国家科技支撑计划(2007BAD40B03)
- 作品数：23 被引量：105H指数：6
- 相关作者：景志忠才学鹏骆学农付宝权房永祥更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学甘肃省医学科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- DNA疫苗安全性的研究进展被引量：9
- 2009年
- DNA疫苗自问世以来就显示出传统疫苗无法比拟的优越性,在传染病、肿瘤等众多疾病的预防和治疗方面具有广阔的应用前景。目前制约DNA疫苗发展的因素主要来自两方面:一方面DNA疫苗在临床实验中有时不能有效激发全面的免疫应答,致使免疫效果不佳;另一方面则是DNA疫苗的安全性问题悬而未决。本文中主要从基因整合、生殖毒性、免疫耐受、自身免疫疾病和对环境的扩散等方面对DNA疫苗安全性进行探讨。
- 侯俊玲郑亚东骆学农才学鹏
- 关键词：DNA疫苗安全性
- TSOL18抗原重组减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗对小鼠的免疫保护作用被引量：6
- 2008年
- 用构建好的活载体疫苗X4550(pYA3341-TSOL18)免疫小鼠,检测小鼠血清中IgG、IgM和肠液中IgA抗体的产生及各免疫组织重组疫苗株的分布情况,分析小鼠脾细胞亚型的分化,探讨了重组疫苗的免疫保护效果。结果显示,在免疫后第7 d,小鼠血清中有抗TSOL18 IgM产生,在二免后第28 d,IgG的D492 nm值达到0.645,在二免后第42 d,肠液中有抗TSOL18分泌性IgA抗体产生,表明重组疫苗能诱导小鼠产生较强的抗体水平和激发多种方式的免疫应答;小鼠免疫后第21 d在脾中仍能检测到大量的重组疫苗株,表明TSOL18重组蛋白的表达没有影响重组疫苗X4550(pYA3341-TSOL18)的定居能力;免疫小鼠的CD4+、CD8+T淋巴细胞数目明显增多,CD4+/CD8+T细胞比值也显著增高(P<0.01),提示重组疫苗可能通过提高CD4+/CD8+T细胞比值来发挥免疫作用。
- 丁军涛王颖陈晓宇骆学农郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：小鼠免疫保护
- 旋毛虫TsP53重组蛋白对小鼠的免疫保护性被引量：1
- 2010年
- 将旋毛虫TsP53重组蛋白以20μg/只的剂量免疫小鼠3次后攻击感染旋毛虫肌幼虫200条/只。检查小鼠肠道旋毛虫7日龄成虫数、雌虫体外产新生幼虫数和感染35d后的肌幼虫数,并计算减虫率,同时用间接ELISA检测血清中抗TsP53重组蛋白的抗体应答。结果显示,TsP53重组蛋白免疫小鼠旋毛虫7日龄成虫、雌虫产新生幼虫的减虫率分别为14.34%和16.93%,与感染对照组和佐剂对照组相比差异不显著(P>0.05);感染35d后肌幼虫减虫率为38.68%,与感染对照组和佐剂对照组相比差异显著(P<0.05)。TsP53重组蛋白免疫小鼠在首次免疫后第7天出现抗体应答,可检测到抗TsP53重组蛋白的抗体,第3次免疫后第7天达到峰值,攻击感染后略有下降,但直到试验结束时仍然维持在较高水平,TsP53重组蛋白可诱导小鼠产生部分抗旋毛虫的免疫保护性。
- 王鸿盛李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚王艳华张德林薛慧文付宝权
- 关键词：旋毛虫重组蛋白免疫保护性
- 猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析被引量：4
- 2010年
- 【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾蚴dUTPase的活性。【结论】成功克隆表达了猪囊尾蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在猪囊尾蚴中的生物学功能奠定了基础,同时也为抗猪囊尾蚴病的药物设计和开发提供了研究基础。
- 刘振勇吕志慧郑亚东窦永喜乔军骆学农张艳景志忠才学鹏
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达酶学活性
- 重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达被引量：4
- 2009年
- 【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。【结论】通过重叠延伸PCR法成功扩增了AgB基因全长并构建到真核表达载体,目的蛋白在BHK-21细胞中表达。
