国家科技支撑计划(2007BAD40B01)
- 作品数：19 被引量：72H指数：7
- 相关作者：何孔旺张雪寒茅爱华俞正玉骆学农更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划江苏省自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析被引量：7
- 2008年
- 应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。以Western blot检测重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验分析2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66ku,与预期大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。
- 赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯
- 关键词：原核表达纯化ELISA
- 大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制被引量：10
- 2010年
- 为建立快速检测鼠感染大肠杆菌O157∶H7后的抗体,本研究采用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果表明,该试纸条仅与O157∶H7阳性鼠血清发生特异性反应,用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157∶H7免疫鼠血清,抗体效价分别为1×106和1×105,两者的敏感度相当。该试纸条操作简便,10min可出结果,适用于调查与追溯鼠O157∶H7感染状况时的现场检测。
- 刘洁夏兴霞王永山张雪寒费荣梅何孔旺
- 关键词：胶体金
- 单核细胞增生李斯特菌溶血素的研究进展被引量：3
- 2009年
- 骆学农曹晓瑜才学鹏
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌溶血素食源性病原菌李斯特菌病人畜共患
- 出血性大肠杆菌O157:H7的2b-tir-1b多价融合蛋白表达及免疫原性研究
- 为了更好防治由出血性大肠杆菌O157:H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stxb的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基（Tir295）与stxB亚基基因72个氨基...
- 张雪寒何孔旺卢维彩赵攀登温立斌李彬郭容利王小敏倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新
- 关键词：志贺毒素融合基因免疫原性
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性
- 2011年
- 为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。共免疫2次,间隔14 d,末次免疫后14 d攻毒1只小鼠EHEC O157∶H7 1010CFU。每次免疫后的14 d通过断尾采血,用间接ELISA法检测血清抗体。攻毒后,观察小鼠精神状态,记录死亡数并检测排菌量。ELISA检测结果表明,Tir-Tccp蛋白质诱导小鼠产生IgG抗体水平明显升高,而Intimin诱导产生的IgG抗体升高不明显。攻毒后,各免疫组小鼠均死亡1只,存活14只,存活率为93.3%;对照组小鼠死亡4只,存活6只,存活率为60.0%。免疫组在攻毒后6 d,粪便中检测不到EHEC O157∶H7,对照组在攻毒后13 d仍有较高的排菌量。表明Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠起到了有效的免疫保护作用,能够减少EHEC O157∶H7在小鼠体内的定殖。
- 赵攀登张雪寒何孔旺姜平卢维彩栾晓婷叶青温立斌倪艳秀李彬王小敏郭容利周俊明吕立新俞正玉茅爱华
- 关键词：免疫原性小鼠
- 鼠伤寒沙门氏菌Χ4550 FlhD基因缺失株的构建被引量：7
- 2010年
- 为构建鼠伤寒沙门氏菌Χ4550FlhD基因缺失所致的鞭毛缺失株,采用PCR技术从减毒鼠伤寒沙门氏菌Χ4550基因组DNA中扩增出了鞭毛控制操纵子基因(FlhD)两侧翼基因片段,作为FlhD基因敲除所需的上臂和下臂的同源序列;以pKD4质粒为模板,扩增了卡那霉素(Km)抗性基因,并分别克隆入pMD18-T载体中,获得了重组质粒pMD-FlhD-U、pMD-FlhD-D和pMD-Km。将获得的上臂和下臂基因以及卡那霉素抗性基因通过拼接,构建重组质粒pMD-ΔFlhD/Km。将重组片段ΔFlhD/Km亚克隆入pG-MB151自杀质粒,并转化大肠杆菌χ7213,获得重组菌χ7213(pGMB151-ΔFlhD/Km)。将此细菌作为供体菌,与受体菌鼠伤寒沙门氏菌Χ4550进行固相杂交,经同源重组和抗生素筛选,获得鼠伤寒沙门氏菌Χ4550(ΔFlhD/Km)鞭毛缺失株。通过PCR扩增、动力学鉴定及电镜观察,显示鼠伤寒沙门氏菌Χ4550的FlhD基因已被成功敲除。证实,运用同源重组的方法可成功地敲除鼠伤寒沙门氏菌Χ4550的FlhD基因,并导致其鞭毛缺失,为鼠伤寒沙门氏菌鞭毛的功能研究奠定基础。
- 耿士忠潘志明方强胡娇陈祥焦新安
- 关键词：同源重组
- 出血性大肠杆菌O157:H7的Tir与Hly融合基因的构建和表达
- 2010年
- 构建表达Tir和Hly的融合基因,将Tir基因的C端414个氨基酸残基(Tir414)基因部分与Hly基因的C端300个氨基酸残基(Hly300)基因部分串联构建pET28a-Tir414-Hly300重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。由于该融合蛋白由Tir和Hly2部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和溶血素(Hly)的抗体,在EHECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。
- 张雪寒何孔旺卢维彩李丽茅爱华周萍
- 关键词：溶血素融合基因
- 单增李斯特菌P60单克隆抗体的制备及初步应用被引量：1
- 2015年
- 目的制备并筛选单增李斯特菌P60特异性单克隆抗体,初步建立其快速检测方法。方法以体外表达并纯化的李斯特菌P60蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗李斯特菌P60的McAb,鉴定其抗体亚型,并对单抗的腹水效价、稳定性及亲和力进行分析。用纯化的单克隆抗体包被酶标板,结合生物素化处理的P60多克隆抗体,夹心ELISA筛选单增李斯特菌特异性单抗,并以重组P60为标准品,建立标准曲线。结果获得了4株可稳定分泌P60单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA检测表明,筛选的6C2单克隆抗体株可特异性与单增李斯特菌(4b)P60反应。结论建立的夹心ELISA方法可对单增李斯特菌进行特异性鉴别和定量检测。
- 殷茵刘溯王芳朱学亮周邦信骆学农
- 关键词：单增李斯特菌P60单克隆抗体ELISA
- 出血性大肠杆菌O157:H7的Tir与stx1/2B融合基因的构建和表达被引量：6
- 2009年
- 为了更好防治由出血性大肠杆菌O157:H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗具有很大优势。方法:构建表达tir和stxb的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stxB亚基基因72个氨基酸串联,构建pET28a-stx2b-Tir295-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达。结果:薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。结论:由于该融合蛋白由Tir、stx1b和stx2b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(stx)的抗体,在EHECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。
- 张雪寒何孔旺卢维彩俞正玉茅爱华刘亚栋
- 关键词：EHECO157:H7志贺毒素融合基因
- 大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制
- 用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157:H7抗原和抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157:...
- 刘洁夏兴霞王永山张雪寒费荣梅何孔旺
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7胶体金
- 文献传递
