国家自然科学基金(31170947)
- 作品数：8 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：中山大学附属第三医院南方医科大学南方医院暨南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
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- 静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸／聚乙二醇纳米纤维作为组织工程支架的体外细胞相容性研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸（PLGA）／聚乙二醇（PEG）共聚物纳米纤维作为组织工程支架的可行性，及其与大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）的体外相容性。方法静电纺丝法分别制备PLGA／PEG和PLGA纳米纤维支架，扫描电镜（SEM）观察材料结构；分离培养大鼠BMSCs，取第3代BMSCs分别接种于PLGA／PEG纳米纤维支架和PLGA纳米纤维支架进行培养，噻唑蓝（MTr）法测定其细胞毒性及细胞增殖；接种后2、4、6h血球计数板计数法测定其黏附率；DAPI荧光染色观察细胞核形态；SEM观察细胞和支架的形态、黏附及生长情况。结果SEM观察显示两组支架呈相互交联的多孔网状无纺结构。PLGA／PEG组和PLGA组纤维直径分别为（655±57）nm和（539±48）nm；孔隙率分别为86．8％±1．5％和84．7％±1．2％。MTr检测BMSCs在两组支架中生长良好，OD值均随时间延长而增大，两组各时间点比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。各时间段PLGA／PEG组的细胞黏附率明显高于PLGA组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。DAPI染色示各组细胞核形态正常，核质均染，未见明显凋亡及坏死细胞；PLGA／PEG组细胞较PLGA组明显增多。SEM观察显示，PLGA／PEG组BMSCs在支架上生长良好，基质分泌、生长睛况优于PLGA组。结论采用静电纺丝法制备的PLGA／PEG纳米纤维支架安全无毒，具备合适的孔径和孔隙率，适合BMSCs生长，细胞相容性良好，是一种组织工程良好的支架载体。
- 李宁刘斌戎利民何留民
- 关键词：脊髓损伤骨髓细胞
- 基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-2在诱导多能干细胞来源神经干细胞受损中的表达
- 2014年
- 神经损伤与细胞外基质（ECM）中基质金属蛋白酶（MMPs）及抑制剂（TIMPs）的调节有关[1].我们通过采用H2O2的刺激在体外造成诱导多功能干细胞来源的神经干细胞（iPSCs-NSCs）的损伤,观察MMP-2、MMP-9和TIMP-2在神经损伤过程中的变化.
- 舒涛庞卯戎利民刘畅王娟周葳王璇刘斌
- 关键词：基质金属蛋白酶-2基质金属蛋白酶-9干细胞来源抑制剂-2TIMP-2
- 成体细胞转化为多能干细胞诱导方法的研究进展被引量：1
- 2014年
- 干细胞（SCs）是一类具有自我复制能力的多分化潜能细胞,在一定条件下可以分化成多种功能细胞,其作为组织工程学的种子细胞,在再生医学领域中占据重要的地位.根据干细胞所处的发育阶段可以分为胚胎干细胞（ESCs）和成体干细胞（ASCs）[1].ESCs是一种来源于哺乳动物早期胚囊中内细胞团的多能干细胞,可向3个胚层的细胞分化[2],为人类一系列疾病,如帕金森病、脊髓损伤等难治性疾病提供了治愈的可能[3-4].
- 杜丽娟苗勇胡志奇
- 关键词：多能干细胞成体干细胞细胞转化难治性疾病分化潜能
- 白发发生的分子生物学机制研究进展被引量：1
- 2015年
- 白发作为临床常见的一种毛发色素障碍性疾病,虽不会引起严重躯体机能障碍,但对患者的外貌、自信心和社会认同度有极大的负面影响.临床中最为常见的白发类型是老年性白发和过早性白发[1],其发病机制尚未完全清楚.现就白发发生机制的研究进展进行综述.
