国家自然科学基金(81301634)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：解放军第一八一医院广西师范大学解放军第181医院更多>>
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- 人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤条件下肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及炎症因子分泌的影响被引量：1
- 2016年
- 目的观察人羊膜匀浆上清液（human amniotic homogenate supernatant,hAHS）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致伤条件下大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar typeⅡepithelial cell,AT-Ⅱ）增殖及肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）和白细胞介素1β（interleukin1 beta,IL-1β）分泌的影响。方法 1取健康胎盘来源的新鲜人羊膜制备hAHS,配制含hAHS体积分数不同的5组培养基（对照组、10%hAHS组、20%hAHS组、40%hAHS组、80%hAHS组）对大鼠AT-Ⅱ行分组培养,四甲基偶氮唑盐（microculture tetrazolium,MTT）法测不同时间点OD630值。2对对照组、LPS致伤组、40%hAHS干预组大鼠AT-Ⅱ行分组培养,MTT法和酶联免疫吸附剂测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法测不同时间点OD630值和培养液中大鼠TNF-α和IL-1β含量。结果 1对数期内前4组间各时间点比较,hAHS体积分数相对较高组别的OD630值也相对较高（即40%hAHS组〉20%hAHS组〉10%hAHS组〉对照组）,且第3-5天均有统计学差异（P〈0.05）,而hAHS含量更高的80%hAHS组,各时间点均低于40%hAHS组,且第3-5天有统计学差异（P〈0.05）。2 hAHS干预组在24 h后各时间点的OD630值不仅均高于LPS致伤组,也均高于对照组,且均有统计学差异（P〈0.05）。与此同时,hAHS干预组各时间点大鼠TNF-α和IL-1β含量均低于LPS致伤组,且二者均分别于前6 h各时间点组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 hAHS可显著促进体外正常培养条件下AT-Ⅱ的增殖,且对LPS致伤条件下AT-Ⅱ的增殖和TNF-α、IL-1β等促炎因子分泌具有保护和抑制作用。
- 莫永亮刘亮童亚林王磊吕璐陈云鹏阳齐琼詹球梁静朱富军辛海明
- 关键词：脂多糖细胞增殖炎症因子
- 不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖被引量：4
- 2014年
- 背景:许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。目的:观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞(RSC96)生长的影响。方法:使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数(0,10,15,20,25%)分组。结果与结论:人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为(470.625±2.546),(4.121±0.026)和(0.172±0.002)ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组(P<0.05);10%、15%人羊膜匀浆上清液组显示出促进细胞增殖的作用,而20%、25%人羊膜匀浆上清液组显示出抑制细胞增殖的作用;各实验组的细胞活力与对照组接近(P>0.05)。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时(10%和15%)具有促进RSC96增殖作用,高浓度时(20%和25%)抑制RSC96增殖。
- 刘亮王磊童亚林莫永亮吕璐陈云鹏杨文贤吕礼芳詹球朱富军辛海明龚震宇
- 关键词：许旺细胞细胞生长曲线MTT法
- 人羊膜间充质干细胞培养上清液对人成纤维细胞生物学功能的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞（hAMSC）培养上清液（hAMSC－CS）对人Fb生物学功能的影响。方法（1）取废弃胎盘新鲜羊膜组织，分离hAMSC，并进行传代培养。倒置相差显微镜下观察培养3 d及第3代hAMSC形态。（2）取2批次第3代hAMSC，免疫荧光染色法检测细胞波形蛋白表达，流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD73、CD105及CD45表达。（3）收集培养72 h的第3代hAMSC－CS，ELISA法检测其中胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ）、血管内皮生长因子（VEGF）、EGF、bFGF的含量。（4）取包皮环切术后废弃包皮，分离人Fb，并进行传代培养。采用第3代人Fb进行以下实验。按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为空白对照组及10%、30%、50%、70%hAMSC－CS组，每组48孔。空白对照组用含体积分数2%FBS的DMEM/F12培养液培养，后4组分别用含相应体积分数hAMSC－CS和体积分数2%FBS的DMEM/F12培养液培养。培养12、24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性。选取使人Fb增殖活性最高的相应体积分数hAMSC－CS用于以下实验。（5）另取人Fb，分为空白对照组及50%hAMSC－CS组，同（4）处理，每组4孔。分别于划痕后0（即刻）、12、24、48、72 h，于倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离。（6）另取人Fb，同（5）分组处理，每组3瓶，流式细胞仪检测细胞凋亡率。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验、t检验。结果（1）培养3 d，多数hAMSC形态较大，呈纺锤形多突起的Fb样或扁平多角形。第3代hAMSC呈梭形或纺锤形，波形蛋白表达呈强阳性，细胞表面标志物CD90、CD73、CD105表达阳性，CD45表达阴性。（2）hAMSC－CS中IGF－Ⅰ、VEGF、EGF、bFGF的含量分别为（11.7±1.0）、（316±68）、（6.1±0.4）、（1.49±0.05）pg/mL。（3）培养12～72 h，各hAMSC－CS组人Fb增殖活�
- 吴骐而吕璐辛海明罗亮童亚林莫永亮岳毅刚
- 关键词：间质干细胞成纤维细胞细胞运动干细胞
- 成批烧冲复合伤的监护与救治被引量：7
- 2014年
- 近距离大当量炸药爆炸导致严重烧冲复合伤[1与多发伤,临床救治难度大,病死率与致残率高.笔者单位成功救治了一批11例大当量炸药爆炸造成的烧冲复合伤病例,现总结如下.
