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国家自然科学基金(30470457): 作品数：16 被引量：77H指数：4; 相关作者：卢永昕米少华苏冠华曾秋棠高焱章更多>>; 相关机构：华中科技大学武汉市普爱医院北京大学深圳医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金山西高校科技研究开发项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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胰岛素样生长因子Ⅰ抑制氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的体外试验被引量：3: 2008年; 目的:胰岛素样生长因子Ⅰ作为重要的促细胞生长因子之一,其对内皮细胞凋亡影响的报道不多。实验拟验证和探讨胰岛素样生长因子Ⅰ对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法:实验于2006-12/2007-07在华中科技大学同济医学院协和医院心血管疾病研究所完成。①实验材料及分组处理:取人新鲜脐带(产妇或家属签署知情同意书)分离培养人脐静脉内皮细胞,分为:胰岛素样生长因子Ⅰ组(1×10-9mmol/L)、氧化型低密度脂蛋白(200mg/L)+胰岛素样生长因子Ⅰ组(1×10-9mmol/L)、氧化型低密度脂蛋白(200mg/L)组、正常对照组。分别在细胞培养24h后加入。②实验评估:采用四甲基偶氮唑盐法测定细胞活力;DAPI细胞核荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化及细胞凋亡率的测定;并进行内皮细胞caspase-3活性的检测。结果:①氧化型低密度脂蛋白可明显抑制人脐静脉内皮细胞增殖,胰岛素样生长因子Ⅰ与氧化型低密度脂蛋白共同加入后,细胞增殖率明显上升(P<0.05)。②氧化型低密度脂蛋白可诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡,而加入胰岛素样生长因子Ⅰ刺激后细胞凋亡率降低(P<0.05)。③caspase-3活性检测表明与对照组相比,氧化型低密度脂蛋白能明显上调caspase-3的表达,而胰岛素样生长因子Ⅰ+氧化型低密度脂蛋白组caspase-3活性则降低(P<0.05)。结论:胰岛素样生长因子Ⅰ对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡具有抑制作用,可能与其下调caspase-3蛋白表达有关。; 米少华卢永昕刘启云高焱章; 关键词：内皮细胞细胞凋亡

Effects of transplanted myoblasts transfected with human growth hormone gene on improvement of ventricular function of rats被引量：12: 2008年; 背景：为心肌的修理的房间移植被早细胞死亡限制。有人的生长激素(hGH ) 的基因治疗被显示了在实验动物支持血管生成和 attenuate apoptosis。这研究被进行在心肌的梗塞以后在心功能恢复和血管生成上探索基于 myoblast 的 hGH 基因治疗的效果，并且比较基于 myoblast 的 hGH 基因治疗和成肌细胞治疗之间的差别。方法：Myoblasts 从几只 SD 老鼠被孤立，有教养，净化，并且有原生质标志 pLghGHSN 和 pLgGFPSN 的 transfected。放射性免疫测定(RIA ) 被用来在这些 myoblasts 检测 hGH 的表示。SD 老鼠经历了左前面的下降冠的动脉的结扎以便建立一个心局部缺血模型。在离开了冠的动脉吸藏以后，经历了结扎的三十幸存老鼠 2 个星期随机被划分成 3 个相等的组：pLghGHSN 组织感染 hGH 基因移植的收到的成肌细胞；pLgGFPSN 组织感染 GFP 基因移植的收到的成肌细胞；控制组织：仅仅收到了有教养的媒介。在注射以后的四个星期幸存老鼠由回响心动描记法经历了心脏的功能的评估。老鼠被打死，室的样品是有 hematoxylin 曙红和第八因子的经历的免疫组织化学。Cryosection 被萤光显微镜检查分析检验绿荧光灯的蛋白质的表示。反向的 transcriptase 聚合酶链反应(RT-PCR ) 被用来检验脉管的内皮生长因素(VEGF ) 的 mRNA 表示， bax 和 Bcl-2。在心肌层的 hGH 表示被西方的污点检验。结果：成肌细胞能成功地被孤立，有教养并且 transfected。在 transfected 成肌细胞的 hGH 的表示与 RIA 被表明。在治疗以后的四个星期，心脏的功能在 pLghGHSN 显著地被改进组和 pLgGFPSN 组。部分弄短(FS ) 并且在 pLghGHSN 组的喷射部分(EF ) 在治疗以后与 pLgGFPSN 组和控制组相比显著地被提高(FS：36.9+/-5.3 对 29.5+/-3.5， 21.8+/-2.9；EF：56.9+/-4.3 对 47.1+/-3.6， 38.4+/-4.8， P<0.05 ) 。左室的结束心脏舒张的尺寸(LVEDD ) 和在 pLghGHSN 组�; RONG Shu-lingLU Yong-xinLIAO Yu-huaWANG Xiao-linWANG Yong-jinCHANG ChaoWANG Yu-qinLIU Qi-yunGAO Yan-zhangMI Shao-hua; 关键词：心脏功能成肌细胞生长激素

