南京市科技发展计划项目(201104013)
- 作品数：14 被引量：18H指数：2
- 相关作者：郭锡熔季晨博史春梅陈玲徐广峰更多>>
- 相关机构：南京医科大学南京医科大学附属南京妇幼保健院中国人民解放军更多>>
- 发文基金：南京市科技发展计划项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hsa-miR-26b表达沉默对脂肪细胞蛋白分泌的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨hsa-miR-26b表达沉默对脂肪细胞蛋白分泌的影响。方法将hsa-miR-26b表达沉默组及对照组慢病毒感染人脂肪前体细胞,在诱导分化过程中收集不同时间点的细胞培养基上清液,采用ELISA法检测IL-6和瘦素(leptin)的分泌量。结果在细胞分化过程中,hsa-miR-26b表达沉默组IL-6与leptin表达量均较对照组降低(P<0.01或P<0.05)。结论降低hsa-miR-26b表达在一定程度上可以改善人脂肪细胞炎症状态及胰岛素抵抗,为肥胖治疗提供潜在靶点。
- 杨蕾徐广峰季晨博史春梅陈玲庞玲霞赵亚萍郭锡熔
- 关键词：脂肪细胞肥胖
- 脂肪细胞分化相关miRNA-hsa-miR-378生物信息学分析被引量：3
- 2012年
- 【目的】利用各种生物信息学工具分析hsa-miR-378转录调控、靶基因功能,以期为研究hsa-miR-378在人脂肪细胞分化过程中的功能与调控机制提供线索。【方法】应用UCSC Genome Browser、Promoter scan等在线工具,分析hsa-miR-378在基因组上下游10kb以内的CpG岛分布情况、转录起始位置(TSS)、转录因子结合位置(TFBS)等;选择TargetScan、PicTar、MiRanda三种计算方法预测hsa-miR-378的靶基因,取三个预测结果的交集,并合并DIANA LAB-TarBase 6.0数据库的已验证靶标,对所得靶基因集分别进行GO注释描述、GO富集分析和pathway富集分析。【结果】hsa-miR-378可能具有独立的启动子,可能受C/EBPβ转录因子的调控;其预测靶基因集合富集于转录调控、蛋白质修饰、细胞分化等生物学过程和功能(P<0.01);并显著富集于TGF-β信号通路、Wnt信号通路等4个信号通路,以及甲状腺癌、系统性红斑狼疮等8个疾病通路中(P<0.05)。【结论】通过对hsa-miR-378转录调控元件、靶基因的分析,为hsa-miR-378在人脂肪细胞中的功能与调控机制研究提供了线索和理论依据。
- 徐露莲史春梅陈玲季晨博郭锡熔徐美玉
- 关键词：MICRORNA生物信息学脂肪细胞分化
- miR-26b过表达对不同时间点人脂肪细胞分泌脂因子的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨miR-26b过表达在人脂肪细胞分化过程中对各种脂因子分泌的影响。方法以miR-26b过表达病毒感染人脂肪前体细胞并诱导分化;收集不同时间点的细胞培养基上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各个时间点的脂因子(白介素-6、瘦素、抵抗素、肿瘤坏死因子-α)分泌量。结果与对照组比较,在miR-26b过表达病毒感染的人脂肪前体细胞分化过程中,白介素-6、瘦素分泌量降低,而抵抗素分泌量升高;两组均未检测到肿瘤坏死因子-α。结论 miR-26b在一定程度上可以改善人脂肪细胞炎症状态及改善胰岛素抵抗,为肥胖治疗提供潜在靶点。
- 史春梅徐广峰季晨博陈玲杨蕾庞玲霞赵亚萍郭锡熔
- 关键词：肥胖
- 游离脂肪酸对人成熟脂肪细胞中miR-335表达的调控被引量：1
- 2013年
- 目的观察游离脂肪酸（FFA）对人成熟脂肪细胞中miR-335表达的调节作用。方法体外培养人前体脂肪细胞，待生长融合后，采用1一甲基-3异丁基黄嘌呤（MIX）、胰岛素、地塞米松、罗格列酮方案诱导人前体脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞，使用含1mmol／L混合FFA的前脂肪细胞培养基（PAM）进行干预，分别培养4、8、24h后收集细胞，同时设未干预的人成熟脂肪细胞为对照组，采用实时荧光定量PCR技术检测成熟脂肪细胞中miR-335的相对表达量。结果对照组细胞中4、8、24hmiR-335的相对表达量与0h相比差异均无统计学意义（P均〉0．05）。