湖北省科技攻关计划(2001AA201B01)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 相关作者：毕丁仁李自力许青荣陈绳亮钟靖更多>>
- 相关机构：华中农业大学中国科学院长江大学更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划中国科学院知识创新工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸭疫里默氏杆菌的分离与鉴定被引量：1
- 2006年
- 对武汉周边地区的病鸭进行了病理剖检及细菌分离培养,并对分离的菌株进行了生化鉴定,最后确定此病为鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的。感染鸭为2～6周龄,RA易在病死鸭的肝脏、脾脏、血液等处分离到,特别是在脑组织中极易分离。该分离菌株的血清型鉴定结果为Ⅰ型RA,药敏试验结果显示对诺氟沙星高度敏感。
- 熊涛李自力毕丁仁
- 关键词：药敏试验
- 鸭疫里默氏杆菌OmpA基因的克隆与表达被引量：4
- 2008年
- 利用本实验室分离、鉴定并保存的鸭疫里默氏杆菌血清1型湖北云梦分离株(RA-YM),根据GenBank上的序列设计了1对引物,用PCR方法扩增了RA-YM株的主要外膜蛋白OmpA基因,并克隆到pMD18-T载体,序列测定结果表明OmpA基因全长1152bp,序列同源性分析表明该基因相当保守,与其他不同RA菌株OmpA基因之间的核苷酸序列同源性为93%～97%。用pGEX-KG构建了原核表达载体pKG-OmpA,在大肠杆菌中进行了高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的30%,主要为包涵体形式。SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白大小约为68000,Western-blot结果表明该表达蛋白具有抗原性。
- 周祖涛陈芬芬李自力胡思顺孙淑娜吴仁蔚肖运才许青荣毕丁仁
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌克隆原核表达
- 我国一株鹦鹉幼雏病病毒全序列测定与初步分析被引量：1
- 2005年
- 采用鸡胚成纤维细胞(CEF)培养增殖首次从湖北省云梦县分离的鹦鹉幼雏病病毒(Budgerigar fledgling disease virus,BFDV)分离株(BFDV-HBYM02),经PCR分段扩增法获得全基因组并完成序列测定.HBYM02株全序列测定结果与GenBank中仅有的六株BFDV全序列进行同源性与进化分析.经BLAST分析,HBYM02株与其他六株BFDV同源性为98%～99%,为同一个基因型.运用Phylip3.5软件构建进化树,分析显示,来源于不同宿主的BFDV与宿主关系紧密,与地理分布没有明显的相关性.
- 寇铮李天宪钟靖陈绳亮范兆军张忠
- 关键词：进化
- 鹦鹉幼雏病毒结构蛋白VP1基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2004年
- 采用湖北省云梦县患鹦鹉幼雏病死亡的虎皮鹦鹉体内分离得到的鹦鹉幼雏病毒 (budgerigarfledglingdiseasevirus,BFDV) ,应用PCR方法获得BFDV主要结构蛋白基因 (VP1) ,克隆到 pMD18 T载体 ,构建重组质粒 pMD18T VP1并进行测序 ,结果显示 ,结构蛋白基因 (VP1)与BFDV欧美分离株的同源性为 96 %～ 99% ,表明VP1是BFDV保守基因 ;将VP1亚克隆到原核表达载体pET32 (+)b ,构建重组质粒 pET32 (+)b VP1,转化菌株BL2 1(DE3) ,诱导表达 ,经SDS PAGE和Western blot分析 ,克隆在his tag下游的结构蛋白基因获得了高效融合表达 ,表达的融合蛋白分子量约为 5 5kD。为建立快速、灵敏的鹦鹉幼雏病毒血清学检测方法以及研制基因工程疫苗提供了科学依据。
- 寇铮陈绳亮钟靖李天宪喻子牛
- 关键词：克隆与原核表达
- 湖北鸭疫里氏杆菌分离株人工感染试验及灭活疫苗研制被引量：7
- 2004年
- 近两年来,湖北省部分地区发生了以雏鸭传染性浆膜炎为主要特征的疾病,经实验室诊断确诊为鸭疫里氏杆菌病。用分离的Ⅰ型鸭疫里氏杆菌菌株(云梦株)进行了人工感染试验,并以此菌株作为种毒,研制了3种含菌量不同的单价灭活水剂苗和1种灭活油剂苗,其平均保护率为54.0％-67.1％。
- 李自力熊涛毕丁仁石德时胡薛英许青荣程峰
- 关键词：鸭疫里氏杆菌灭活疫苗
