国家自然科学基金(50478048)
- 作品数：9 被引量：87H指数：7
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- 环境水体中肠道病原细菌定量PCR检测与膜过滤分析方法的比较被引量：7
- 2008年
- 采用通用引物，通过实时荧光定量PCR方法（QPCR），对西安市5个地表水体中肠道病原细菌的细胞密度进行了分析．检测水样体积为100mL，分别于2006年3-6月取自水源水（黑河）、景观娱乐用水（大唐芙蓉园北湖和兴庆湖）、纳污河（泸河）和未消毒的二级出水（北石桥污水处理厂），并将QPCR检测结果与滤膜法（MF）测得的细菌总数、大肠菌群和粪大肠杆菌CFU结果进行了比较分析．5个水体（n=60）检测结果显示，QPCR检测结果是大肠菌群CFU的2，2-5倍，是粪大肠杆菌CFU的7-14倍．病原细菌检测的几何平均值范围，QPCR法在25-67000 CCE·100mL^-1之间，MF法大肠菌群在3-45000 CFU·100mL^-1之间，粪大肠菌群在0-3000 CFU·100mL^-1之间（n=60）．两种方法的检测结果使用Spearman秩相关法来计算，结果显示，QPCR检测结果与大肠菌群、细菌总数以及粪大肠杆菌CFU均呈现显著正相关，秩相关系数分别为r=0．983、r=0．908和r=0．948．
- 刘永军张崇淼王晓昌吕英俊李昂臻薛小平
- 关键词：通用引物病原细菌定量PCR膜过滤
- 环境水体中肠道病毒的膜吸附-洗脱浓缩方法研究被引量：21
- 2007年
- 在膜吸附-洗脱和洗脱液浓缩相结合的基础上,建立了一种简便实用的水中肠道病毒浓缩方法.通过实时定量RT-PCR检测,比较了不同材料和不同孔径的微孔滤膜对病毒的吸附效果;对膜洗脱方式进行了改进;研究了在洗脱液浓缩过程中,PEG浓度对于病毒回收率的影响.最后确定了最佳的浓缩方法.选择效果好而且来源广泛的0.22μm孔径的混合纤维素酯微孔滤膜,采用磁力搅拌来洗脱滤膜上吸附的病毒;洗脱液浓缩步骤中,PEG最佳质量浓度为130 g/L.系统比较了不同病毒接种量下,方法中各步骤的病毒回收率.对接种已知量的肠道病毒的生活污水、二级处理出水和地表水等样品的试验结果表明,该方法效果稳定,适合不同水样中肠道病毒的浓缩分离.
- 张崇淼刘永军王晓昌薛小平
- 关键词：微孔滤膜实时定量RT-PCR
- 通用引物PCR方法在地表水病原菌检测中的应用被引量：19
- 2007年
- 为了探索通用引物PCR方法在地表水病原细菌检测中的应用价值,利用16S rRNA基因的高度保守性,设计并合成细菌的通用引物,采用合成的引物扩增参考菌株及西安市区不同地表水样,并对PCR产物分别进行序列测定及序列同源性分析,同时检测水样中的细菌总数和粪大肠杆菌浓度.结果显示,通用引物扩增4种参考菌株,320 bp处均可得到清晰的电泳条带,其特异性通过序列测定及同源性分析得到进一步验证;通用引物PCR可检出250 ng/L的埃希氏大肠杆菌标准菌株DNA,其PCR检测的灵敏度可达0.275 CFU/mL;用通用引物对西安市区不同地表水样进行PCR扩增,其中河、兴庆湖、大唐芙蓉园北湖、北石桥污水处理厂出水样品320 bp处都得到了清晰的电泳条带,而黑河水样没有条带;与之相对应的粪大肠杆菌群检测结果显示,只有北石桥污水处理厂出水和兴庆湖水样有粪大肠杆菌检出.
