浙江省自然科学基金(Y2090395)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：严杰阮萍蒋锦琴郑伟汪皓秋更多>>
- 相关机构：浙江大学绍兴文理学院杭州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目杭州市科技发展计划项目更多>>
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- 甲型副伤寒沙门菌spaO—ompA融合基因构建及其表达产物免疫保护作用
- 2012年
- 目的构建甲型副伤寒沙门菌spaO—ompA融合基因及其原核表达系统，确定重组表达产物rSpaO—OmpA免疫保护作用。方法采用柔性肽序列连接spaO与ompA基因，构建spaO-ompA人工融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE和Bio—Rad凝胶图像分析系统检测目的重组表达产物rSpaO—OmpA表达情况及其产量。采用免疫扩散法、微量肥达和Westernblot法鉴定rSpaO—OmpA抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rSpaO—OmpA对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用，实验中采用重组表达的SpaO（rSpaO）及OmpA（rOmpA）作为对照。结果所构建的spaO-ompA融合基因与spaO或ompA单基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。所构建的原核表达系统EcoliBk21DE3pET42a-spaO-ompA能高效表达重组融合蛋白rSpaO-OmpA。rSpaO-OmpA能与甲型副伤寒沙门菌全菌抗血清结合并产生阳性杂交信号，免疫家兔后可产生特异性抗体。100汕g或2006xgrSpaO—OmpA对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率分别为66．7％（8／12）和83．3％（10／12），明显高于等量rSpaO及rOmpA（P〈0．05）。rSpaO—OmpA免疫小鼠血清与不同副伤寒沙门菌H抗原的凝集效价为1：5～1：40、与rSpaO和rOmpA及rSpaO—OmpA免疫双扩散效价为1：1～1：16。结论人工融合重组抗原rSpaO—OmpA免疫原性和免疫保护作用较等量rSpaO或rOmpA更强。
- 蒋锦琴孙一帆岳文燕严杰阮萍
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌免疫保护性
- 甲型副伤寒杆菌nmpC基因原核表达及表达产物免疫保护作用被引量：5
- 2010年
- 目的 构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因nmpC的原核表达系统,确定其重组表达产物rNmpC免疫原性和保护作用,了解甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.方法 采用PCR和T-A克隆法从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中获得nmpC基因克隆并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rNmpC表达情况及其产量,采用免疫扩散法、Western blot和微量肥达试验鉴定其抗原性和免疫应答性.采用PCR和ELISA分别检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.采用小鼠感染模型了解rNmpC对甲型副伤寒杆菌致死性感染的免疫保护作用.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的nmpC基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.rNmpC表达量约为细菌总蛋白的30%.rNmpC免疫家兔可产生抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号.所有甲型副伤寒杆菌菌株均携带nmpC基因并表达NmpC蛋白,但伤寒杆菌、乙型及丙型副伤寒杆菌未检出nmpC基因.100μg和200μgrNmpC对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%（5/12）和66.7%（8/12）.rNmpC免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清仅对甲型副伤寒杆菌H抗原产生1∶5～1∶40的凝集效价.结论 NmpC是甲型副伤寒杆菌独有的序列保守、分布广泛且自然表达的外膜蛋白抗原,该外膜蛋白具有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为多价甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原.
- 吴颖王艳芳严杰阮萍
- 关键词：甲型副伤寒杆菌免疫原性免疫保护性
- 甲型副伤寒杆菌ompA基因分布及重组表达产物的免疫学鉴定被引量：6
- 2010年
- 目的构建甲型副伤寒杆菌ompA基因原核表达系统，确定其重组表达产物rOmpA免疫原性和保护作用，检测甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率。方法采用PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增ompA基因，T-A克隆后测序并构建ompA基因原核表达系统。采用SDS-PAGE和Bio—Rad凝胶图像分析系统检测rOmpA表达情况及其产量，采用免疫扩散法、微量肥达试验和Western blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用PCR检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率。采用小鼠感染模型，了解rOmpA对甲型副伤寒杆菌50001株感染的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较，所克隆的ompA基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。rOmpA表达量约为细菌总蛋白的65％。rOmpA能与其兔抗血清和甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生免疫反应（Western blot），并可在家兔中诱导产生抗体。94．9％（93／98）甲型副伤寒杆菌临床菌株含有ompA基因。100μg和200μg rOmpA对感染小鼠的免疫保护率分别为41．7％（5／12）和58．3％（7／12）。rOmpA免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清对各副伤寒杆菌H抗原的凝集效价为1：5～1：40。结论ompA基因在甲型副伤寒杆菌临床菌株中分布广泛。rOmpA有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用，可考虑为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。
- 蒋锦琴阮萍丁威孙爱华毛亚飞严杰
- 关键词：甲型副伤寒杆菌免疫原性免疫保护性
- 杭州地区伤寒及甲型副伤寒沙门菌流行菌株分子特征的研究被引量：10
- 2012年
- 目的了解并确定2002-2008年杭州地区伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌优势菌株的分子特征。方法采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多位点串联重复序列分析（MLVA）或多位点序列分型（MLST）对2002-2008年杭州地区分离的31株伤寒沙门菌、404株甲型副伤寒沙门菌进行分型并分析。结果404株甲型副伤寒沙门菌可分为6个PFGE型，P1型和P2型属于同一个克隆系，99．0％（400／404）菌株属于该克隆系，其中P1型菌株占该克隆系菌株的93．3％（373／400）。31株伤寒沙门菌株存在高度多样性，可分为14个PFGE型、28个MLVA型（分辨率90．3％）、3个MLST型。根据MLVA各型靶位点多态性差异，本地区流行的伤寒沙门菌株与东南亚地区菌株相近，但与欧洲菌株差距较大，呈高度多态性的可变串联重复序列（VNTR）位点TR1、TR2、Sal02可作为本地区伤寒沙门菌株的检测标志。伤寒沙门菌株MLST型别包括了目前国际上发现的所有3个型别，但以ST2型为主（23／31，74．2％）。结论近年杭州地区甲型副伤寒疫情由同一亚系菌株感染所致，但本地区流行的伤寒沙门菌株呈现高度多样性。
- 汪皓秋潘劲草葛玉梅俞骅郑伟张蔚孟冬梅严杰
- 关键词：伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳多位点序列分型
- 甲型副伤寒杆菌重组蛋白OmpW的表达与鉴定
- 2011年
- 目的构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因ompW的原核表达系统,确定其重组表达产物rOmpW免疫原性,了解甲型副伤寒杆菌临床菌株ompW基因携带率。方法采用PCR和T-A克隆法从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中获得ompW基因克隆并构建其原核表达系统,重组蛋白纯化后用SDS-PAGE及Western-Blotting分析。采用PCR检测95株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompW基因携带率。结果与报道的相关序列比较,所克隆的ompW基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%。rOmpW免疫家兔可产生抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。所有甲型副伤寒杆菌菌株均携带ompW基因。结论构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因ompW的原核表达系统,证明了ompW是存在于甲型副伤寒杆菌的序列保守、分布广泛的外膜蛋白基因,为进一步研究该蛋白作为多价甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原奠定基础。
- 林飞飞冯康乐雷银蕉戎春浩盛思阮萍
- 关键词：甲型副伤寒杆菌