使用snRU6作为内参时，FFA干预人成熟脂肪细胞4、8、24h后miR-335的相对表达量分别为9．03-t-O．31、9．85±2．41和11．23±0．62，与对照组0h相比，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；使用miR-103作为内参时，同等时间点miR-335的相对表达量分别为4．73±0．60、5．38±1．25和4．57±0．52，与对照组0h相比，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论FFA可明显上调人成熟脂肪细胞中miR-335的表达，为进一步探索miR-335在脂肪细胞中的功能提供了一定的理论依据。
- 朱璐崔焱倪毓辉徐广峰史春梅郭锡熔季晨博
- 关键词：游离脂肪酸脂肪细胞
- 人miR-1908慢病毒载体构建及在人脂肪前体细胞中的表达验证被引量：1
- 2014年
- 目的构建人miR-1908慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪前体细胞中过表达效果。方法以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-1908区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36h开始观察荧光标记,72h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-1908的相应表达量。结果成功构建人miR-1908慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪前体细胞的效率可达到70%以上,miR-1908过表达水平可接近2倍。结论本研究成功构建了人miR-1908慢病毒过表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪前体细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础。
- 杨蕾季晨博史春梅陈玲庞玲霞夏黎郭锡熔倪毓辉
- 关键词：慢病毒
- miRNA与脂肪细胞分化、肥胖被引量：1
- 2012年
- 肥胖已经成为全球面临的一个严重公共健康问题。肥胖是机体能量失衡导致脂肪过度积聚为重要特征的一种代谢异常,主要表现为脂肪细胞数量异常增加和体积异常增大,因此深入理解脂肪细胞分化机制对肥胖防治具有重要意义。microRNA(miRNA)是近年来在真核生物体内发现的、一类长度约22nt的内源性非编码单链小RNA,通过与靶标mRNA不完全互补配对,发挥降解靶mRNA或抑制靶mRNA翻译的作用。miRNA几乎参与所有生命活动的调节和大多数疾病的发病过程,包括脂肪细胞分化、肥胖发生发展。本文主要综述miRNA在脂肪细胞分化、肥胖研究领域取得的成果,并分析该领域的现状、不足及前景。
- 季晨博郭锡熔
- 关键词：MIRNA脂肪细胞分化肥胖
- 生物信息学分析miRNA-152在非酒精性脂肪肝病中的可能作用被引量：1
- 2012年
- 【目的】总结miR-152已有研究结果,并预测其可能参与的生物学过程,为本研究小组深入研究miR-152在非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)形成和相关的调控机制奠定基础。【方法】PubMed检索miR-152相关文献,生物信息学预测miR-152的靶基因,并对其进行功能富集分析和信号通路富集分析。【结果】miR-152已在多个类型肿瘤、先兆子痫等疾病中有报道,但尚无参与脂肪肝的研究,分析结果显示miR-152靶基因功能集中于器官发育、细胞分化、代谢等多种分子功能和生物学过程;信号通路主要富集于多种肿瘤和细胞骨架蛋白、脂肪细胞因子、胰岛素信号及wnt信号通路中。【结论】miR-152在非酒精性脂肪肝病中尚未见报道,其预测的靶基因集合富集于多个生物学过程,为研究miR-152在非酒精性脂肪肝病中的作用提供了研究思路。
- 冯跃英林胡史春梅季晨博郭锡熔傅君芬
- 关键词：MIRNA生物信息学分析非酒精性脂肪肝病
- hsa-miR-17-92 cluster及其同源体靶基因的生物信息学分析被引量：1
- 2013年
