国家自然科学基金(30900851)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：吴秀山雷孝锋江志刚万永奇邓云更多>>
- 相关机构：湖南师范大学北京化工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 应用重叠延伸法合成人源明胶基因及其克隆被引量：1
- 2011年
- 由于传统的磷酸化补齐方法对于重复序列较高的基因的合成困难较大,建立一种用于克隆全长基因的重叠延伸法并获得了成功,对全长基因进行分段扩增,从而使分段扩增片段得以重叠并互为模板,在DNA聚合酶的作用下延伸获得全长基因.根据NCB I中Ⅰ型胶原蛋白α1链结构基因第531~630个氨基酸的编码序列,设计合成了10条长度约为50 bp左右的寡聚核苷酸片段,用重叠延伸PCR法扩增合成出全长基因.PCR产物经回收后,克隆入载体pGEM-T中,并导入细菌中进行扩增.结果：经凝胶电泳和酶切鉴定、测序分析证实,合成的目的基因与设计的序列相一致.
- 段慧明陈劲春
- 关键词：重叠延伸PCR克隆
- 果蝇血液标记基因srp原核表达质粒构建及多克隆抗体制备被引量：2
- 2011年
- 果蝇基因srp是血液发育的早期标记基因,为了研究果蝇这一模式动物中血液发育的详尽过程,通过提取野生型成体果蝇的总RNA,反转录获得其cDNA文库,设计引物克隆出srp基因,将所得片段插入原核表达载体pET28a中,经酶切和序列鉴定,成功构建重组质粒,并通过IPTG诱导表达出His-srp融合蛋白,经Ni-IDA凝胶柱纯化后,免疫新西兰大白兔制备srp多克隆抗体,为血液发育研究奠定了基础.
- 鲁建鑫雷孝锋李帆江志刚吴秀山万永奇
- 关键词：果蝇SRP原核表达多克隆抗体
- 斑马鱼CFL基因的克隆、多克隆抗体的制备及分析
- 2013年
- 在心脏发育过程中,相关基因的正常表达是有功能心脏形成的关键.斑马鱼CFL基因是从斑马鱼胚胎的cDNA文库中克隆出来的一个心脏发育候选基因.生物信息学分析表明:CFL基因编码278个氨基酸,含有一个CXXC结构域.为进一步研究该基因的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了该基因.将所得片段插入原核表达载体pET-28a载体中,经测序鉴定正确后转化入Rosetta菌株中,用IPTG诱导表达出pET-28a-CFL融合蛋白,表达的融合蛋白占菌体总蛋白的71%,融合蛋白相对分子质量约为30 kD.经包涵体纯化后,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体.经验证,具有较好的特异性和较高的效价,可以用作western-blot免疫印迹等实验分析.
- 王盼盼彭夕洋易珍江志刚邓云吴秀山万永奇
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- 果蝇心脏发育标记基因Kruppel的多克隆抗体制备
- 2012年
- Kruppel在果蝇发育过程中起着重要的调控作用。为了进一步研究Kruppel的功能,需要制备Kruppel蛋白及其抗体.对已有的Kruppel序列进行分析,选取适当区域进行引物设计,从果蝇心脏cDNA文库中PCR扩增得到Kruppel部分编码区序列,并其连接到pET-28a载体上。将重组质粒(pET-28a-Kruppel)转化rosetta受体菌,通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogalactoside)诱导表达融合蛋白,用镍柱进行亲和纯化。将纯化得到的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blot检测抗体的效价。
- 黄婷雷旻音朱玲刘腾江志钢吴秀山邓云
- 关键词：融合蛋白果蝇多克隆抗体
- 斑马鱼loc558117基因的多克隆抗体制备被引量：4
- 2011年
- loc558117基因是trim45在斑马鱼中的同源基因,小鼠及果蝇研究结果表明该基因与血细胞发育有关.利用PCR技术扩增斑马鱼loc558117基因部分编码区,并将其插入到原核表达载体pET-28a中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pET-28a-loc558117)转入Rosseta感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白,his柱子亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了loc558117原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗loc558117多克隆抗体.为进一步研究loc558117功能提供了有力工具.
- 李志姚立群雷孝锋王琨莫小阳吴秀山
- 关键词：斑马鱼融合蛋白多克隆抗体