- 杨福旺朱富军缪洪城辛海明冯小艳朱金红童亚林周亚辉汤桂花龚震宇邓建军刘顺财石立文邹篪陆德斌
- 关键词：烧冲复合伤临床救治监护多发伤致残率
- 人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤的大鼠肺微血管内皮细胞增殖及分泌炎症因子的影响被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨人羊膜匀浆上清液（hAHS）对脂多糖（LPS）致伤的大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVECs）增殖及其分泌促炎因子的影响。方法：用新鲜人羊膜制备hAHS,用考马斯亮蓝法和ELISA法分别测定hAHS中总蛋白和表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、白介素-4（IL-4）、IL-10、血管生成素-1（Ang-1）、人β-防御素2（HBD2）的含量。MTT法检测不同体积分数hAHS（0、10%、15%、20%、25%）作用于RPMVECs后细胞增殖活性的变化,确定hAHS促进RPMVECs增殖的最佳浓度。根据共培养条件不同,将RPMVECs随机分为4组：N组（10%FBS＋DMEM/F12）,A组（10%FBS＋DMEM/F12＋15%hAHS）,B组（10%FBS＋DMEM/F12＋LPS）和C组（10%FBS＋DMEM/F12＋15%hAHS＋LPS）。各组细胞在干预后0、12、24、48、72h用MTT法测定吸光度值（A值）,并分别于培养6、8、10、12、24h时用ELISA法测定RPMVECs培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的含量。结果：hAHS中总蛋白浓度为（725.125±12.625）mg/L,其中EGF、bFGF、VEGF、IL-4、IL-10、Ang-1、HBD2的浓度分别为（504.785±4.665）、（4.426±0.138）、（0.185±0.006）、（25.650±4.104）、（13.733±2.197）、（15.561±0.496）和（4.763±0.714）ng/L。hAHS的体积分数在10%~20%时均具有促进RPMVECs增殖的作用且以15%hAHS培养后第7、9天的增殖率最佳,而25%hAHS在第7、9、11天使RPMVECs增殖率小于0%hAHS组（P〈0.05）。A组48和72h细胞增殖活性较N组显著增加,B组24、48和72h的增殖活性较N组显著降低;C组24、48和72h的增殖活性较B组显著升高（P〈0.05）。ELISA结果显示,B组各时间点的IL-6和TNF-α的含量以及8、10、12和24h的IL-8含量均显著高于N组（P〈0.05）;C组10和12h的IL-6含量,8、10、12和24h的IL-8含量及各时间点的TNF-α含量均显著低于B组（P〈0.05）。结论：hAHS含有促进组织修复、调节免疫反应、降低血管通透性及杀伤致�
- 陈云鹏王磊童亚林刘亮吕璐莫永亮詹球阳齐琼梁静朱富军龚震宇辛海明
- 人羊膜匀浆上清液对大鼠角朊细胞生长的影响
- 2016年
- 目的观察不同浓度人羊膜匀浆上清液(h AHS)对体外培养的SD大鼠角朊细胞生长的影响。方法取SD大鼠背部皮肤,采用中性蛋白酶与胰蛋白酶复合消化的方法,分离第一代角朊细胞。将新鲜人羊膜制备成h AHS,采用考马斯亮蓝法、酶联免疫吸附试验分别测定h AHS中总蛋白含量和表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(b FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。用不同浓度h AHS对第一代角朊细胞进行体外培养:将细胞以2.5×104个/m L密度接种于96孔板中(每孔100μL),随机数字表法将其分为体积分数0(对照组)及10%、15%、20%、25%h AHS组,用含10%胎牛血清低糖培养基培养24 h后,根据h AHS在低糖DMEM培养基中的不同体积分数进行换液,分别于培养即刻和培养24、48、96 h,用噻唑兰法检测各孔的吸光度值并绘制角朊细胞的生长曲线和计算各组细胞增殖率。采用SPSS13.0统计软件进行分析,各不同体积分数h AHS组的数据与对照组比较采用Dunnett-t检验。结果 h AHS中总蛋白含量为(675.435±9.215)×10-3g/L,EGF、b FGF和VEGF的浓度分别为(470.625±2.546)×10-6、(4.121±0.026)×10-6和(0.172±0.002)×10-6g/L。与对照组比较,10%h AHS组培养48、96 h角朊细胞增殖率明显高于对照组,差异均有显著性统计学意义(t=4.644、9.694,P值均小于0.01),15%h AHS组培养48、96 h角朊细胞增殖率均明显高于对照组,差异均有显著性统计学意义(t=4.766、6.648,P值均小于0.01);20%h AHS组培养24 h角朊细胞增殖率高于对照组,差异有统计学意义(t=2.272,P<0.05),培养48、96 h增殖率均明显高于对照组,差异有显著性统计学意义(t=5.027、8.861,P值均小于0.01);25%h AHS组培养48 h增殖率低于对照组,差异有统计学意义(t=2.188,P<0.05),培养96 h增殖率明显低于对照组,差异有显著性统计学意义(t=5.147,P<0.01)。结论体积分数10%、15%、20%h AHS对体外培养的角朊细胞增殖有明显促进作用,且促增殖�
- 吕璐杨文贤童亚林王磊莫永亮刘亮詹球李泳朱富军辛海明龚震宇
- 关键词：羊膜角朊细胞细胞培养