- 刘永军张崇淼王晓昌孙茵薛小平
- 关键词：通用引物病原菌地表水
- 环境水体中肠道病毒浓缩方法的比较被引量：19
- 2007年
- 向水样中接种已知量的脊髓灰质炎病毒,然后利用微孔滤膜吸附—洗脱法、滑石粉—硅藻土吸附层吸附—洗脱法、化学絮凝沉淀法和滑石粉—硅藻土絮凝沉淀法等4种不同的浓缩方法对水样中的病毒进行浓缩,并采用实时定量RT-PCR技术对各方法浓缩后样品中的病毒进行扩增和检测。综合考虑病毒回收率和浓缩方法的可靠性与简便性等因素,确定微孔滤膜吸附—洗脱法为最优的浓缩方案。此外,还比较了三种洗脱液和两种二次浓缩方法的效果,并对各步骤的回收率进行了分析。
- 张崇淼刘永军王晓昌薛小平王春
- 关键词：肠道病毒脊髓灰质炎病毒
- 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术同时检测水中多种肠道病毒被引量：20
- 2007年
- 建立了一种利用通用引物RT-PCR技术检测水中肠道病毒的方法.利用脊髓灰质炎病毒1～3型,柯萨奇病毒B3型作为参考病毒株,根据肠道病毒RNA5′非编码区中具有高度同源性的序列来设计通用引物.比较了M-MLV酶和AMV酶的逆转录效果,AMV酶能够成功地从地表水和生活污水中逆转录病毒RNA,更适于实际应用.对比研究了PCR过程中的退火温度,c(Mg2+)等因素对RT-PCR检测结果的影响,选择退火温度55℃,c(Mg2+)为2 mmol/L的反应条件,优化了RT-PCR检测方法.通过检测水样中接种的连续稀释的病毒,确定了该检测方法的灵敏度为38 CCID50.考察人工污染的地表水、污水、二级处理出水样品发现,检测灵敏度基本一致.该方法可应用在实际环境的肠道病毒检测中.
- 张崇淼刘永军王晓昌薛小平
- 关键词：肠道病毒通用引物
- 环境水体中肠道病原细菌的定量PCR检测被引量：10
- 2008年
- 采用通用引物,通过实时荧光定量PCR方法（QPCR）,对西安市5处地表水体中肠道病原细菌的细胞密度进行4个月的连续检测,并将QPCR检测结果与滤膜法测得的大肠菌群CFU值进行比较分析.结果显示,QPCR法可信度为94%,最小检测值为每管未稀释DNA提取物含2.7个大肠杆菌细胞.5个水体（N=60）检测结果表明,QPCR检测结果是大肠菌群CFU的2.2-5倍.病原细菌的几何平均值范围,QPCR法在25-67000 CCE/100 mL之间,MF法大肠菌群为3-45000 CFU/100 mL之间.2种方法的离散和回归分析表明,QPCR检测结果与大肠菌群CFU显著正相关,秩相关系数为r=0.983.
- 刘永军张崇淼王晓昌吕英俊左丽丽
- 关键词：通用引物病原细菌定量PCR膜过滤
- 水环境中病毒的分布存活及其健康风险评价被引量：9
- 2007年
- 病原体污染及其对人体的危害是倍受关注的全球性环境问题,由于水环境污染或水系传播而引起的病原体感染仍是当今世界上危害范围最广的环境问题,本文对水环境中的病毒分布和病毒进入受纳水体后的存活情况以及影响病毒存活的各种因素进行了论述.城市污水中含有大量的病原体,水体中的病毒污染主要来源是污水,光照和温度是影响水环境中病毒存活的关键因素.针对病原体造成的人体健康风险,介绍了国内外常用的病毒对人体健康风险评价的方法.
- 仇付国王晓昌
- 关键词：病毒水环境病原体
- 再生水处理工艺对病原微生物去除效果评价被引量：4
- 2008年
- 城市污水再生利用过程中病原体对人体健康的影响一直是倍受关注的焦点,再生回用工艺普遍采用多种深度处理技术的组合,如何准确有效评价组合工艺对病原微生物的去除效果成为再生水安全性评价的关键问题。本文对混凝沉淀过滤、臭氧生物活性炭、超滤各自去除城市污水中总大肠菌群的效果进行了试验研究,在此基础上,建立了三种技术联用工艺对病原微生物整体去除效果的蒙特卡洛(Monte-Carlo)评价方法,评价了混凝沉淀过滤-生物活性炭-超滤联用处理流程对总大肠菌群的去除效果,计算结果证明这种评价分析方法是可行的。
- 仇付国王敏
- 关键词：蒙特卡洛方法污水回用再生水总大肠菌群
- 二级处理出水中肠道病毒的PCR检测研究被引量：3
- 2008年
- 建立了二级处理出水中肠道病毒的巢式PCR检测方法。在2006年7月至2007年2月期间分别用第一次PCR和巢式PCR方法对西安市北石桥污水净化中心的二级处理出水中的肠道病毒进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为12.5%和87.5%。另外,还对二级处理出水中的肠道病毒含量和温度、pH值等理化指标的关系作了分析。
- 姬晓琴张崇淼刘永军
- 关键词：PCR肠道病毒二级处理出水
