国家高技术研究发展计划(2006AA02A238)
- 作品数：6 被引量：21H指数：2
- 相关作者：潘卫王锦红曹洁庞强廖文婷更多>>
- 相关机构：第二军医大学安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市科学技术委员会基础研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- microRNA在人类癌症治疗中的应用前景被引量：9
- 2010年
- microRNAs(miRNAs)是一类长度在18～25个核苷酸左右的内源性非编码小分子RNA,通过与靶mRNAs3'端非翻译区结合发挥其调节功能。miRNAs在人类肿瘤的发生和发展中扮演重要角色,发挥着癌基因或抑癌基因的作用,有望成为癌症治疗的作用靶点。本综述主要介绍了以miRNAs为基础的治疗方法在人类癌症治疗中的应用前景。
- 程娜王凯慧孙树汉
- 关键词：微小RNAS癌症
- HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达
- 2009年
- 目的构建HIV-1HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行高效表达和纯化。方法应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(△C)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定。结果构建了pET32a-Tat(CN)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17mg/ml,相对分子质量为31ku。间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应。结论成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论。
- 李存枚潘卫曹洁王锦红黄德圣庞强廖文婷邓松华
- 关键词：TAT
- HIV-1 HXB2株ta(tB41-101N)融合基因原核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建HIV-1HXB2株ta(tB41-101N)融合基因原核表达质粒,表达并纯化Ta(tB41-101N)融合蛋白,为进一步研究其免疫原性奠定基础。方法在HIV-1HXB2株天然Tat蛋白N-端添加Tat41-101位氨基酸(aa),采用PCR法从HIV-1HXB2株tat基因中扩增分别编码Tat41-101aa和Tat1-101aa的tat41-101和tat1-101两个基因片段,重叠延伸PCR法扩增其融合基因ta(tB41-101N),并构建其原核表达质粒pET32a-ta(tB41-101N),经双酶切及测序验证后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。融合蛋白经Ni2+-NTA柱亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE、Westernblot及ELISA鉴定。结果重叠延伸PCR扩增出约500bp的ta(tB41-101N)融合基因,酶切及测序结果表明重组表达质粒pET32a-ta(tB41-101N)构建正确。SDS-PAGE分析显示,表达的Ta(tB41-101N)融合蛋白相对分子质量约为36000,约占菌体总蛋白的7%,纯化后纯度约为60%;Westernblot和ELISA分析显示,Ta(tB41-101N)融合蛋白与小鼠抗Tat单抗及抗-HIV阳性血清(抗Tat抗体阳性)均呈特异性阳性反应。结论已成功构建了HIV-1HXB2株ta(tB41-101N)融合基因原核表达质粒,并表达了其融合蛋白,该蛋白较好地保留了天然Tat蛋白的免疫反应性,为Tat新型疫苗的研究奠定了基础。
- 廖文婷陈璐曹洁陈秋莉王锦红唐萍庞强黄德胜潘卫
- 关键词：HIV-1TAT蛋白原核表达重叠延伸PCR
- HIV-1 Tat蛋白的生物学特性及其致病效应被引量：10
- 2009年
- Tat蛋白是HIV-1编码的重要调控蛋白,在病毒复制和感染致病中起重要作用。在感染细胞内,Tat蛋白与多种细胞分子相互作用,启动病毒基因组的转录,促进转录延伸,从而激活和促进病毒复制;分泌和释放至细胞外的Tat蛋白,具有独特的穿膜功能,可到达宿主多个部位,作用于多种细胞,产生多样的Tat蛋白胞外活性,如参与免疫抑制、神经系统损伤及卡波济肉瘤形成等致病过程,被称为"病毒毒素"。本文对Tat蛋白的生物学特性及其致病效应作一综述。
- 滕竞飞潘卫
- 关键词：HIV-1TAT反式激活神经毒KAPOSI肉瘤
- 人类免疫缺陷病毒1型HXB2株Tat突变体的构建、原核表达及免疫原性分析
- 2009年
- 目的构建HIV一1HXB2株Tat基因半胱氨酸富集区3’末端移位突变体，经原核表达和纯化，分析该突变体蛋白（Tat—cct）的免疫原性。方法用PCR方法将HIV一1HXB2株Tat基因的半胱氨酸富集区（64～111位核苷酸）移位至Tat基因的3’末端，获得其突变体DNA序列，并构建其原核表达质粒pET32a—Tat—oct，转人大肠埃希菌E．coliBL21（DE3）中进行诱导表达及纯化。以Tat—cct融合表达蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA方法对该抗血清进行免疫原性检测分析。结果pET32aTat—cct重组质粒可在E．coliBI。21（DE3）中诱导表达，纯化后其融合蛋白相对分子质量约为31000。Tat—cct重组蛋白免疫小鼠诱导产生的抗体滴度为1：1600，该抗体与Tat—cot蛋白和Tat蛋白（1～101位氨基酸）均呈特异性结合反应。结论Tat突变体重组蛋白Tat—cct能在大肠埃希菌中有效表达，并较好保留其免疫原性，为HIV一1Tat疫苗的基础研究提供了有价值的实验结论。
- 李存枚邓松华曹洁王锦红陈璐黄德圣潘卫
- 关键词：HIV-1基因产物TAT重组蛋白质类免疫
- 用兔IgG筛选噬菌体展示免疫球蛋白结合分子组合文库被引量：1
- 2009年
- 目的应用噬菌体展示免疫球蛋白(Ig)结合分子组合文库,进化筛选获得与兔IgG结合的代表性序列,测定其与兔IgG及人IgG结合活性的差异,以判断筛选获得的代表性序列对不同种属Ig的结合是否存在倾向性的差别。方法应用包含Ig效应子结合蛋白Protein A的D结构域(PA-D)、A结构域(PA-A),Protein G的B2结构域(PG-B2)及protein L的B3结构域(PL-B3)的单结构域随机组合文库,以兔IgG对该组合文库进行进化筛选,序列比较分析筛选获得的代表性序列与人IgG进化筛选文库所得代表性序列的异同性;用ELISA和竞争抑制试验分别测定阳性噬菌体克隆与兔IgG及人IgG的结合活性。结果以兔IgG经4轮分子进化筛选,获得在天然细菌蛋白中不存在的新的结构形式PA-A—PA-A,该结果与人IgG进化筛选所得代表性序列PA-A—PG有显著差异;兔IgG筛选序列PA-A—PA-A和人IgG筛选序列PA-A—PG分别显示出与兔Ig和人Ig结合力更强的特性。结论该研究首次应用噬菌体展示技术研究不同种属抗体效应子构象的不同,证实兔IgG和人IgG两者效应子构象之间确实存在差异。这一结论有助于阐明抗体效应子构象在不同种属之间的差异性。
- 唐萍潘卫曹洁廖文婷陈秋莉黄德圣庞强王锦红邓松华
- 关键词：免疫球蛋白类免疫球蛋白G
