国家自然科学基金(60677038)
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- 细菌视紫红质多重突变体结构变化及其中间态的寿命
- 2007年
- 采用基因定点突变的方法,构建了细菌视紫红质(Bacteriorhodopsin,BR)的3种突变体蛋白,即单突变体BRE194Q、三突变体BRI119T/T121S/A126T和四突变体BRI119T/T121S/A126T/E194Q.测定了突变体和野生型BR在水溶液和聚乙烯醇(PVA)膜中的紫外-可见吸收光谱和拉曼光谱,采用显微视频录像技术记录了PVA膜中野生型和3个突变体样品的M态寿命.与野生型BR相比较,在水溶液中,单突变体的可见吸收光谱的最大吸收峰发生了轻微红移,三突变体和四突变体的最大吸收峰则分别发生了11.0和12.0 nm的明显蓝移.在PVA膜中,3个突变体BR的可见吸收光谱的最大吸收峰均发生蓝移,四突变体BR的最大吸收峰为557 nm,蓝移达15.0 nm.四突变体BR在水溶液中的共振拉曼光谱不仅表现有与M态特征相关的1567和1573 cm-1谱带,还有L态特征带1334 cm-1及N态特征带1200,1328,1530和1549 cm-1.在PVA膜中的样品与在水溶液中的比较,四突变体共振拉曼光谱的1334和1549 cm-1带消失,同时1187 cm-1带的强度下降.显微视频录像技术记录的PVA膜中样品的M态寿命表明,野生型BR的M态寿命最短,单突变体的M态寿命小于1.0 s,三突变体的寿命为3.0 s,四突变体的寿命为2.0 s.
- 金卫华曹军卫王友亮熊贵光姚保利雷铭
- 关键词：细菌视紫红质突变体共振拉曼光谱聚乙烯醇
- D38R突变对细菌视紫红质光循环后半程M态和N态的影响
- 2006年
- 用重叠PCR的方法,定点突变细菌视紫红质(bacteriorhodopsin,BR),克隆到单突变体BRD96N和双突变体BRD38R/D96N的基因,同源转化盐沼盐杆菌(Halobacterium salinarium)L33(BR-),表达突变蛋白BRD96N和BRD38R/D96N.通过显微视频方法对突变BR的M态光致变色特性进行记录,BRD38R/D96N的M态寿命为5 s,约为BRD96N(M态寿命为3 s)的1.7倍.对突变体的激光共聚焦拉曼光谱测定发现,在BRD96N中,1 170 cm-1下移到1 171cm-1,1 258 cm-1上移到1 255 cm-1,而BRD38R/D96N中1 170 cm-1下移到1 173 cm-1;1 258 cm-1上移到1 252 cm-1,而且BRD38R/D96N与BRD96N相比,1 186 cm-1处的峰明显增强.近紫外区圆二色谱显示,两种突变体近紫外区的正负带虽然没有太大差别,但288 nm和290 nm处的极峰却差别显著.所有这些研究结果表明,细菌视紫红质Asp38(D38)突变为Arg(R)可以延长其光循环后半程M态和N态的寿命.
- 王友亮金卫华曹军卫姚保利雷铭
- 关键词：细菌视紫红质重叠PCR光循环
