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HIF-1α在缺血性心血管疾病中作用的研究进展被引量：4: 2010年; 缺氧诱导因子1(HIF-1)是一种由α亚基和β亚基组成的异源二聚体,其中HIF-1α是调节亚基。HIF-1特别是HIF-1α在缺血性心血管疾病中的作用越来越受到人们的重视,本文就HIF-1α相关的研究进展综述。; 叶鸣王志刚李兴升; 关键词：缺氧诱导因子-1Α 缺血性心血管疾病血管生成

大鼠骨髓内皮祖细胞的分离、培养及鉴定被引量：3: 2009年; 目的研究大鼠骨髓来源的内皮祖细胞（EPC）的分离、鉴定、培养方法以及向内皮细胞分化的诱导条件。方法密度梯度离心法分离SD大鼠股骨及胫骨单个核细胞，经差速贴壁后取2次贴壁细胞置于纤连蛋白铺被的培养板中。在血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及表皮生长因子（EGF）诱导下培养两周，观察其形态学改变，以免疫细胞化学染色及Dil-acLDL、FITC-UEA-1双荧光染色法对其进行鉴定。结果贴壁细胞呈现铺路石、团簇样生长，呈梭形、线样排列特殊形态。免疫细胞化学结果显示，贴壁细胞CD133、CD34、Flk-1、血管性假血友病因子（vWF）在不同时段呈阳性表达。诱导培养第2天，CD133阳性表达率为（79．4±4．5）％。自诱导培养的第6天开始，Flk-1与vWF呈高表达，阳性率为（74．2±3．5）％和（72．2±4．3）％。结论用Percoll密度梯度离心法在VEGF、bFGF及EGF培养体系下可以获得较高纯度的EPC，该细胞具有内皮细胞的特性，经过体外诱导可以分化为内皮细胞。; 李巧王志刚冉海涛钟世根李兴升凌智瑜; 关键词：骨髓细胞内皮细胞干细胞分化

超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植治疗大鼠心肌梗死被引量：4: 2011年; 目的探讨超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导内皮祖细胞(EPCs)移植治疗大鼠心肌梗死的可行性。方法将Ad-EGFP/HIF-1α转染EPCs。将30只SD大鼠建立心肌梗死模型后随机分为5组:空白对照组(C组)、超声+微泡组(US+MB组)、单纯EPCs组、超声+EPCs组(US+EPCs组)及超声+微泡+EPCs组(US+MB+EPCs组)。EPCs移植后4周,用超声心动图检测大鼠左心室收缩功能,免疫组织化学(I HC)染色法检测CD34的表达及微血管密度(MVD),Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果 US+MB+EPCs组射血分数、短轴缩短率高于其他各组(P<0.05),MVD计数高于其他各组(P<0.05)且VEGF蛋白表达水平最高(P<0.05)。结论超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植可通过促进VEGF的高效表达、刺激心肌梗死周边区血管生成等途径改善心肌梗死大鼠的心功能。; 李巧李兴升王志刚冉海涛钟世根凌智瑜李攀陈庆伟; 关键词：超声疗法重组腺病毒心肌梗死

超声击破微泡对重组腺病毒Ad-EGFP／HIF-1α活性的影响: 2010年; 目的探讨超声破坏载重组腺病毒Ad—EGFP／HIF-1α的微泡对AdEGFP／HIF-1α生物学活性的影响。方法采用机械振荡法及分层吸附法制备携带重组腺病毒的脂质超声微泡造影剂，用DFY-Ⅱ型超声图像定量分析诊断仪检测微泡粒径，计算其浓度。将脐静脉内皮细胞（HUVEC）接种在24孔板中，随机分为以下5组：①空白对照组；②重组腺病毒Ad—EGFP／HIF-1α组；③载重组腺病毒Ad—EGFP／HIF-1α微泡组；④超声＋重组腺病毒AdEGFP／HIF-1α组；⑤超声＋载重组腺病毒AdEGFP／HIF-1α微泡组。荧光显微镜及流式细胞仪检测各组在细胞内的表达及转染效率，RTPCR法检测HIF-1α的mRNA的表达。结果载重组腺病毒的超声微泡的大小、粒径及分布与普通超声微泡相似。与对照组相比，各组间绿色荧光强度及转染率无明显差别；各组间HIF-1αmRNA的表达也无明显差别。结论利用超声破坏载重组腺病毒AdEGFP／HIF-1α的微泡造影剂对腺病毒活性无明显影响，为拓展超声微泡介导的基因治疗领域提供了新的思路和方法。; 李巧王志刚冉海涛钟世根李兴升; 关键词：微气泡腺病毒

包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA超声造影剂的制备及特性被引量：1: 2010年; 目的制备包载经聚乙二醇(PEG)修饰的重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α高分子超声造影剂(PLGA),以改善腺病毒载体(Adv)在体内的安全性,提高Adv基因在细胞的转染效率。方法使用活化的甲氧基PEG对重组Adv衣壳蛋白质进行修饰得到PEG化Adv(PEG-Adv),用双乳化法制备载PEG-Adv高分子超声造影剂(PLGA),观测其粒径、包封率、释放规律及释放病毒的活性,并检测其在巨噬细胞中的免疫反应程度。结果 PLGA分布均匀,平均粒径为6.23μm;包封率为17.23%;PEG-Adv和单纯Adv从PLGA释放规律相似,但从PLGA释放出来的PEG-Adv的转染效率比从PLGA释放出来的单纯Adv高;包载PEG-Adv的PLGA产生的免疫反应强度也较低。结论用PLGA微球包载PEG化的重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α,可改善Adv在体内安全性差的缺点,释放出来的病毒稳定性好,转染效率较高,作为心血管疾病的基因治疗载体具有较好的研究前景。; 叶鸣王志刚李兴升李巧牛诚诚骆杰; 关键词：重组腺病毒聚乙二醇修饰超声微泡造影剂

超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs归巢大鼠缺血心肌被引量：6: 2010年; 目的观察超声破坏微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植归巢大鼠缺血心肌的可行性及有效性。方法采用Percoll密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓人脐血单个核细胞(MNCs),血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)诱导培养;Ad-EGFP/HIF-1α在HNK293细胞中进行扩增,之后感染体外培养的内皮祖细胞(EPCs)。将30只SD大鼠建立MI模型后随机分为5组:①空白对照组(C),②超声+微泡组(US+MB),③单纯EPCs组(EPCs),④超声+EPCs组(US+EPCs),⑤超声+微泡+EPCs组(US+MB+EPCs)。EPCs移植后48h处死大鼠,以激光共聚焦显微镜观察大鼠心肌组织内EPCs的分布,Westernblot检测HIF-1α的表达。结果 US+MB+EPCs组绿色荧光强度高于其他各组,Westernblot显示,US+MB+EPCs组HIF-1α蛋白表达高于其他组(P<0.05)。结论超声破坏微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植可有效促进EPCs归巢,为干细胞移植治疗IHD提供了一种新的途径。; 李巧冉海涛王志刚钟世根凌智瑜李攀李兴升陈庆伟; 关键词：重组腺病毒

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国家自然科学基金(30800271)