- 郭爱疆才学鹏贾万忠房永祥乔军刘红霞潘小梅景志忠
- 关键词：猪囊尾蚴重叠延伸PCR真核表达BHK-21
- 兔豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶基因的表达及免疫保护性分析被引量：1
- 2014年
- 为探讨豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶的免疫保护性能,在毕赤酵母中表达半胱氨酸蛋白酶基因,表达产物经分子筛纯化后免疫试验家兔,3免之后进行人工攻虫保护试验,且以豆状囊尾蚴烯醇酶为对照进行同步免疫和攻虫试验。结果显示,成功表达了半胱氨酸蛋白酶蛋白,且该蛋白能够识别兔豆状囊尾蚴病阳性血清;半胱氨酸蛋白酶蛋白和豆状囊尾蚴烯醇酶抑虫效果均较差。结果表明,酶蛋白在免疫保护方面的功能比较弱,不适于做疫苗的候选抗原。
- 王秋霞马景周张少华骆学农才学鹏
- 关键词：豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶重组蛋白免疫保护试验
- 豆状囊尾蚴人工感染家兔抗体水平的消长被引量：8
- 2009年
- 取人工感染豆状带绦虫犬自然排出的孕卵节片,虫卵计数后以不同数量感染家兔,定期采血,待囊尾蚴成熟后扑杀,计数。同时,用豆状囊尾蚴粗制抗原所建立的ELISA诊断方法,检测家兔的抗体变化情况。结果显示,家兔在感染后第3周血清抗体呈阳性,且抗体水平逐步上升,第8周达到最高水平,直至第10周扑杀时仍呈较高的阳性水平。抗体水平随感染数量的增加而升高,虫体负荷随感染强度的增加而逐步升高,感染虫体数量的多少对抗体出现的时间影响不大。研究结果为该病的流行病学调查及免疫预防奠定了基础。
- 王晓霞骆学农孙晓林于三科才学鹏
- 关键词：家兔豆状囊尾蚴抗体水平酶联免疫吸附试验
- 猪T细胞受体γ链基因的克隆及生物信息学分析
- 2010年
- 目的:克隆猪T细胞受体γ链(pTCR-γ)基因,用以研究猪T细胞受体分子结构与功能。方法与结果:以GenBank上登载的pTCR-γ基因为参考序列,用RT-PCR法从猪外周血淋巴细胞中克隆pTCR-γ基因。序列分析表明,pTCR-γ基因开放读框为1026bp,编码341个氨基酸残基,含有由23个氨基酸残基构成的信号肽序列;与参考序列相比,在核苷酸和推导氨基酸序列上的同源性分别为95.6%和88.8%;系统进化分析发现,该基因与绵羊、恒河猴、人、马、牛的同源性相对较高,与褐鼠、家犬、家鼠、家猫的同源性次之,而与禽类、鱼类的同源性最低;生物信息学结构预测表明猪T细胞受体γ链含2个结构域,其中1个为IG_LIKE1结构域(IGv结构域),由第14～114位共101个氨基酸残基组成;另一个为IG_LIKE2结构域(IGc结构域),由第143～238位共96个氨基酸残基组成。结论:克隆并应用生物信息学技术分析了猪T细胞受体γ链基因序列及编码蛋白的结构特征,为进一步研究γ链的结构与功能奠定了基础。
- 李玩生房永祥曾爽景志忠
- 关键词：基因克隆生物信息学
- 猪IFN-α_1基因的原核表达及其蛋白质结构的预测被引量：6
- 2008年
- 利用RT-PCR技术,从被诱导的猪外周血单核细胞中克隆出了猪α1干扰素(IFN-α1)基因。序列分析表明,克隆的猪IFN-α1基因序列与GenBank上登录的猪IFN-α1基因的同源性为97.8%。用克隆的猪IFN-α1基因构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-IFN-α1。探讨了猪IFN-α1基因表达的最佳条件,并在大肠杆菌中对此基因进行了表达。结果表明,IPTG的最佳诱导浓度为0.5 mmol/L,最适诱导温度为42℃,诱导9h表达量最大,表达产物约占菌体总蛋白的30%。SDS-PAGE分析表明,表达产物的分子质量为45 ku,且目的蛋白主要以包涵体的形式存在。经预测,猪IFN-α蛋白为一结构松散的球状蛋白。
- 陈国华景志忠房永祥蒙学莲窦永喜罗启慧
- 关键词：克隆原核表达
- 麻疹病毒核衣壳蛋白分子生物学及其应用的研究进展被引量：2
- 2009年
- 麻疹病毒属（Morbillivirus）的病毒是一类重要的人和动物致病性病原。其中包括牛瘟病毒（Rinderpest virus，RPV）、小反刍兽疫病毒（Pestedes Petits Ruminants virus，PPRV）、犬瘟热病毒（Canine Distemper virus，CDV）和麻疹病毒（Measles virus，MV）^[1]。这些病毒在中性pH条件下，可以通过膜融合而感染宿主细胞。病毒粒子多为圆形或椭圆形，
- 翟军军才学鹏
- 关键词：麻疹病毒分子生物学核衣壳蛋白VIRUS小反刍兽疫
