博士科研启动基金(10713101046)
- 作品数：9 被引量：19H指数：4
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- 东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫后组织与血清蛋白组分差异比较研究被引量：6
- 2012年
- 探讨东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫前后不同时点组织与血清中蛋白质电泳谱的变化。分别提取东方田鼠感染日本血吸虫(0、7、12、25d)和小鼠感染日本血吸虫(0、7、12、45d)后的肝脏、脾脏、肺脏蛋白及血清进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,对结果比较分析并进行组织病理形态学观察。结果显示,小鼠感染日本血吸虫第7和12天后肝脏150ku附近蛋白质条带较东方田鼠表达量明显增高;东方田鼠在感染日本血吸虫后40～50ku附近蛋白质条带较正常东方田鼠表达明显上调;感染第7天后肺脏40ku附近蛋白质条带较其他时间点变化明显;小鼠感染日本血吸虫第7、12和45天后血清中IgG类蛋白质表达量较东方田鼠显著增高。东方田鼠和小鼠在日本血吸虫感染后不同时点间的组织及血清蛋白组分存在差异,东方田鼠肝脏和血清中150ku附近蛋白条带较其他动物特异,蛋白质表达丰度高,该蛋白可能与东方田鼠抗日本血吸虫相关。
- 成钢王京仁王兴平李淑红
- 关键词：东方田鼠日本血吸虫蛋白组分血清蛋白
- 东方田鼠不同组织来源成纤维细胞的分离培养及比较被引量：4
- 2014年
- 利用细胞体外培养技术,分别对东方田鼠胚胎、皮肤、肺、腹腔、肾及睾丸组织进行成纤维细胞的分离和传代培养,再与前期建立的两种东方田鼠永生化细胞系在传代次数、冻存复苏以及体外杀伤日本血吸虫童虫等相关生物学特性方面进行比较。结果显示,采用组织块贴壁法或胰蛋白酶消化法,可在体外进行东方田鼠不同组织来源成纤维细胞的培养、传代和冻存,光镜下细胞均贴壁生长,呈长梭形,为典型的成纤维样细胞;不同组织来源的成纤维细胞在最佳分离培养日龄、原代细胞贴壁时间、细胞纯度、传代次数及冻存后细胞活率等方面存在明显差异;与对照组相比,所有东方田鼠成纤维细胞培养上清均没有显著的体外杀伤日本血吸虫童虫的活性。结果表明,东方田鼠不同组织成纤维细胞的体外培养方法及生物学特性不同。
- 成钢吴侠曾文虎王京仁李淑红李峰
- 关键词：东方田鼠成纤维细胞
- 东方田鼠肺成纤维细胞的分离培养及其对日本血吸虫的杀伤作用被引量：6
- 2012年
- 目的探索和建立东方田鼠肺成纤维细胞体外分离、培养的技术方法,并观察其对日本血吸虫的杀伤作用。方法运用含15%小牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)和RPMI 1640两种培养体系,采用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1、3和5 d的东方田鼠乳鼠肺成纤维细胞(Microtus fortis lung fibroblasts,MfLF)进行原代分离、培养,倒置显微镜下观察MfLF形态和生长特性.第2代和第3代MfLF培养上清与日本血吸虫童虫共培养96 h,观察其对童虫的杀伤效果。结果实验发现,采用胰酶消化法培养,只有少量MfLF细胞缓慢贴壁生长,而组织块贴壁法MfLF贴壁速度较快。不同日龄幼鼠的肺成纤维细胞采用组织块贴壁法培养,细胞活率和细胞纯度以1～3日龄乳鼠为最佳。在DMEM和RPMI 1640两种培养液中MfLF均可传代培养,两者无明显差异。MfLF体外只可传代4～5次。日本血吸虫童虫经第2代和第3代MfLF培养上清处理后,死亡率分别为9.5%和10.5%,与阴性对照(8.8%)比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论提示组织块贴壁法适用于MfLF的体外培养,但MfLF培养上清对日本血吸虫童虫无明显杀伤效果。
- 成钢王京仁王文彬李淑红曾文虎
- 关键词：东方田鼠肺成纤维细胞日本血吸虫
- 东方田鼠感染日本血吸虫后腹腔细胞的培养研究被引量：2
- 2013年
