国家自然科学基金(30670591)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- ^(31)P-MRS检测标记基因表达肝直接基因转导初步研究
- 2011年
- 目的:探讨31P-MRS技术在兔VX2肝移植瘤模型经AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒基因转导后通过标记基因间接表达的可行性。方法:健康新西兰大白兔20只,采用开腹包埋法建立兔VX2肝肿瘤模型,将种植成功的18只实验兔随机分成两组,于3周左右行31P-MRS扫描后采用开腹法分别将等量AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒和生理盐水注射到两组瘤兔肿瘤及周围组织中,肌酸水溶液饲养5天后再次行31P-MRS扫描。同时通过免疫组化、琼脂糖凝胶蛋白印迹法(Western Blot)对IL-12和CK进行检测。结果:经AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒治疗后的兔肝VX2肿瘤组织PCr峰较对照组明显升高,分别为(0.84±0.41)、(0.23±0.29)mmol/L,两组治疗前后PCr比较,P值小于0.05,差异有统计学意义;免疫组化在治疗组肝脏局部组织中检测到IL-12的表达,对照组未见表达;Western Blot法检测到治疗组CKB的表达,但对照组未见表达。结论:通过31P-MRS成像检测病毒直接基因转导后体内肝脏的基因表达是可行的。
- 马艳红刘强王韶卿杨金永李子俊亓敏
- 关键词：磁共振波谱肝癌基因表达
- 磁共振波谱技术在肿瘤基因治疗效果评价中的应用价值被引量：2
- 2009年
- 刘强李保朋李子俊
- 关键词：磁共振波谱技术肿瘤基因细胞水平肿瘤治疗治疗基因
- pDC316-hIL-12-IRES-CKb双顺反子重组腺病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达
- 2010年
- 目的:构建含肌酸激酶(CK)基因和人白细胞介素12(hIL-12)基因的双顺反子重组腺病毒载体pDC316-hIL-12-IRES-CKb,并包装成重组腺病毒,检测其在肝细胞中蛋白表达和肝脏中磷酸肌酸的水平。方法:将PCR扩增的产物CK片段和hIL-12片段顺次插入双顺反子腺病毒载体(IES)中,经同源重组、包装和扩增获得重组腺病毒子。再用该病毒感染体外培养的兔肝细胞,经Western blotting检测到CK蛋白的表达和ELISA检测培养液中hIL-12水平。结果:体外实验在感染肝细胞后检测到CK和hIL-12蛋白的表达;同时体内实验应用核磁共振波谱(MRS)的方法能检测到肝脏特异性CK产物磷酸肌酸的水平。结论:携带CK和hIL-12基因的双顺反子重组腺病毒能使CK基因异源性地表达在肝脏并能用非侵袭性的MRS技术检测其表达。此载体的构建为进一步研究CK基因作为一个影像报告基因动态监测肝脏治疗基因hIL-12的表达奠定基础。
- 李子俊刘于保李东风秦玉璇李保朋马艳红刘强梁长虹
- 关键词：肌酸激酶白细胞介素12原代肝细胞
- 31P磁共振波谱分析技术监测兔肝移植瘤及白细胞介素12基因的表达
- 2010年
- 目的探讨31P磁共振波谱分析（31P MRS）技术监测AdCMVIL12-IRES—CKb腺病毒基因转导治疗兔VX2肝肿瘤的可行性。方法19只新西兰大白兔，随机取1只麻醉后，取1ml VX2瘤细胞悬液（1×10 7个／ml）注射于兔后腿外侧肌肉。待肿瘤长到鸡蛋大时，切开肿瘤，剪成1mm×1mm×1mm大小的组织块，将组织块以开腹包埋法接种到18只大白兔肝脏中，超声监测肿瘤的生长晴况，取肿瘤组织，行HE染色。18只大白兔随机分为治疗组（6只）、对照组（6只）和空白组（6只），经耳缘静脉分别注射等量的重组腺病毒AdCMVIL12-IRES—CKb颗粒（5×10 12粒／kg）、AdCMV-Empty颗粒（5×10 12粒／kg）和等渗盐水，注射处理后，肌酸水溶液饲养5d行31P MRS扫描。采用免疫组织化学和酶联免疫吸附法检测各组白细胞介素12（IL-12）水平，Western blot法检测脑型肌酸激酶（CKB）水平，超声法检测注射处理前后肿瘤的大小。采用统计软件SPSS 17．0，通过t检验、单因素方差分析、LSD法作统计学处理。结果肿瘤接种后15d左右，直径增至1．5～1．7cm，彩色多普勒超声检查血流成像显示肿瘤周边可见供血小动脉直通肿瘤内部。兔肝脏肿瘤模型表面可见突出的瘤体，质地偏硬，标本切面见肿瘤组织呈灰白色、鱼肉状，与周围正常肝组织分界欠清楚。HE染色显示肿瘤呈浸润性生长，可见明显异型性。治疗组、空白组和对照组注射处理前、后肿瘤直径分别为（1．63±0．04）cm和（1．62±0．03）cm、（1．59±0．05）cm和（1．84±0．11）cm、（1．60±0．02）cm和（2．07±0．12）cm，与注射处理前比较，空白组和对照组大白兔肿瘤直径增大，t值分别为-5．291、-9．475，P值均〈0．05，差异有统计学意义，治疗组注射处理前后肿瘤直径差异无统计学意义。兔肝肿瘤经AdCMVIL12-IRES—CKb腺病毒治疗后，肝组织内IL—12相关信号获得表达，
- 李子俊马艳红刘强王韶卿王宁李保朋陈洁杨金永刘于宝梁长虹
- 关键词：肝肿瘤基因疗法肌酸激酶
