天津市高等学校科技发展基金计划项目(20070214)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 相关作者：朱理玮付蔚华朱杰昌赵娜邱宇杰更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 输注转染FasL基因的供者树突状细胞减轻小鼠心脏移植排斥反应
- 2008年
- 目的探讨转染FasL基因的供者树突状细胞（DC）对小鼠心脏移植排斥反应的影响。方法分离并培养C57BL／6小鼠骨髓Dc，然后采用脂质体法以自行构建的pTracer-FasL真核表达质粒转染DC。以C57BL／6小鼠为供者，Balb／c小鼠为受者，将其分为转染组（n=12）、未转染组（n=12）及移植对照组（n=12）。转染组小鼠心脏移植前7d经阴茎背静脉注射1×10^6个转染FasL基因的供者DC；未转染组小鼠心脏移植前7d经阴茎背静脉注射1×10^6个未转染的供者DC；移植对照组仅行心脏移植，不接受供者DC输注。供心均移植于受者腹腔内。各组中，6只小鼠用于观察移植心脏存活时间，另6只于术后7d处死，取移植心脏，进行组织学观察及移植心脏排斥反应病理分级。结果转染组、未转染组和移植对照组小鼠移植心脏存活时间的中位数分别为20d、8．5d和9d，转染组移植心脏的存活时间明显长于未转染组和移植对照组（P〈0．01）。转染组中，2只排斥反应的病理分级为0级，4只为1级；未转染组中，2只为2级，4只为3级；移植对照组中，1只为2级，5只为3级。转染组排斥反应的病理分级明显低于移植对照组（P〈0．01）。结论受者于心脏移植前输注转染FasL基因的供者DC，可有效延长移植心脏的存活时间，并减轻排斥反应的程度。
- 付蔚华赵娜邱宇杰朱理玮
- 关键词：CD95移植物排斥转染
- CD40RNA干扰小鼠树突状细胞抑制异系T淋巴细胞增殖的研究被引量：5
- 2010年
- 目的构建针对小鼠CIM0基因的RNA干扰（RNAinterference，RNAi）慢病毒载体，制备低表达CD40的树突状细胞（dendriticcells，DC），探讨其阻断CIM0／CIMOL共刺激通路诱导异系T淋巴细胞无反应的作用机制。方法采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC，构建针对小鼠CIM0RNAi慢病毒载体，体外感染小鼠骨髓源DC。荧光实时定量PCR及流式细胞术检测感染前后CD40mRNA及DC表面抗原CD40表达。混合淋巴细胞培养观察CD40RNAi慢病毒感染DC对异系T淋巴细胞增殖能力的影响。结果体外培养可获得成熟的小鼠骨髓源DC。成功构建小鼠CD40RNAi慢病毒载体，检测滴度为8×10^9TU／ml。慢病毒感染DC后与感染前相比，明显抑制CD40mRNA的表达（P〈0．05），CIM0蛋白表达也明显减少（P〈0．05）。混合淋巴细胞培养结果显示，CD40RNAi慢病毒感染DC组（1．381±0．442）与未感染组（2．444±0．485）及空慢病毒感染DC组（2．294±0．367）相比，淋巴细胞刺激指数（sI）明显下降（P〈0．01）。结论培养基选择法可收获大量骨髓源DC，所获骨髓源DC能激活初始型T细胞免疫应答。CD40RNAi慢病毒感染小鼠骨髓源DC，可以使DC低表达CD40蛋白。CD40RNAi慢病毒感染的DC体外刺激异系T淋巴细胞增殖的能力下降。为研究CIM0RNAi在同种器官移植诱导免疫耐受奠定基础。
- 付蔚华朱杰昌朱理玮
- 关键词：树突状细胞T淋巴细胞RNAI慢病毒载体
- FasL转染小鼠树突状细胞诱导异系T淋巴细胞凋亡的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:制备稳定表达FasL蛋白的小鼠骨髓源树突状细胞(DC)并探讨其体外诱导异系T淋巴细胞凋亡的机制。方法:采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC,脂质体法转染FasL基因至小鼠成熟DC,流式细胞仪检测转染前后FasL蛋白的表达。混合淋巴细胞培养,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DC对异系T淋巴细胞增殖的影响,流式细胞仪检测诱导异系T淋巴细胞凋亡的能力。结果:体外培养可获得成熟的小鼠骨髓源DC,转染FasL基因的DC较未转染DCFasL蛋白表达明显升高,混合淋巴细胞培养结果显示,FasL转染后DC对异系T淋巴细胞刺激指数明显下降(P<0.01),且诱导T淋巴细胞凋亡的能力明显增加(P<0.01)。结论:培养基选择法可收获大量骨髓源DC,具有典型形态,高表达MHCⅡ和共刺激分子,所获骨髓源DC能激活初始型T细胞免疫应答。脂质体转染FasL基因至小鼠骨髓源DC,可以使DC高表达FasL蛋白。转染FasL的DC体外刺激异系T淋巴细胞增殖的能力下降,且能明显诱导T淋巴细胞凋亡。
- 付蔚华杨志强赵娜邱宇杰朱理玮
- 关键词：转染树突细胞T淋巴细胞细胞凋亡小鼠
- RNA干扰技术阻断CD40/CD40L共刺激通路对小鼠移植心存活时间的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨慢病毒介导RNA干扰（RNAi）技术阻断CD40/CD40L共刺激通路对小鼠移植心存活时间的影响.方法 以针对小鼠CD40基因的RNAi慢病毒载体在体外感染供者骨髓来源的树突状细胞（DC）,制备低表达CD40的耐受性DC（Tol-DC）.荧光实时定量聚合酶链反应及流式细胞术检测DC感染前后CD40 mRNA及DC表面抗原CD40、CD11c和MHCⅡ的表达.建立小鼠异位腹腔心脏移植模型.在小鼠异位心脏移植前7 d,经静脉给受者输注体外制备的低表达CD40的Tol-EC（慢病毒感染DC注射组）,并设置单纯移植对照组和未感染DC注射组作为对照.观察各组移植心的存活时间,评定各组术后第7天移植心排斥反应的病理分级.结果 CD40-RNAi慢病毒载体在体外感染DC 48 h后,CD40 mRNA表达明显受到抑制,抑制率为80.9%;CD40表达明显下降,由（74.37±4.08）%降至（40.07±4.03）%（P＜0.05）.单纯移植对照组、未感染DC注射组和慢病毒感染DC注射组移植心存活时间分别为：（8±2）d、（9±1）d和（14±4）d,慢病毒感染DC注射组移植心存活时间明显延长,并且移植心排斥反应病理分级显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 阻断CD40/C40L共刺激通路可抑制异系T淋巴细胞的活化,从而抑制急性排斥反应,延长小鼠移植心的存活时间.
- 朱杰昌付蔚华朱理玮
- 关键词：RNA干扰共刺激通路CD40心脏移植
