广东省自然科学基金(7006695)
- 作品数：4 被引量：33H指数：3
- 相关作者：孙京臣张进陈嘉邹移海黄冰更多>>
- 相关机构：华南农业大学广州中医药大学中山大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 家蚕核多角体病毒p10基因的克隆和分子系统进化分析被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中家蚕核多角体病毒13株中p10基因的保守序列，克隆得到了8个不同地区的家蚕核多角体病毒的p10基因，并分别与GenBank中的NPVp10基因进行比对．结果发现p10基因都含有1个213bp的开放阅读框（ORF）共编码70个氨基酸，8株P10蛋白间氨基酸序列相似性为95％～100％，相似性高．与GenBank中Ac-MNPV和BmNPV的P10蛋白相比，8株BmNPVP10蛋白都缺失了3个保守结构域中的C-端结构域，只含有2个保守结构域，即N-端卷曲螺旋和Pro丰富区．
- 孙京臣姜丽华龙虎吴钢徐兴耀钟万芳蔡平钟
- 关键词：家蚕核多角体病毒基因克隆分子系统进化
- 丹酚酸B诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化被引量：22
- 2007年
- 目的:体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并研究中药单体丹酚酸B诱导MSCs向心肌样细胞分化.方法:用贴壁培养法分离、培养、纯化MSCs,免疫荧光法检测细胞抗原CD44和CD34.分别用含5μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)和30mg/L丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs24h后,RT-PCR法检测培养1,7,14和21d心肌特异性转录因子NKX2.5,GATA-4和心肌特异性蛋白α-actin mR-NA的表达,用免疫荧光法检测诱导后α-actin的表达情况.结果:获得纯化的MSCs,免疫荧光检测细胞表面标记CD44呈阳性,CD34呈阴性.诱导后细胞形态逐渐发生变化.RT-PCR显示NKX2.5和GATA-4 mRNA在MSCs有基础性的表达,而分别以5-aza和丹酚酸B处理24h后,NKX2.5和GATA-4 mRNA表达增强,7d时表达达高峰,以后维持在高水平,与空白对照组相比,有统计学差异(P<0.01).未诱导的MSCsα-actin mRNA表达呈阴性,丹酚酸B诱导后的第14日,出现α-actin mRNA的表达.结论:用贴壁培养法可获得纯化的MSCs,丹酚酸B可诱导MSCs向心肌样细胞分化.
- 陈嘉孙京臣邹移海张进黄冰
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养丹酚酸B心肌细胞
- 杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装被引量：5
- 2010年
- 目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量,再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构建重组病毒。为方便检测基因的表达,在VP7的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签,可通过ELISA等方法快速检测目的基因表达。结果扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因,构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体,ELISA检测VP7得到了表达,在BmN细胞中观察到病毒样颗粒。结论成功构建杆状病毒多基因的表达系统,为生产多亚基蛋白复合物,研究大分子结构提供借鉴。
- 龙虎姚伦广王姗姗陈士新谭佩婵孙京臣
- 关键词：疫苗
- 丹酚酸B对骨髓间充质干细胞SCF表达的影响被引量：7
- 2008年
- 目的研究中药单体丹酚酸B对骨髓间充质干细胞(MSCs)中干细胞因子(stemcell factor,SCF)的影响。方法用贴壁培养法分离、培养和纯化MSCs,取第三代MSCs进行实验。用含不同浓度丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs,ELISA法检测培养24、48、72h的上清中SCF的含量;RT-PCR法检测培养24、48、72h的SCF mRNA的表达。结果膜型和可溶型SCF mRNA均有表达。随着培养时间的增加,0.3μg/ml、3μg/ml、30μg/ml丹酚酸B可明显促进SCF的分泌和SCF mRNA的表达(与空白对照组比较,P<0.05),而0.03μg/ml丹酚酸B组和空白对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论丹酚酸B可促进MSCs分泌SCF并促进SCF mRNA的表达,提示SCF可能在中药丹参治疗心肌梗死中发挥了重要作用。
- 陈嘉孙京臣邹移海黄冰张进张永斌
- 关键词：间质干细胞细胞培养丹酚酸B干细胞因子