Change of p16^(INK4a) and PNCA Protein Expression in Myocardium after Injection of hIGF-1 Gene Modified Skeletal Myoblasts into Post-infarction Rats被引量：1: 2008年; This study examined the change of p16INK4a and PNCA protein expression in myocardium after injection of hIGF-1 gene modified skeletal myoblasts into post-infarction rats. HIGF-1 gene modified skeletal myoblasts (hIGF-1-myoblasts) were injected into hind limb muscles of 18 post-infraction rats (experimental group). Primary-myoblasts were injected into 18 post-infraction rats (control group) and 12 non-infarction rats (sham group). Expression of p16INK4a and PCNA pro- tein in myocardiums were separately detected immunocytochemically 1, 2 and 4 weeks after the inuection. The level of hIGF-1 and rIGF-1 protein in serum and myocardium were detected by en- zyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Compared with the sham group, the percentage of p16INK4a and PCNA positive cells reached a peak after 1 week in the control group and the experimental group (P<0.01). Moreover, the percentage of p16INK4a-positive cells in the experimental group was lower than in control group whereas the percentage of PCNA-positive cells was lower in the control group than in the experimental group (P<0.01). The percentage of p16INK4a-positive cells in the experimental group and the percentage of PCNA-positive cells in the control group were close to that in the sham group from the 2nd week (P>0.05). ELISA analysis disclosed that the myocardium level of rIGF-1 protein increased gradually in the controls and especially in the experimental group (P<0.01). The serum level of rIGF-1 decreased significantly in post-infraction rats, but these conditions were improved in the experimental group (P<0.01). The hIGF-1 protein in serum and myocar- dium were detected from the 1st week to the 4th week in the experimental group. Statistical analysis revealed significant associations of myocardium level of hIGF-1 protein with expression of p16INK4a and PCNA protein (r=–0.323, P<0.05; r=0.647, P<0.01). It is concluded that genetically hIGF-1-myoblast provides a means for constant synthesis and release of hIGF-1. It could not only improve the expression of rI; 高焱章卢永昕米少华刘晓明苏冠华荣书玲; 关键词：PNCA

