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国家自然科学基金(39970270): 作品数：13 被引量：36H指数：4; 相关作者：沈茜张燕徐玉莲蔡刚聂小蒙更多>>; 相关机构：第二军医大学解放军第302医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

STUDY ON THE RELATIONSHIP OF ARSENIC TRIOXIDE-INDUCED BIOLOGICAL EFFECTS AND DEGRADATION OF PML PROTEINS被引量：2: 2001年; Objective: To understand whether arsenic trioxide (As2O3 )-induced biological effects are associated with degradation of PML proteins. Methods Acute promyelocytic leukemia (APL) cell line NB4, acute T-lymphocytic leukemia cell line Jurkat, acute myeloid leukemia cell line U937, and chronic myelocytic leukemia blast crisis cell line K562 were used as in vitro models In different cell lines, the As2O3-induced biological effects were determined by cell growth, cell viability, cell morphology, and flow cytometry assay on sub G1 cell content. The alteration of PML proteins was analyzed by immunofluorescence Results in terms of growth inhibition and apoptosis induction, 1. 0μmol/L As2O3 had different effects on different cell lines. However, degradation of PML proteins occurred in all the cell lines with As2O3 treatment. Conclusion As2O3-indued biological effects may be independent of PML protein-degradation.; 陈竺

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞分泌细胞因子的检测及其意义被引量：4: 2000年; 目的 :探讨白细胞介素 10和干扰素γ在病毒性肝炎的诊断、治疗和预后判断等方面的意义。方法 :采用植物血凝素(PHA)刺激 89例慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC)分泌 IL- 10和 IFN- γ,采用 EL ISA法检测其水平。结果 :随着患者病情的加重 ,IL- 10和 IFN- γ水平均降低 ,且与肝脏损伤程度有密切关系。结论 :IL- 10和 IFN- γ参与了肝炎的病理过程。当两者产生水平低于正常水平近一半时 ,预示肝脏受损较重 ,病情较重 ,预后较差。; 薛建亚秦一中韩絮琳万谟彬沈茜傅益平徐玉莲周凯; 关键词：干扰素Γ 外周血单个核细胞 IL-10 乙型肝炎

可调控性鼠TGF-β1重组腺病毒载体的构建和表达被引量：1: 2003年; 目的 :构建和表达可调控性鼠TGF - β1重组腺病毒载体。方法 :采用常规分子生物学方法 ,从刀豆A刺激的小鼠脾细胞抽提总RNA ,克隆鼠TGF - β1基因 ;经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,鉴定后在HEK2 93细胞包装。获得高滴度病毒后 ,取上清采用ELISA方法鉴定目的基因的表达。结果 :TGF - β1重组腺病毒经测序、限制性内切酶酶切分析、PCR等鉴定 ,与预期结果一致 ;病毒感染细胞的上清液经ELISA检测 ,TGF - β1的表达量为 (91 16± 3 70 )ng/L。结论 :构建的可调控性鼠TGF - β1重组腺病毒载体得到了正确表达 ,为进一步的研究和应用奠定了基础。; 张燕徐玉莲沈茜; 关键词：转化生长因子Β 腺病毒载体小鼠

可调控性鼠PLP-Ig嵌合体重组腺病毒载体的构建和表达被引量：1: 2004年; 目的 :构建和表达可调控鼠蛋白脂质蛋白 (PLP) 免疫球蛋白重组腺病毒载体。方法 :采用常规分子生物学方法 ,从WT 1杂交瘤细胞中抽提总RNA ,克隆小鼠Ig重链Fc基因。将编码PLP13 9-151的DNA与信号肽设计在引物上 ,经两次克隆可形成可分泌型PLP Ig。经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,鉴定后在HEK2 93细胞中包装。获得高滴度病毒后 ,用Westernblot鉴定目的基因的表达。结果 :PLP Ig重组腺病毒经测序、限制性内切酶酶切分析及PCR等鉴定 ,同预期结果相一致。Westernblot检测病毒感染的细胞 ,发现目的基因得到特异性表达且可被四环素调节。结论 :构建了可调控的小鼠PLP Ig重组腺病毒载体并得到正确表达 ,为进一步基因治疗实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE); 张燕刘梦蕾沈茜; 关键词：腺病毒载体小鼠

可调控性鼠转化生长因子β1和蛋白脂/免疫球蛋白嵌合体重组腺病毒载体的构建和表达: 2003年; 张燕沈茜; 关键词：转化生长因子Β1 腺病毒载体基因重组技术自身免疫病免疫耐受

