国际科技合作与交流专项项目(08GH10)
- 作品数：10 被引量：42H指数：4
- 相关作者：李景文王庆钰翟莹王英李晓薇更多>>
- 相关机构：吉林大学齐齐哈尔大学吉林省产品质量监督检验院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大豆逆境诱导基因GmPRP的克隆与表达被引量：6
- 2011年
- 通过对大豆吉林32未成熟胚表达谱的分析,利用RT-PCR技术从大豆中克隆了一个新的脯氨酸富集蛋白基因,命名为GmPRP。GmPRP的开放阅读框长396bp,其分子量13.79kD,具有131个氨基酸残基,等电点8.96,其DNA序列无内含子。GmPRP蛋白序列N端含有一段信号肽,中间为脯氨酸富集区,C端为半胱氨酸富集区。该蛋白与四季豆和木豆的PRP同源性最高,具有较近的亲缘关系。GmPRP的683bp启动子序列含有10种与逆境相关的顺式作用元件,分别为ABRE-like、G-box、W-box、GT-1、MYB、MYC、BIHD10s、DPBF、SEBF和WRKY。实时荧光定量PCR分析表明,该基因表达量在大豆的根和叶中最高,在茎和胚中其次,在花中最低,且受干旱、高盐、低温、机械伤害及SA(水杨酸)、ETH(乙烯)、ABA(脱落酸)、MeJA(茉莉酸甲酯)的诱导上调表达。
- 翟莹雷婷婷闫帆黄开猛李晓薇张庆林张海军苏连泰孙昕王英李景文王庆钰
- 关键词：大豆逆境胁迫启动子
- 大豆球蛋白G1启动子的克隆及表达活性分析被引量：1
- 2011年
- 利用PCR的方法从大豆品种"吉豆2号"基因组DNA中克隆得到大豆球蛋白启动子G1p,长度约为686 bp,PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子特异性表达元件。将克隆得到的G1p取代pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建于G1p与GUS基因融合表达的载体pCAM-G1p,通过农杆菌介导的方法在大豆根、茎、叶和种子中进行瞬时表达分析结果显示,仅能在种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶其他组织中基本检测不到GUS活性。说明G1基因上游686 bp片段具有种子特异性启动子的功能,G1p是一个比较高效的种子特异性启动子。
- 张庆林赵艳翟莹李晓薇张艳苏连泰王英李景文王庆钰
- 关键词：大豆启动子
- 两个大豆MYB转录因子在原核细胞中的高效表达被引量：1
- 2011年
- 大豆(Glycine max)GmMYB12a与GmMYB12B2基因属于典型的植物R2R3-MYB转录因子。为进一步研究两个MYB12转录因子与相应顺式作用元件的相互作用,构建了两基因的原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中实现高效表达。利用PCR技术,将两端带有特异酶切位点的GmMYB12a与GmMYB12B2全长基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+),酶切、测序鉴定确认获得两基因的重组原核表达载体pET-28a-GmMYB12a与pET-28a-GmMYB12B2。然后把重组载体转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了两基因的原核表达载体,在IPTG浓度为1.2 mmol/L,诱导6 h后,目的蛋白能在Rosetta(DE3)中高效表达。
- 李晓薇苏连泰赵旭翟莹张海军张庆林李景文王庆钰
- 关键词：大豆MYB转录因子原核表达
- 大豆硬脂酸-ACP脱饱和酶基因启动子的克隆及其表达活性分析被引量：6
- 2011年
- 以吉豆2号基因组为模板,通过TAILPCR方法,扩增得到大豆硬脂酸-ACP脱饱和酶基因启动子片段SACPD-Cp。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列中含有多种典型的种子特异性表达序列元件。将SACPD-Cp片段取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-SACPD-Cp,通过农杆菌介导法在大豆组织中进行瞬时表达,GUS组织化学染色和荧光定量研究其表达特性。结果表明,SACPD-Cp驱动GUS基因在种子中的表达活性是CaMV35S启动子的93.01%;SACPD-Cp启动子与现已知启动子无同源性,仅在大豆种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶组织中均未检测到GUS活性,证实SACPD-Cp是一个新的种子特异性启动子。