- 目的对hsa-miR-17-92duster及其同源体进行系统的生物信息学分析，预测其可能参与的生物学过程，为深入研究其在脂肪细胞分化、肥胖发生等过程中的功能与机制奠定基础。方法1．应用PubMed、Google等信息搜索工具查找hsa-miR-17-92cluster及其同源体的所有研究，综述已有研究进展；2．应用miRBase获取hsa-miR-17-92cluster及其同源体的各成员序列，并分析其序列特征及保守性；3．应用美国国家生物技术信息中心（NCBI）blast、NCBImapviewer、基因组生物信息学（UCSC）Browser工具分析hsa-miR-17-92 cluster及其同源体所在基因组的序列特征；4．应用TargetScan5．1，PicTar及miRanda预测hsa-miR-17-92cluster及其同源体靶基因，取三者预测结果的交集，进一步进行功能注释和Pathway富集分析。结果1．现有研究提示hsa-miR-17-92 cluster及其同源体在脂肪细胞分化、肿瘤疾病、心脏及肺发育、免疫系统与血管形成等生物学过程中有重要作用；2．hsa-miR-17-92 cluster及其同源体进化上高度保守，根据种子序列同源性可分为4类，且在多物种问非常保守；3．hsa．miR-17-92 cluster及其同源体预测靶基因的功能与细胞周期、细胞黏附、Wnt、TGF-β信号、p53、丝裂原活化蛋白激酶等信号通路有较大的相关性，可能参与了前列腺癌、胰腺癌、结肠癌等多种疾病通路。结论通过对hsa-miR-17-92 cluster及其同源体系统的生物信息学分析，初步阐明了hsa-miR一17-92 cluster及其同源体的基本生物学特征，并为hsa-miR-17-92 cluster后续研究提供了功能与机制的线索。
- 史春梅徐广峰陈玲赵亚萍倪毓辉杨蕾季晨博郭锡熔
- 关键词：CLUSTER生物信息学脂肪细胞
- 人miR-17-92 cluster慢病毒载体构建及其在人脂肪细胞的表达验证被引量：3
- 2012年
- 目的构建人miR-17-92cluster慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果。方法以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR扩增包含miR-17-92cluster所在区域上下游100bp左右的基因组DNA,克隆入慢病毒表达载体,与Pcgvp、Rev、Vsvg包装质粒共转染HEK-293T细胞包装病毒,收取病毒上清液感染人脂肪细胞。36h开始观察荧光标记,72h收取细胞,抽提RNA,RT-PCR检测miR-17-92cluster各miRNA及miR-103、let-7e的表达。结果成功构建人miR-17-92cluster慢病毒表达载体。包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到75%以上,miR-17-92cluster各miRNA的过表达效率均达到2倍以上,且没有干扰miRNA内源性成熟机制。结论成功构建了人miR-17-92cluster慢病毒表达载体。包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现了该cluster的过表达效果,为研究人miR-17-92cluster在人脂肪细胞中的功能提供参考。
- 史春梅陈玲徐广峰倪毓辉陈小慧朱春傅君芬郭锡熔季晨博
- 关键词：CLUSTER慢病毒载体
- hsa-miR-1908靶基因预测及生物信息学分析被引量：1
- 2013年
- 目的对hsa-miR-1908进行系统的生物信息学分析,预测其可能参与的生物学过程及信号通路,为深入研究其在人脂肪细胞分化、肥胖发生等过程中的功能与机制奠定基础。方法应用miRBase获取hsa-miR-1908的序列,并分析其特征;应用miRanda预测hsa-miR-1908的靶基因,并取预测结果及基因芯片结果的交集,进一步进行基因功能注释(Gene ontology)和生物通路富集分析(Pathway enrichment)。结果 hsa-miR-1908在各物种之间有一定保守性,其靶基因功能富集于Wnt受体信号的调控、细胞周期、细胞凋亡等生物学过程;其靶基因信号通路富集于促性腺激素释放激素信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路、细胞周期等信号转导通路及胰腺癌等疾病通路中。结论 hsa-miR-1908预测的靶基因集合富集于多个信号通路及生物学过程,与肥胖密切相关,为后续has-miR-1908在人脂肪细胞中生物学功能研究奠定基础。
- 杨蕾季晨博史春梅陈玲庞玲霞夏黎郭锡熔倪毓辉
- 关键词：MIRNA生物信息学
