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国家自然科学基金(39989001): 作品数：33 被引量：292H指数：10; 相关作者：朱祯李旭刚徐军望冯德江徐鸿林更多>>; 相关机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所中国科学院中国石油大学（北京）更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家转基因植物研究与产业化专项国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学农业科学理学更多>>

豌豆核基质结合区的分离及其在转基因烟草中的功能分析被引量：10: 2001年; 从豌豆基因组中分离出一段具有核基质结合区（ｍａｔｒｉｘ　ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎ，　Ｍ－ＡＲ）特征的ＤＮＡ序列，与已知序列相比，获得的序列中部缺失了１１５　ｂｐ的重复序列．重复序列上、下游两段序列与已知序列相对应的序列有较高的同源性，并具有Ａ－ｂｏｘ，Ｔ－ｂｏｘ和ＴＡＴＡＡＡ等典型的ＭＡＲ序列特征．为验证此ＤＮＡ序列的功能，以β－葡糖醛酸酶（β－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＧＵＳ）基因（ｕｉｄＡ）作报导基因构建了植物表达载体，通过农杆菌介导转化了烟草．ＧＵＳ定量检测表明，由于此ＤＮＡ序列的存在，ｕｉｄＡ基因的平均表达水平提高了２倍，最高的单株可达６倍．上述结果表明，该ＤＮＡ具有ＭＡＲ序列的特征序列，并且具有增加转基因表达的功能．; 李旭刚朱祯徐军望吴茜徐鸿林; 关键词：核基质结合区转基因植物豌豆烟草外源基因表达烟草

玉米MAR序列的分离及其在转基因烟草中的功能研究被引量：1: 2002年; 从玉米基因组中分离了一段核基质结合区(MAR)序列,它位于乙醇脱氢酶1基因的5’端启动子区域.为研究此段MAR序列在转基因植物中的功能,将MAR构建在报告基因β-葡糖醛酸酶(GUS)基因(uidA)和植物选择标记新霉素磷酸转移酶Ⅱ基因(nptⅡ)的两侧形成植物表达载体,在载体中两段MAR之间的距离为6.2 kb.GUS活性检测表明,MAR序列对报告基因的表达水平没有影响.这一现象与MAR只构建在报告基因两侧形成小环时提高外源基因表达的结果不同,为进一步研究MAR作用机制提供了基础.; 李旭刚陈松彪徐军望刘翔朱祯; 关键词：玉米 MAR序列转基因烟草基因表达

转抗虫融合基因(cry1Ac3-cpti)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析被引量：17: 2002年; 将苏云金杆菌家族中的Cry1Ac3基因与豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)融合成融合基因,构建cry1Ac3-cpti融合基因植物表达载体,表达Bt-CpTI抗虫融合蛋白.用基因枪转化技术将cry1Ac3-cpti融合基因分别导入玉米优良自交系E28及340的胚性愈伤组织中,轰击后的愈伤组织经筛选剂3次筛选,获得可育的再生植株.经PCR及Southern blot分子检测,证实所获得的再生植株为转基因植株.抗虫性分析结果表明,部分转基因玉米植株对玉米螟虫有较强的抗性.; 李慧芬刘翔曲强邓朝阳路子显陈宛新徐鸿林朱祯; 关键词：转基因玉米基因枪 BT毒蛋白基因抗虫育种

一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法(英文)被引量：3: 2007年; 多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素。我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA。这种方法可以克服产率低和质量低的问题。RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520μg到800μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9。提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析(serial analysis of gene expression,SAGE)库的构建。; 宋贵生翟红利魏刚朱祯; 关键词：多糖 RNA提取

转苏云金杆菌毒蛋白基因玉米植株的获得及其抗虫性分析(英文)被引量：9: 2002年; 玉米 (ZeamaysL .)转化成功与否与基因型密切相关。在转化过程中 ,除少数模式品种能够形成再生频率较高且易转化的Ⅱ型愈伤组织外 ,大多数栽培品种往往只能够形成再生频率较低且不易转化的Ⅰ型愈伤组织。因此探索Ⅰ型愈伤组织的诱导及其转化条件 ,提高转化效率 ,对直接改良玉米优良自交系具有重要意义。应用基因枪转化技术将苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)cry1Ac3基因导入玉米优良自交系E2 8及 34 0的Ⅰ型胚性愈伤组织中 ,经过膦丝菌素 (PPT)或潮霉素 (HygB)筛选 ,获得了再生植株。经PCR检测、Southernblot分析及Bt毒蛋白ELISA检测证实 ,外源基因已整合到玉米基因组中 ,并已获得表达。抗虫性分析结果表明 ,部分转基因玉米植株对玉米螟虫有较强的抗性。还比较了PPT和HygB两种筛选剂的筛选效果 ,表明PPT筛选的抗性愈伤组织的再生频率要高于HygB筛选的再生频率。; 李慧芬李旭刚刘翔常团结肖桂芳朱祯; 关键词：玉米植株再生抗虫基因