实时逆转录聚合酶链反应检测细胞因子表达相对定量方法的建立被引量：5: 2003年; 目的　建立一种实时逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测细胞因子表达相对定量方法。方法　以肿瘤坏死因子α(TNFα)为待测基因 ,以葡萄糖 3 磷酸甘油醛脱氢酶 (GAPDH)为内参照进行检测。当靶基因和内参照基因片段克隆入载体后 ,进行纯化和定量及系列稀释 ,建立标准曲线 ,确定实时RT PCR的扩增效率 ;同时优化反应条件 ,使扩增效率接近 10 0 %。然后 ,检测 14份待检标本的TNFα和GAPDH的循环阈值 (Ct)。结果　该法检测的最低拷贝数为 10 3,线性范围为 10 3 ～ 10 9拷贝 ,批内变异系数 (CV)和批间CV分别为 1%和 8%。采用 2 -ΔΔCt法进行数据分析后 ,处理组TNFα的相对表达量比对照组高 8 6～ 9 8倍 ,平均为 9 2倍。结论　新建立的方法敏感 ,重复性好 ,数据处理简便、可靠。; 张燕沈茜; 关键词：实时逆转录聚合酶链反应细胞因子肿瘤坏死因子Α 基因表达

一种新型炎症诱导型腺病毒表达系统的功能研究: 2007年; 目的构建一种新型炎症诱导型重组腺病毒载体用于生理调控型基因治疗。方法构建携带IL-1β增强子（-3690／-2720）／IL-6启动子（-590／＋2）重组体（IL1／IL6）的荧光素酶报告质粒和重组腺病毒载体，体外转染HepG2和RAW264．7细胞，观察各种细胞外刺激对IL1／IL6启动子活性调控的变化，并以动物实验观察炎症因子能否在体内通过调控IL1／IL6的启动活性而控制目的基因的表达。结果经荧光素酶分析显示IL1／IL6的本底启动活性较低，可经多种细胞外刺激而诱导活化，且具有较广泛的活性诱导范围；在体内，它可随炎症反应程度的变化而自主地调控外源基因的表达。结论携带IL1／IL6重组体启动子的重组腺病毒载体可作为生理反应调控型基因治疗载体用于全身性炎症、自身免疫性疾病等的治疗与研究。; 蔡刚聂小蒙管政张军沈茜; 关键词：基因治疗腺病毒载体炎症反应

以内部核糖体进入位点序列连接两个独立表达基因构建重组腺病毒双表达载体(英文): 2004年; 目的 :以内部核糖体进入位点 (IRES)序列连接鼠 TGF-β1 和 PL P- Ig 2基因 ,构建重组腺病毒双表达载体。方法 :采用常规分子生物学方法 ,分别从 Con A刺激的小鼠脾细胞和 WT- 1杂交瘤细胞抽提总 RNA,克隆鼠 TGF- β1 基因和 Ig重链Fc基因 ;将编码 PL P1 39- 1 51 的 DNA与信号肽设计在引物上 ,经过 2次克隆 ,形成 PL P- Ig。与 TGF-β1 以 IRES序列相连接后 ,经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,鉴定后在 HEK2 93细胞包装。获得高滴度病毒后 ,采用 EL ISA方法鉴定 TGF- β1基因的表达 ;Western印迹鉴定 PL P- Ig的表达。结果 :该双表达重组腺病毒载体经测序、限制性内切酶酶切分析、PCR等鉴定 ,与预期结果一致 ;病毒感染细胞分别经 EL ISA和 Western印迹检测后证实 TGF-β1 和 PL P- Ig得到了独立表达。结论 :构建的可调控性鼠 TGF-β1 和 PL P- Ig重组腺病毒双表达载体的独立表达。; 张燕沈茜; 关键词：内部核糖体进入位点基因表达重组腺病毒转化生长因子Β

CⅡTA-pI在树突状细胞中特异启动活性的研究被引量：4: 2004年; 目的 :检测MHCⅡ类分子反式激活因子Ⅰ型启动子 (CIITA pI)是否具有启动活性及其在树突状细胞 (dendriticcell,DC)中的特异启动活性。方法 :利用荧光素酶报告系统 ,检测仅 112bp的Ⅰ型CIITA pI在DC中的特异启动活性及报告基因在DC不同成熟程度下的表达。结果 :该启动子在DC中能够特异启动报告基因的表达 ,而在非DC细胞中几乎无启动活性 ;其启动活性随DC的成熟程度而上升。结论 :为进一步应用CIITA; 张燕沈茜; 关键词：树突状细胞启动子

IL-6基因启动子在抗原递呈细胞转录调控中的作用被引量：2: 2006年; 目的检测人IL-6基因启动子能否在小鼠抗原递呈细胞内发挥启动活性及其是否具有可调控性。方法构建含不同cis元件IL-6启动子片段的荧光素酶报告基因的质粒,将其与对照质粒共转染小鼠树突状细胞和巨噬细胞株RAW264.7,在不同剂量LPS刺激条件下,检测荧光素酶的表达量。结果在3个cis元件中,NF-κB结合位点对于维持IL-6启动子的活性最为重要,LPS可诱导IL-6启动子在抗原递呈细胞内发挥活性,且在一定范围内随LPS的剂量而上升。结论IL-6启动子可作为一种可诱导型启动子在树突状细胞内发挥活性,因而有望用于基因治疗或基因功能研究。; 蔡刚聂小蒙沈茜; 关键词：抗原递呈细胞 IL-6 启动子脂多糖

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