国防基础科研计划(K0102061501-03)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：杭赛宇周迎会吴士良蒲仁芳马震宇更多>>
- 相关机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国防基础科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 共刺激分子B7-H3与糖基化相关性的初步探讨被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨共刺激分子B7-H3与N-乙酰氨基半乳糖转移酶之间的相关性。方法:采用RT-PCR的方法检测同一细胞系上B7-H3和N-乙酰氨基半乳糖转移酶(T1-T7)的表达,从而探讨它们之间可能的相关性。结果:成功地检测到了B7-H3与N-乙酰氨基半乳糖转移酶(T1-T7)表达的差异性和一致性。结论:共刺激分子B7-H3和N-乙酰氨基半乳糖转移酶(T1-T7)在T1、T2存在可能的结合点,为进一步的研究提供了线索。
- 蒲仁芳马震宇杭赛宇周迎会吴士良
- 关键词：B7-H3
- 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的原核表达、纯化及酶活检测
- 2006年
- 目的:以人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)为研究对象,利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌(E.Coli)BL21中原核表达其编码序列,并对表达产物进行纯化、复性及酶活检测。方法:首先利用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3,形成重组表达质粒pGEX-5X-3/T2。重组质粒转化大肠杆菌DH5α,测序鉴定后转化BL21,异丙基硫代半乳糖(IPTG)诱导后,表达产物为主要以包涵体形式存在的融合蛋白。对其复性后用谷胱甘肽-琼脂糖(G lutath ione-Sepharose)4B亲和层析柱进行纯化。然后根据ppGalNAc-T2的催化功能,设计底物,建立酶促反应体系,利用高效液相色谱(HPLC)进行酶活分析。结果:成功构建了原核表达重组载体pGEX-5X-3/T2,通过蛋白质电泳检测到分子量约为90 kD的融合蛋白的表达,利用亲和层析得到纯化的酶蛋白,并经W estern印迹得以验证。反应后体系上柱洗脱后出现酶促反应的产物洗脱峰。结论:成功构建了重组表达载体pGEX-5X-3/T2,ppGalNAc-T2全长编码序列被成功表达、纯化及复性,检测到具有酶活性。
- 贾伟杭赛宇史宁周迎会吴士良
- 关键词：原核表达GST融合蛋白