Recombinant proteins secreted from tissue-engineered bioartificial muscle improve cardiac dysfunction and suppress cardiomyocyte apoptosis in rats with heart failure被引量：3: 2010年; 基于肌肉的基因治疗代表答应的背景设计织物的 bioartificial 为心疾病的治疗来临。试验性、临床的研究建议在心的 IGF-1 的蛋白质或 overexpression 施加的像胰岛素的生长 factor-1 (IGF-1 ) 的那个全身的政府心血管的功能上的有利效果。试图在心肌的梗塞(MI ) 和由在左冠的动脉或假冒的操作的 Sprague-Dawley rats.Methods 结扎跟随冠的动脉结扎的设计织物的 bioartificial 肌肉(欺骗) 交付人的 IGF-1 基因的潜在的治疗学的效果以后调查一个长期的阶段的这研究被执行。主要骨胳的 myoblasts 是 retrovirally 综合并且分泌 recombinant 的 transduced 人的像胰岛素的生长 factor-1 (rhIGF-1 ) ，和绿色荧光灯蛋白质(GFP ) ，并且进可植入的欺骗设计织物。经历了结扎的老鼠随机被分到 2 个组：MI-IGF 组(n=6 ) 和 MI-GFP 组(n=6 ) 。MI-IGF 组收到了秘密 rhIGF 欺骗(IGF 欺骗) 移植，和 MI-GFP 组收到了秘密 GFP 欺骗(GFP 欺骗) 移植。另一组老鼠担任了假冒的操作组，它随机也被分到 2 亚群：S-IGF 组(n=6 ) 和 S-GFP 组(n=6 ) 。S-IGF 组经历了 IGF-1-BAM 移植，并且 S-GFP 组经历了 GFP 欺骗移植。在二星期操作被执行以后， IGF-1-BAMs 和 GFP 欺骗皮下地被植入进 syngeneic 老鼠。在处理以后的四个星期， hemodynamics 被执行。IGF-1 被放射性免疫测定测量，然后老鼠被牺牲，室的样品受到 immunohistochemistry。反向的 transcriptase 聚合酶链反应(RT-PCR ) 被用来检验 bax 和 Bcl-2 的 mRNA 表示。TNF- 和 caspase 在心肌层的 3 表示被主要老鼠 myoblasts 是的西方的 blotting.Results 检验 retrovirally 分泌 rhlGF-1 的 transduced 并且进包含 postmitotic myofibers 的平行数组的可植入的欺骗设计织物。在 vitro，他们分泌了 hIGF 的一致层次(0.4-1.2 g 吗？？; RONG Shu-lingWANG Yong-jinWANG Xiao-linLU Yong-xinWU YinLIU Qi-yunMI Shao-huaXU Yu-lan; 关键词：组织工程化蛋白分泌人工肌肉胰岛素样生长因子-1

逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子Ⅰ在大鼠成肌细胞中的表达及分泌被引量：1: 2007年; 目的:将经逆转录病毒载体的介导的人胰岛素样生长因子Ⅰ基因导入大鼠成肌细胞,观察其是否表达,为组织工程人工肌肉体内基因治疗打下基础。方法:实验于2005-10/2006-12在华中科技大学同济医学院协和医院心血管病研究所完成。①实验材料:PLghIGF1SN由本实验室保存,逆转录病毒包装细胞系GP+E86购自Clontech公司,包装细胞PT67购自ATCC。②实验方法:选用新生SD乳鼠骨骼肌进行成肌细胞的原代培养,选用新生SD乳鼠心脏进行心肌细胞的培养。通过脂质体2000将人胰岛素样生长因子ⅠcDNA导入逆转录病毒包装细胞PT67,经过G418筛选获取稳定表达病毒的克隆,NIH3T3细胞测定病毒滴度,挑取滴度高的克隆扩增,收取高滴度的病毒上清液,转染成肌细胞。③实验评估:G418筛选转染过的成肌细胞,采用ELISA方法检测其上清液中人胰岛素样生长因子Ⅰ的表达,采用MTT法检测人胰岛素样生长因子Ⅰ的生物学活性。结果:①病毒滴度的测定:利用不同量的病毒上清感染1×105NIH3T3细胞,并经G418筛选,测得不同PT67克隆的培养上清中,病毒滴度最高为8×105cfu/mL。②ELISA方法检测人胰岛素样生长因子Ⅰ的表达:在转染后大鼠成肌细胞分泌的上清液中可以检测到人胰岛素样生长因子Ⅰ的表达,经过G418筛选2周后,收集培养液,人胰岛素样生长因子Ⅰ浓度最高在40μg/L,总量可以达到(150～200)ng/2×106/d。未转染成肌细胞组人胰岛素样生长因子Ⅰ浓度约在0.3μg/L。③MTT法检测人胰岛素样生长因子Ⅰ的生物学活性:转染的成肌细胞培养上清液刺激心肌细胞后,心肌细胞活力明显增加。结论:人胰岛素样生长因子Ⅰ基因可在鼠成肌细胞内稳定表达并具有生物学效应,可用于心血管系统基因治疗的研究。; 米少华卢永昕荣书玲; 关键词：逆转录病毒成肌细胞