- 为明确东方田鼠腹腔细胞在感染日本血吸虫后的变化特征,用无菌PBS灌洗日本血吸虫感染后的东方田鼠腹腔,离心洗涤细胞沉淀,用含150mL/L小牛血清的DMEM培养基培养细胞,HE染色、瑞特染液染色和姬姆萨染色后用倒置显微镜观察细胞形态特征。与正常东方田鼠腹腔细胞相比,东方田鼠感染血吸虫后腹腔细胞种类较多,细胞形态不规则,且随培养时间的延长,有大量细胞集落出现,并依次呈现增殖、变形、崩解及纤维样的变化,纤维样腹腔细胞可传代1次。结果表明,东方田鼠感染日本血吸虫后,其腹腔细胞类型和数量发生了较大改变,为深入研究东方田鼠腹腔微环境在其抗血吸虫中的作用及进一步的体内外免疫学试验提供了技术方法和操作依据。
- 成钢王京仁李淑红王文彬曾文虎
- 关键词：东方田鼠日本血吸虫
- 动物抗病原体感染抗性相关基因研究进展
- 2012年
- 遗传因素是造成动物个体对病原微生物易感性与抗性差异的根本原因。了解和认识动物抗病原微生物感染的天然机制,需要克隆与鉴定宿主抗性相关基因,从基因水平揭示动物易感性和抗性机制,最终从本质上防止和控制疾病的发生与流行。现就动物抗性相关基因研究的意义与方法、种类与分布、抗性基因产生的基础及应用前景等方面进行了综述。
- 成钢王京仁李淑红王兴平
- 关键词：病原体感染抗性基因
- 内源性硫化氢及其生物学效应被引量：2
- 2012年
- 硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)是一种具有臭鸡蛋刺激性气味的无色有毒气体,目前被认为是继一氧化氮和一氧化碳之后的第三个气体信号分子,参与体内多种生理及病理过程,具有广泛的生物学效应。H2S已成为当前生物学及医学领域一项崭新的研究课题,受到越来越多科研人员和制药企业的重视。本文就H2S近年来的研究进展做一综述。
- 成钢王京仁
- 关键词：硫化氢硫氢化钠气体信号分子生物学效应
- 东方田鼠皮肤成纤维永生化细胞的建立被引量：4
- 2013年
- 为建立东方田鼠皮肤成纤维细胞(MfSF)系,本研究采用脂质体基因转染法将含有SV40T基因的pSV3neo重组质粒导入原代MfSF中,通过G418筛选,阳性克隆扩大培养,建立永生化M fSF系。实验结果表明,阳性细胞克隆在G418筛选第三周后出现,经扩大培养已稳定传代达42代,而且生长状态良好,PCR及RT-PCR检测结果表明,SV40 T基因已整合到M fSF中并稳定表达。本研究利用SV40T基因导入制备了永生化M fSF细胞系,为动物间成纤维细胞比较研究及相关病原的研究提供了敏感细胞系。
- 成钢王京仁曾文虎李淑红王文彬
- 关键词：东方田鼠皮肤成纤维细胞永生化SV40T抗原
- 东方田鼠组织与血清中抗日本血吸虫相关蛋白的分离与筛选被引量：2
- 2013年
- 本试验以兔、牛、人及感染日本血吸虫后小鼠血清蛋白为对照,分别提取东方田鼠和小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、皮肤、骨髓和脑组织蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,综合比较和筛选东方田鼠组织及血清中潜在的抗日本血吸虫相关蛋白组分。结果表明,随着感染日龄的增加,小鼠在感染日本血吸虫后12和45d,其血清中85ku附近蛋白质条带较东方田鼠表达量明显上调,且有继续升高的趋势;东方田鼠肝脏及血清中150ku组分蛋白电泳条带与其他动物相同组织中相应蛋白质在表达量存在显著差异,蛋白质表达丰度高,该蛋白质组分可能与东方田鼠抗日本血吸虫作用相关。
- 成钢徐春娟王京仁李淑红曾文虎
- 关键词：东方田鼠日本血吸虫
- 室内繁殖东方田鼠感染日本血吸虫的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的比较室内繁殖东方田鼠与昆明鼠感染日本血吸虫后不同阶段脏器病变以及体内日本血吸虫发育与存活状况。方法采用日本血吸虫尾蚴感染健康东方田鼠和昆明鼠,在感染后12、20、40 d剖杀,观察并比较东方田鼠以及昆明鼠肝、肾、肺等脏器组织病变及体内日本血吸虫发育与存活情况。结果日本血吸虫感染后12、20 d昆明小鼠和感染40d后东方田鼠的内脏器官均未出现明显病变;感染12 d及20 d后的东方田鼠肝脏、肾脏及脾脏出现明显白色结节,且以感染12 d的组织病变更为明显,部分东方田鼠病变组织仅见于肝脏。病理切片显示,病变肝脏和肾脏组织中存在完整日本血吸虫虫体,与正常组织界限分明;而无病变的肝脏和肾脏组织病理切片未发现虫体。结论室内繁殖东方田鼠感染日本血吸虫后12 d免疫反应剧烈且存在明显的个体差异。
- 成钢曾文虎王京仁王文彬李淑红
- 关键词：日本血吸虫东方田鼠免疫反应病理切片
