国家自然科学基金(31160227)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王立民周平张译元唐红郭延华更多>>
- 相关机构：新疆农垦科学院新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室石河子大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项兵团博士基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊体细胞核移植融合效率影响因素的研究被引量：3
- 2014年
- 【目的】提高克隆胚胎融合率。【方法】从受体卵母细胞的细胞松弛素处理组与对照组,供体细胞的梯度差速选择(胰酶浓度0.1%、0.25%,消化时间3 min、1 min)和4组电脉冲融合参数(100 V、120 V、130 V、150 V)等3个环节对绵羊体细胞核移显微操作进行了优化,以重构胚胎的融合率和卵裂率作为检测指标。【结果】未经细胞松弛素的卵母细胞组融合率显著高于试验组(P<0.05),而胚胎卵裂率差异不显著(P>0.05);胰酶梯度差速消化供体细胞具有初选作用,各组融合率为71.71%、75.86%、78.75%、75.56%,融合压为130 V时融合率最高。【结论】优化后的程序更适合克隆胚胎的膜融合。
- 郭延华王立民唐红张译元周平
- 关键词：细胞松弛素胰酶膜融合
- H19基因在克隆羊原代与后代中的甲基化模式
- 2014年
- 为了探讨H19基因CpG岛甲基化变化对克隆羊及后代羊生长的影响,试验采用亚硫酸盐测序法分析成活克隆羊原代、后代与普通羊血细胞中H19基因CpG岛甲基化水平。结果表明:克隆羊原代(71.00%、70.00%)、后代(67.50%、68.50%)H19基因CpG岛甲基化水平与对照组(77.00%、66.00%)相比差异不显著(P>0.05),但对照组H19基因CpG岛甲基化水平显著差异(P<0.05),说明克隆羊与后代羊血液H19基因CpG岛甲基化水平接近,不会影响克隆动物及其后代的生长,但血细胞H19基因CpG岛甲基化水平与品种有关。
- 郭延华张译元唐红王立民周平
- 关键词：克隆绵羊
- 供体细胞对绵羊转基因体细胞克隆胚胎体外发育影响的研究
- 2016年
- 研究比较了转入不同外源基因、转同一基因的不同细胞克隆、供体细胞的培养代数及冷冻对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育的影响,旨在为进一步探寻建立供体细胞个性化准备方案,为提高动物克隆效率提供参考。结果表明,转不同外源基因的供体细胞对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育无影响;转同一基因的不同细胞克隆对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育有一定影响,且转TERT基因的不同克隆间的重构胚的融合率及囊胚率差异显著(P<0.05)。随着供体细胞培养代数的增加,重构胚体外发育的桑葚胚率及囊胚率无显著影响,但融合率随着培养代数的增加有上升趋势,且差异显著(P<0.05);供体细胞冷冻可促进其融合率、桑葚胚率及囊胚率。研究结果表明,供体细胞的不同克隆、培养代数、冷冻等因素对转基因效率有一定的影响。
- 唐红张宾张译元郭延华王立民江中良周平
- 关键词：绵羊体细胞核移植供体细胞
- 绵羊胚胎不同发育阶段及其组织中MicroRNA-483-5p表达分析
- 2016年
- 【目的】研究MicroRNA(miR)483-5p在中国美利奴羊胚胎不同发育阶段肾脏和脐带组织中的表达变化,以了解其在绵羊胚胎发育中的重要作用。【方法】选择中国美利奴羊胚胎不同发育时期(45、85、115和135 d 4个时期)肾脏和脐带组织为研究材料,采用半定量RT-PCR检测第45 d绵羊胚胎不同组织中miR-483-5p的表达;同时利用实时荧光定量PCR对miR-483-5p在绵羊胚胎不同发育阶段肾脏和脐带组织的表达变化进行实时检测。【结果】miR-483-5p在所检测的绵羊45 d胚胎各组织中广泛表达,其中以肌肉、心脏和肺脏组织表达丰度最高。实时荧光定量PCR结果显示,不同发育阶段绵羊胚胎肾脏和脐带组织miR-483-5p的表达具有明显的时空选择性。脐带组织miR-483-5p随着胚胎发育其表达量呈逐渐下降的趋势;肾脏组织miR-483-5p则是随着胚胎发育在第85 d其表达量下降到最低,其后在115和135 d其表达量又逐渐上升。不同发育阶段胚胎肾脏、脐带组织miR-483-5p的表达量呈显著性差异(P<0.05)。【结论】miR-483-5p在绵羊胚胎不同发育阶段肾脏或脐带组织中表达明显不同,表明其表达具有选择性;依据miR-483-5p表达的差异性及其涉及的生物学功能,推测miR-483-5p在绵羊脐带和肾脏组织中具有一定的调控作用。研究为进一步了解miR-483-5p在胚胎肾脏和脐带发育中的作用机制提供一定的理论依据。
- 张译元唐红郭延华王新华王立民周平
- 关键词：绵羊胚胎
- 实时定量PCR检测转基因绵羊拷贝数被引量：2
- 2015年
- 【目的】利用高通量、快速、灵敏的实时荧光定量PCR法,检测转类胰岛素样生长因子1-红色荧光蛋白基因(insulin-like growth factor 1-red fluorescent protein,IGF1-RFP)绵羊中外源基因的拷贝数。【方法】以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为绵羊的内源参照基因,梯度稀释法。【结果】分别获得RFP和GAPDH基因的Ct值与起始模板数的相关性标准曲线,R2分别为0.999和0.999,相关性高。通过比较目的基因RFP和GAPDH起始模板数,得到外源基因在转基因绵羊中的拷贝数。编号0152、0216、0217、0218的转基因绵羊拷贝数分别为3、1、1、1。【结论】以IGF-I转基因细毛羊为研究对象,针对外源基因序列和内源参照基因序列设计特异性引物,利用实时荧光定量PCR法对IGF-I转基因细毛羊外源基因的拷贝数进行检测,并且准确检测外源基因的拷贝数。
- 赵帅王立民王聪慧唐红张宾郭延华张译元赵兴旺丁新平张银国周平
- 关键词：转基因绵羊实时荧光定量PCR拷贝数