人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰成肌细胞移植心肌梗死大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子Ⅰ及端粒酶反转录酶mRNA的表达被引量：1: 2008年; 目的：检测人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞移植后，心肌梗死大鼠血浆及心肌组织内胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白浓度的变化，以及心肌细胞内胰岛素样生长因子Ⅰ和端粒酶反转录酶mRNA水平的表达。方法：人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞、未转染的正常鼠骨骼肌成肌细胞均由实验室前期制备。健康雄性SD大鼠90只，取12只作为假手术组，剩余大鼠结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型，结扎后24h存活36只，随机分为对照组和实验组，18只，组。造模后24h，实验组在动物后肢局部分多点注射总量为0．1mL的人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞悬液，（2-4）×10^10L^-1细胞；对照组和假手术组给予等量未转染的正常鼠骨骼肌成肌细胞悬液。应用ELⅠSA法检测血浆和心肌组织胰岛素样生长因子Ⅰ的表达，RT-PCR检测心肌细胞中胰岛素样生长因子Ⅰ与端粒酶反转录酶mRNA水平。结果：①细胞移植后1，2，4周，假手术组血浆和心肌组织内鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的表达无明显变化（P〉0．05）；与假手术组比较，实验组和对照组血浆中鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的质量浓度均显著降低（P〈0．01），心肌组织中鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的含量均明显升高，于第2周达峰值（P〈0．01），且实验组较对照组升高更为显著（P〈0．01）。②细胞移植后1，2，4周，假手术组和对照组大鼠血浆和心肌组织内均未检测到人胰岛素样生长因子Ⅰ的表达；实验组于第1周即表达人胰岛素样生长因子Ⅰ，含量显著高于其余两组（P〈0．01）。③细胞移植后第1周，实验组和对照组心肌细胞鼠胰岛素样生长因子ⅠmRNA相对表达量明显高于假手术组（P〈0．01）：至第2周实验组达峰值，显著高于对照组（P〈0．01），然后逐步下降。实验组�; 高焱章卢永昕米少华荣书玲刘晓明梁振涛; 关键词：成肌细胞基因修饰端粒酶反转录酶心肌梗死

犬骨骼肌成肌细胞体外分离、纯化及培养方法改良探索被引量：3: 2009年; 目的:探讨犬骨骼肌成肌细胞(SkMs)体外分离、纯化及培养方法的改良并研究其生物学特性。方法:采用机械分离结合Ⅱ型胶原酶、中性蛋白酶双酶一步消化法分离犬骨骼肌成肌细胞,经差速贴壁法纯化后,在骨骼肌细胞生长培养基(SKGM)中进行原代和传代培养,免疫细胞化学染色鉴定。结果:改良后的培养方法适于获取犬骨骼肌成肌细胞,SKGM培养基适于犬骨骼肌成肌细胞的体外培养。SkMs在细胞密集或低血清分化培养基作用下可融合成肌管。结蛋白(desmin)单克隆抗体(mAb)细胞化学染色鉴定SkMs呈阳性,纯度在90%以上。结论:通过改良后的双酶一步消化法获得的SkMs在合适的培养条件下能够增殖、分化并保持其生物学特性,为其在基因治疗和组织工程中的应用奠定了基础。; 苏冠华刘启云卢永昕米少华孙雨霏刘晓明帅欣欣; 关键词：骨骼肌成肌细胞细胞培养生物学特性

心力衰竭的能量代谢重构及其治疗被引量：32: 2012年; 在心力衰竭发生发展的过程中,肥厚和衰竭的心肌往往发生了能量和底物代谢的改变,并直接或间接地促进了心肌重构的发展,即心肌的能量"代谢重构"。针对这一靶点,通过哌克昔林、曲美他嗪、左卡尼汀等药物抑制游离脂肪酸的摄取、β-氧化或直接促进葡萄糖代谢,均可能进一步优化心肌的能量底物代谢,更好地保存或改善心肌功能,延缓心力衰竭的进展。; 苏冠华孙雨霏卢永昕; 关键词：心力衰竭能量代谢曲美他嗪左卡尼汀

