干扰逆转白血病细胞耐药性的研究被引量：2: 2007年; 目的用RNA干扰技术下调白血病耐药细胞系K 562/A 02多药耐药基因m d r1的表达以逆转白血病对化学药物的耐药性。方法针对m d r1基因已知mRNA序列不同位点,选择两条靶序列,构建靶向m d r1 shRNA真核表达载体,脂质体介导转染白血病耐药细胞株K 562/A 02。实时荧光定量RT-PCR检测mRNA表达,W esternb lot检测细胞膜P-gp表达,柔红霉素泵出试验检测P-gp外排泵功能,M TT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果构建了二条针对m d r1基因的shRNA真核表达载体,分别下调m d r1 mRNA的表达89.74%和87.18%,降低细胞膜P-gp表达,使膜外泵功能明显下降,柔红霉素在细胞内贮留明显增多,60m in时柔红泵出率为13.16%、22.02%,对照组为40.44%、45.31%,对阿霉素药物敏感性的相对逆转率为84.36%和76.69%。结论RNA干扰技术可有效逆转m d r1所致耐药。; 顾玲刘霆龚玉萍席亚明; 关键词：RNA干扰短发夹RNA MDR1基因多药耐药

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国家自然科学基金(30100074)