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辣蓼不同种间植物次生代谢产物种类及差异被引量：5: 2012年; 辣蓼是一种广泛分布于我国的传统中草药,通常指水辣蓼(Polygonum hydropiper)和旱辣蓼(Polygonumflaccidum)的干燥全草,具有健脾化湿、除湿化滞、止痢止痛、解毒化瘀等功效。近几年两种辣蓼植物提取物在兽药、植物源农药方面进行了较为深入研究,结果表明,水辣蓼和旱辣蓼的作用机制、功效及应用方向存在明显差别。本文对上述两种植物的次生代谢产物种类及其差异进行了综述和对比分析,为辣蓼植物活性成分功能研究与深化利用提供依据。; 柳春梅吕鹤书师光禄马兰青王有年; 关键词：次生代谢产物

烟草4CL与虎杖STS融合基因的构建、表达及融合蛋白纯化被引量：2: 2014年; 白藜芦醇具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、保护心血管、抗氧化等众多药理作用.4-香豆酰辅酶A连接酶（4-Coumarate-CoA ligase,4CL）和芪合酶（Stilbene synthase,STS）是其生物合成的关键酶和限速酶.本研究利用悬挂PCR （Overlap PCR）技术将白藜芦醇生物合成的最后两个关键酶4CL和STS的基因融合,构建原核表达pET30a-Nt4CL∷PcPKS5重组质粒,原核表达Nt4CL∷PcPKS5融合酶蛋白.预测其共编码945个氨基酸,含15个氨基酸的过渡氨基酸链（Linker）,编码蛋白质分子量（Mr）为102.8 kDa,等电点（pI）为5.69.原核表达筛选结果表明：温度为25℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导起始OD600值在0.4～0.6之间,诱导4h时目标蛋白的表达量最高.细胞破碎后,经Ni2＋亲和柱纯化、PD-10柱脱盐后可纯化得到融合蛋白.本研究为通过分子生物学途径合成白藜芦醇奠定基础.; 杨亚东郭辉力刘文彬杨明峰马兰青王有年; 关键词：白藜芦醇融合基因双功能酶原核表达

烟草Nt4CL与虎杖PcSTS基因的融合表达与功能分析被引量：1: 2016年; 4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate-Co A ligase,4CL)和芪合酶(stilbene synthase,STS)是白藜芦醇苯丙氨酸代谢合成的最后两个关键酶。运用悬挂PCR(overlap PCR)的方法将烟草4CL基因(Nt4CL)和虎杖STS基因(Pc PKS5)用3个中性氨基酸链连接,得到融合基因Nt4CL-Pc PKS5,将其插入原核表达载体中,构建p ET30a-Nt4CL-Pc PKS5重组质粒,表达Nt4CL-Pc PKS5融合蛋白。经Ni2+纯化和PD-10柱脱盐后,得到可溶性纯化蛋白。体外酶促反应结果表明该融合酶具有4CL和STS的双重活性,其催化产物为白藜芦醇。酶促反应最适条件为:p H 6.5,反应温度为45℃。研究结果获得了有效催化白藜芦醇生物合成的双功能融合酶,为进一步利用融合酶基因转化工程菌株实现白藜芦醇工业化生产奠定了基础。; 刘文彬郭辉力刘欢黄丽娜张奋强马兰青; 关键词：白藜芦醇融合基因原核表达酶促反应

植物尿苷二磷酸糖基转移酶超家族晶体结构被引量：8: 2014年; 糖基转移酶(Glycosyltransferases,GTs)催化的糖基化反应几乎是植物中最为重要的反应。GTs家族1中的植物UGTs(UDP-dependent glycosyltransferases)成员主要运用尿苷二磷酸活化的糖作为糖基供体,因其成员众多、生物功能多样,仅仅通过序列比较和进化分析不能够精确预测其复杂的底物专一性和特有的催化机制,需要后续生化实验的进一步验证。文中主要总结了目前在蛋白结构数据库(Protein Data Bank,PDB)中报道的5种植物UGTs的晶体三维结构和定点突变功能研究进展。详细介绍了植物UGTs整体结构的特点以及蛋白与底物相互作用的细节,为更有效地生化定性UGTs以便深入理解底物专一性提供了有力的工具,从而为植物UGTs在酶工程和基因工程中的应用奠定基础。; 吕鹤书薛飞燕柳春梅杨明峰马兰青; 关键词：晶体结构底物专一性

两种不同植物来源白藜芦醇生物合成关键酶——芪合酶催化效率比较被引量：4: 2014年; 白藜芦醇是一种天然植保素,且具有特殊的药理和保健功能,芪合酶(Stilbene synthase,STS)是该化合物生物合成的关键酶和限速酶。白藜芦醇存在于有限几种植物且含量差异很大,虎杖中白藜芦醇含量比葡萄、花生高1 000倍以上,推测不同STS的催化能力有可能是白藜芦醇含量差异的原因之一。为验证上述推测,文中通过overlap PCR技术从葡萄叶片基因组DNA中克隆得到葡萄STS基因,连同前期工作中获得的虎杖STS基因(PcPKS5),进行了原核表达分析。诱导表达产物经过Ni2+亲和柱纯化和PD-10柱脱盐后,均得到分子量约43 kDa的可溶性纯化蛋白。酶促产物分析结果表明,两种酶催化产物均为白藜芦醇。酶动力学分析表明,虎杖STS催化效率(Kcat/Km)是葡萄STS的2.4倍。文中从植物类型Ⅲ聚酮化合物合酶(Polyketide synthase,PKS)超家族催化活性位点和保守位点角度分析了造成上述两种酶活性产生差异可能存在的原因。; 郭辉力罗在柒杨亚东杨明峰吕鹤书柳春梅杨静王有年马兰青; 关键词：虎杖原核表达

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