急性心肌梗死患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞水平与颈动脉内膜中层厚度的相关性被引量：9: 2010年; 目的通过观察急性心肌梗死患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)水平与颈动脉内膜中层厚度(I MT)及炎性介质的相关性,探讨其在此类疾病发病机制中的作用。方法采用流式细胞分析法和酶联免疫吸附法(ELISA),检测50例急性心肌梗死患者(AMI组)和50例健康体检者(对照组)外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-4(IL-4)、IL-6、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等指标。利用高频超声检测AMI患者和对照组颈动脉I MT。结果 AMI患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+CD25+T细胞的百分率显著低于对照组(P<0.01)。AMI患者的I MT、血浆TNF-α、IL-6、hs-CRP水平显著高于对照组(均P<0.05),其CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率与血浆IL-10水平呈显著正相关(r=0.682,P<0.05);CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率与颈动脉I MT(r=-0.562,P<0.05)、hs-CRP(r=-0.443,P<0.05)、IL-6(r=-0.307,P<0.05)和TNF-α(r=-0.281,P<0.05)水平呈显著负相关。结论调节性T细胞失调可能参与动脉粥样硬化的发生发展,免疫失衡、血管重构及炎性反应可能同时参与了急性冠脉综合征的发病过程。; 丁艳萍苏冠华钟禹成李海禹曾秋棠; 关键词：急性心肌梗死调节性T细胞细胞因子颈动脉内膜中层厚度

人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰成肌细胞移植对心肌梗死大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子Ⅰ及p16^INK4a和细胞核增殖抗原表达的干预: 2009年; 目的:检测人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞移植后,心肌梗死大鼠心肌组织胰岛素样生长因子Ⅰ含量的变化,以及心肌细胞细胞核分裂抑制因子p16INK4a和细胞核增殖抗原蛋白的表达。方法:人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞、未转染的正常鼠骨骼肌成肌细胞均由实验室前期制备。健康雄性SD大鼠90只,取12只作为假手术组,剩余大鼠结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,结扎后24h存活36只,随机分为对照组和实验组,18只/组。造模后24h,实验组在动物后肢局部分多点注射总量为0.1mL的人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞悬液,(2~4)×1010L-1细胞;对照组和假手术组给予等量未转染的正常鼠骨骼肌成肌细胞悬液。应用ELISA法检测血浆和心肌组织胰岛素样生长因子Ⅰ的表达,免疫组化染色检测心肌细胞细胞核分裂抑制因子p16INK4a、细胞核增殖抗原蛋白的表达。结果:①细胞移植后1,2,4周,假手术组血浆和心肌组织内鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的表达无明显变化(P>0.05);与假手术组比较,实验组和对照组血浆中鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的质量浓度均显著降低(P<0.01),心肌组织中鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的含量均明显升高,于第2周达峰值(P<0.01),且实验组较对照组升高更为显著(P<0.01)。②细胞移植后1,2,4周,假手术组和对照组大鼠血浆和心肌组织内均未检测到人胰岛素样生长因子Ⅰ的表达;实验组于第1周即表达人胰岛素样生长因子Ⅰ,含量显著高于其余两组(P<0.01)。③细胞移植后1周对照组p16INK4a阳性细胞达峰值,显著高于其余2组(P<0.01),然后迅速降低;第2,4周实验组p16INK4a阳性细胞率与假手术组基本相似(P>0.05)。④细胞移植后第1周,实验组细胞核增殖抗原阳性细胞达峰值,显著高于其余2组(P<0.01),随时间延长明显减少;第2周对照组与假手术�; 高焱章卢永昕刘晓明米少华苏冠华荣书玲; 关键词：成肌细胞 P16INK4A 细胞核增殖抗原

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国家自然科学基金(30470457)

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