台州市科技计划项目(091KY04)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：温州医学院浙江大学更多>>
- 发文基金：台州市科技计划项目国家自然科学基金浙江省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抑癌基因ING2真核表达质粒的建立及其对肺癌细胞生长的影响
- 2012年
- 目的构建抑癌基因生长抑制因子2（ING2）真核表达载体，研究p331NG2对人肺腺癌细胞A549及人小细胞肺癌细胞NCI—H446体外生长的影响。方法构建ING2基因的真核表达载体pcDNA3．1（＋）—ING2，采用脂质体法分另U转染A549和NCI-H446细胞，以未转染组和转染pcDNA3．1（＋）空质粒组作为对照，应用RT-PCR、细胞免疫组化和Westernblot法分析目的基因及其蛋白表达，CCK8试剂盒分析其对细胞生长的影响，AnnexinV-FITC和PI双染流式细胞术观察细胞凋亡的情况。结果成功构建了重组真核表达载体pcDNA3．1（＋）-ING2，转染后细胞株高水平表达ING2mRNA及p331NG2蛋白。CCK8法检测结果显示：转染pcDNA3．1（＋）-ING2的A549细胞和NCl-H446细胞增殖受到抑制，抑制率与pcDNA3．1（＋）空质粒转染组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞术凋亡检测结果显示：转染pcDNA3．1（＋）-ING2的A549细胞和NCI—H446细胞组凋亡率均高于未转染组和pcDNA3．1（＋）空质粒转染组，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论ING2蛋白表达能抑制人肺腺癌细胞A549和人小细胞肺癌细胞NCI—H446增殖及增加细胞凋亡率。
- 潘映秋章霞周美英颜卫华
- 关键词：肺癌基因转染凋亡
- 基于水凝胶的基因组DNA固定法研究
- 2013年
- 目的:通过对人基因组DNA固定化的研究,探讨特异性高的单点共价固定方法,实现对人基因组DNA的反复利用。方法:选取Mirzabekov等发明的DNA-水凝胶共聚化学法作为基因组DNA固定方法,使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,以(CH2)6-NH2氨基末端修饰的PCR产物及甲酸随机断裂修饰的pGEM-T-HLA-G质粒为模板,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其固定效率,并通过PCR法检测该固定方法的热稳定性。将该法初步应用于人类基因组DNA的固定和反复利用,对基因组DNA扩增的片段进行测序,排除突变可能。结果:使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,实现了对质粒DNA以及人基因组DNA的固定和反复使用,该方法可以经受16轮的PCR扩增(每轮36个循环)。测序结果证实基因组DNA的扩增片段未发生突变。结论:甲基丙烯酰胺凝胶法固定DNA的热稳定性好,特异性高,可用于全基因组测序及SNP检测。
- 潘映秋张伟陈枢青
- 关键词：基因组聚合酶链反应基因扩增水凝胶电泳
- 全基因组序列分析——揭示肿瘤发生发展及个体化治疗的新途径
- 2013年
- 随着全基因组测序技术的发展和测序成本的下降,以及全基因组测序技术与DNA甲基化和组蛋白乙酰化等表观遗传学分析手段的结合,对大量样本进行全面系统的分析已经成为现实,人类已具备了重新认识肿瘤发生发展的能力。从以往的不同个体之间的全基因组序列的比对,到最近大量自身不同组织的横向比对,自身基因组的纵向比对,新思路层出不穷,个体化诊治肿瘤已显露出光明的前景。
- 潘映秋张伟陈枢青
- 关键词：基因组碱基序列肿瘤