棉花曲叶病毒大基因间区启动子在宿主植物中的表达活性被引量：2: 2000年; 棉花曲叶病毒（ＣＬＣｕＶ）是一种单链ＤＮＡ病毒，属于双生病毒亚组Ⅲ．为了研究其基因组大基因间区（ＬＩＲ）的功能，以ＣＬＣｕＶ侵染的烟草叶片组织总ＤＮＡ为模板，通过聚合酶链反应扩增ＬＩＲ并插入克隆载体．将ＬＩＲ分别以互补链及病毒链基因转录方向与ｇｕｓ报告基因和ｎｏｓ终止子融合，构建了植物表达载体．通过农杆菌介导的方法转化烟草并测定转化植株的ＧＵＳ活性，实验结果表明，ＬＩＲ在互补链基因方向具有强启动子活性，ＧＵＳ平均活性是ＣａＭＶ３５Ｓ启动子的５～６倍，单株最高的ＧＵＳ活性达到ＣａＭＶ３５Ｓ启动子的１０倍；组织化学定位证实其在叶肉及维管组织均有活性．ＬＩＲ在病毒链基因方向的启动子活性较低．报道了ＣＬＣｕＶ来源的分离的ＬＩＲ在互补链基因方向可作为一种新型的强启动子元件应用于植物遗传操作．; 谢迎秋刘玉乐朱祯; 关键词：启动子棉花曲叶病毒基因表达

利用PCR对PVX外壳蛋白基因进行同义密码子修饰: 2003年; 利用聚合酶链式反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)与限制性内切酶相结合的方法 ,设计 4条含有限制性酶切位点和相应突变的引物。以马铃薯X病毒 (PotatoVirusX ,PVX)外壳蛋白cp基因为模板 ,扩增出相应的片段 ,相应酶切后通过三片段连接构建到克隆载体pBlueKS(+/ - )上。随机挑选重组子测序表明 ,利用三片段拼接成功地在PVX外壳蛋白基因的不同部位产生了突变。实验结果说明利用三片段接可以大大提高筛选得到突变子的效率 ,从而节省人力、物力和时间。; 冯德江徐军望路子显陈蕾徐鸿林李旭刚朱祯; 关键词：PCR PVX 外壳蛋白基因马铃薯X病毒

核基质结合区在转基因烟草中提高报导基因的表达水平被引量：9: 2000年; 从豌豆基因组中分离了位于质体蓝素 (Plastocyanin)基因下游的核基质结合区(Matrixattachmentregion ,MAR)。为进一步研究此段MAR序列在转基因植物中对外源基因表达水平的影响 ,将MAR序列构建在报导基因 β 葡糖醛酸酶 (β glucuronidase ,GUS)基因和植物选择标记新霉素磷酸转移酶 (Neomycinphosphotransferase ,NPT II)基因的两侧形成T DNA结构。采用叶盘法 ,经农杆菌介导转化烟草。GUS定量检测表明 ,MAR的存在使GUS基因的平均表达水平提高了 2倍。; 李旭刚朱祯徐军望徐鸿林肖桂芳; 关键词：核基质结合区转基因植物外源基因表达

转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析被引量：2: 2001年; 利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因 (sck)导入玉米优良自交系E2 8及34 0的胚性愈伤组织中 ,经筛选剂PPT 3次筛选及再生过程 ,获得可育的再生植株。经PCR及Southernblot分子检测 ,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑制剂抑制活性检测及抗虫结果显示 :外源基因在植物已获表达 ,部分转基因植株具有较强的抗虫活性。; 李慧芬李旭刚吴茜陈蕾徐鸿林朱祯; 关键词：玉米自交系基因枪转基因植株

A novel three primers PCR (TP-PCR) method to obtain recombinant DNA molecule independent of restriction enzyme被引量：2: 2002年; In this note, we report a novel and efficient three primers PCR (TP-PCR) method to rapidly generate recombinant DNA molecule at precise junction between two arbitrary DNA fragments. TP-PCR method is characterized by its reaction system with two templates and three primers, which can produce a recombinant DNA molecule in one PCR reaction. The main advantages of this method are the independence of sequences at the recombination site, the rapid-ness, and the easy establishment of adequate conditions. This method has been successfully applied to constructing a fusion protein gene, sck gene.; Chaoyang DengGuisheng SongJunwang XuZhen Zhu; 关键词：COWPEA TRYPSIN

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