- 陈超越苗勇胡志奇
- 关键词：分子生物学机制白发发病机制老年性认同度
- 腰椎间盘髓核细胞活性与MRI退变分型的相关性研究
- 2014年
- 目的通过对不同退变程度腰椎间盘的髓核细胞进行培养及活性测定,明确髓核细胞活性与MRI退变分型的相关性。方法取腰椎间盘髓核组织20例,均为我科收治单一手术节段患者,其中A组2例,为正常椎间盘髓核组织(PearceⅠ&Ⅱ型);B、C、D三组分别6例,分别为MRI分型轻、中、重度(PearceⅢ型,Ⅳ型,Ⅴ型),退变椎间盘髓核组织均在同样条件下进行体外髓核细胞的分离与原代培养,于5 d,10 d,15 d,20 d,25 d五个时间段消化细胞,细胞计数了解各组细胞活性,CCK-8比色法绘制各组细胞的生长曲线,比较各组差异。结果髓核细胞计数在同时间点上A组明显高于B、C、D组,B、C、D组之间均存在显著统计学差异(P<0.01)。在同时间点上A组OD值(吸光值)明显高于B、C、D组,B、C、D各组之间OD值(吸光值)均存在统计学差异(P<0.01)。结论 1正常腰椎间盘组织髓核细胞活性明显高于退变椎间盘髓核细胞。2MRI分型轻、中、重度退变腰椎间盘髓核细胞活性与其分型基本相符。
- 谢沛根刘小明庞卯陈瑞强刘斌董健文戎利民
- 关键词：椎间盘退变髓核细胞细胞活性
- 小鼠来源诱导多能干细胞定向分化为神经元的体外实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨源于小鼠的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)体外定向分化为神经元的方法,为大量稳定地获得神经元及提供种子细胞治疗脊髓损伤奠定体外实验基础。方法:源于小鼠的iPSCs在不同的诱导培养基中经悬浮、贴壁、再悬浮和再贴壁培养。免疫荧光检测iPSCs多能性标志物、神经干细胞及其分化细胞标志物的表达。RT-PCR检测神经元及胶质细胞基因表达并行神经元基因测序鉴定,流式细胞术检测iPSCs定向分化为神经干细胞及进一步分化为神经元的比例。结果:源于小鼠的iPSCs表达干细胞多能性标志物Sox2、Oct4和SSEA1。悬浮培养可以形成类球形拟胚体;经诱导及机械分离后的细胞可形成神经球,神经球经诱导后可分化为神经元。免疫荧光显示iPSCs可诱导出表达nestin的神经球,贴壁培养的神经球可分化为分别表达微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)及髓磷脂碱性蛋白(MBP)的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。RT-PCR及基因鉴定结果显示形成小鼠神经元;流式细胞术检测结果显示分化细胞中神经干细胞和神经元的比例分别为63.93%±1.47%和21.40%±1.70%。结论:源于小鼠的诱导多能干细胞能够稳定地在体外定向分化为神经元,为脊髓损伤的治疗提供了一个可靠的细胞来源。
- 庞卯杨阳刘斌张良明戎利民
- 关键词：小鼠诱导多能干细胞神经元定向分化机械分离
- 丹酚酸B联合iPSCs-NSCs对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能的修复作用及机制研究被引量：1
- 2016年
- 目的探讨丹酚酸B联合诱导多能干细胞来源的神经干细胞（iPSCs-NSCs）对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能的修复作用，以及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）表达的影响。并观察蛋白激酶B（Akt）信号传导通路在该过程中的作用。方法将诱导多能干细胞（iPSCs）诱导分化为神经干细胞（NSCs），并行巢蛋白（nestin）免疫荧光染色。（1）其后进一步诱导分化为神经元，并分为4组：常规培养基组、丹酚酸B组（加入丹酚酸B50μmol／L）、丹酚酸B＋GM6001组（加入丹酚酸B50μmol／L、GM6001 25μmol／L）、丹酚酸B＋LY294002组（加入丹酚酸B50μmol／L、LY294002 25μmol／L）。分化后细胞进行微管相关蛋白2（MAY2）免疫荧光染色和实时定量PCR检测，并采用Western blotting检测常规培养基组、丹酚酸B组、丹酚酸B＋LY294002组MMP-2、pAkt和Akt表达。（2）48只大脑中动脉闭塞模型大鼠按随机数字表法分为3组：PBS空白组、iPSCs-NSCs组、丹酚酸B＋iPSCs-NSCs组，分别于纹状体处局部注射PBS、iPSCs-NSCs及丹酚酸B。造模7、14d后应用Longa评分和SMA评分对各组大鼠神经功能进行评估：7d后采用免疫荧光染色检测nestin表达，14d后采用免疫荧光染色检测MAP2、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达；采用Western blotting检测各组MMP-2、TIMP-2表达。结果（1）与常规培养基组、丹酚酸B＋GM6001组、丹酚酸B＋LY294002组比较，丹酚酸B组神经元计数、MAP2 mRNA相对表达量明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与常规培养基组、丹酚酸B＋LY294002组比较，丹酚酸B组MMP-2、pAkt／Akt表达明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）造模7、14d后，与PBS空白组、iPSCs-NSCs组比较。丹酚酸B＋iPSCs-NSCs组Longa评分、SMA评分明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）；14d后，与iPSCs-NSCs组
- 舒涛刘畅庞卯王娟戎利民周葳王璇刘斌
- 关键词：丹酚酸B诱导多能干细胞
- 蛋白诱导诱导多能干细胞技术的研究进展被引量：1
- 2013年
- 诱导多能干细胞（inducedplufipotentsterncells，iPSC）自2006年出现后被认为是干细胞研究领域的一个突破性进展。首次成功制备iPSC的日本学者将4种重编程蛋白基因Oct3／4、Sox2、Klfd、C—Myc通过反转录病毒载体导入成纤维细胞并在其中表达，进而激活内源性重编程体系，最终导致细胞性质发生改变，成为具有类似胚胎干细胞（embryonicstemcells，ESC）的一种多能干细胞，即iPSCEI。由于其可来源于自体细胞，无需破坏胚胎组织，因而不涉及伦理争议。
- 杨阳刘斌庞卯戎利民
- 关键词：干细胞技术蛋白诱导反转录病毒载体多能干细胞蛋白基因