- 张庆林赵艳李晓薇翟莹张艳王英李景文王庆钰
- 关键词：大豆
- 6-BA浓度及基因型对大豆胚尖诱导丛生芽的影响被引量：13
- 2011年
- 以吉林35、吉林47等5个大豆品种为材料,胚尖为外植体,研究不同浓度6-BA对丛生芽诱芽率和平均芽数的影响,同时测定吉林35在胚尖诱导丛生芽的过程中对潮霉素的耐受性。结果表明:3.0 mg.L-16-BA浓度下吉林35的诱芽率最高,综合考虑丛生芽诱芽率和平均芽数2个性状,吉林35更加适合于大豆胚尖再生系统;在遗传转化中,以3.0 mg.L-1潮霉素作为吉林35抗性筛选的适宜浓度。
- 闫帆孙昕翟莹李晓薇王英李景文王庆钰
- 关键词：大豆6-BA基因型
- 不同基因型大豆愈伤组织对农杆菌EHA105的敏感性研究被引量：1
- 2011年
- 研究了8个基因型的大豆愈伤组织GUS瞬时表达的效果及其最佳染色条件,以考察不同基因型大豆愈伤组织对农杆菌菌株EHA105的敏感性。GUS染色结果表明：不同品种对农杆菌EHA105敏感程度差别较大,吉林47和东农42愈伤GUS染色效果较好;不同品种要求的最佳染色时间存在差异,对农杆菌EHA105较敏感的2个基因型吉林47和东农42,较适宜的GUS染色时间为9~10 h。
- 张庆林赵艳张艳翟莹苏连泰王英李景文王庆钰
- 关键词：大豆愈伤组织基因型GUS染色农杆菌
- 大豆胚尖再生体系的研究被引量：4
- 2011年
- 以吉大豆1号、2号等5个大豆品种为材料,胚尖为外植体,研究不同浓度6-BA对不同基因型胚尖丛生芽诱芽率和再生率的影响,筛选得到适合于胚尖再生系统的基因型吉大豆2号,并以吉大豆2号为材料,研究侵染阶段加入脯氨酸和硝酸银对胚尖褐化率的影响,将获得的再生植株进行生根试验。结果表明:共培养基中添加3.0 mg.L-1脯氨酸和3.0 mg.L-1硝酸银能显著抑制褐化率,蔗糖配合较高浓度的IBA能更好地促进生根。
- 闫帆孙昕翟莹陈虹地赵健如李景文王庆钰
- 关键词：大豆基因型褐化率
- 大豆GmERF6基因的原核表达及重组蛋白纯化被引量：3
- 2011年
- 将大豆中已克隆的一个新的ERF转录因子基因(GmERF6)构建到原核表达载体pET28上,导入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,对其进行IPTG诱导。结果表明:在IPTG浓度为0.3 mol.L-1,诱导时间为3 h时,重组蛋白得到表达,分子量大约为30 kDa。SDS-PAGE电泳结果表明重组蛋白主要以包涵体形式存在。用8 mol.L-1尿素对其进行溶解后经Ni柱纯化,得到较好的纯化效果,Bradford法测定其蛋白浓度为0.56 mg.mL-1。
- 翟莹雷婷婷闫帆李艳杰李晓薇王英李景文王庆钰
- 关键词：大豆原核表达纯化
- 东北地区栽培大豆品种籽粒异黄酮含量分析及不同测定方法优化比较被引量：5
- 2011年
- 利用超声波技术,以大豆异黄酮主要组分染料木素为对照,根据单因素试验和正交试验结果建立三波长比色法和紫外分光光度法,确定大豆异黄酮最佳提取工艺:乙醇浓度70%,料液比1∶25,提取温度50℃,提取时间5 h,提取2次。比较新建立方法与之前建立HPLC法的精密度和准确度,结果依次为:高效液相色谱法>三波长比色法>紫外分光光度法,其中HPLC法灵敏度高,适于大豆及其制品中异黄酮含量的精确测定,三波长比色法和紫外分光光度法适于异黄酮含量批量、快速测定。采用HPLC法测得东北地区品种异黄酮含量分布范围为1.0404～4.4344μg.mg-1,平均值2.9174μg.mg-1,不同地区大豆品种异黄酮总量分布规律为:黑龙江>吉林>其它地区(主要是辽宁省和内蒙古东部地区),筛选得到大于4.0μg.mg-1高异黄酮品种12份,小于1.0μg.mg-1的低异黄酮品种3份。
- 张海军王英苏连泰李琳翟莹李景文张鑫生王庆钰
- 关键词：大豆异黄酮高效液相色谱法紫外分光光度法
- 大豆GmMYB12B2植物表达载体的构建及转化烟草的研究被引量：3
- 2011年
- 为研究大豆MYB转录因子-GmMYB12B2在转基因植物类黄酮代谢中的作用,利用吉林大学植物种质资源与利用研究室前期克隆的GmMYB12B2基因,以PPZP质粒为表达载体,构建了由组成型CaMV35S启动子驱动GmMYB12B2基因的植物表达载体PPZP-GmMYB12B2;然后,采用冻融法转入农杆菌EHA105菌株,通过叶盘法对烟草进行遗传转化。经PCR随机扩增鉴定9株转基因烟草,其中有6株是阳性植株,初步证明已获得转大豆GmMYB12B2基因的烟草。
- 李晓薇张艳赵旭钱丹丹闫帆张庆林李景文王庆钰
- 关键词：植物表达载体农杆菌转化烟草
