浙江省自然科学基金(Y2090327)
- 作品数：9 被引量：44H指数：5
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- PI3K信号通路对哮喘小鼠调节性T细胞与Th17失衡的调控作用被引量：5
- 2012年
- 目的:探讨PI3K信号通路对哮喘小鼠T细胞中辅助性T细胞17(Th17)与CD4+CD 25+调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法:尼龙毛柱法分选对照组和哮喘组BALB/c小鼠脾脏T细胞,进而在细胞水平分组:对照组(A组)分为2个亚组:空白对照组(A1),PI3K抑制剂LY294002对照组(A2);哮喘组(B组)继续分为4个亚组:哮喘组(B1),5μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B2),10μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B3),20μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B4),共培养72 h,采用流式细胞仪检测CD4+CD 25+Treg的数量,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清中白细胞介素(IL)-10和IL-17水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转录因子Foxp3和RORγt的mRNA水平。结果:(1)分选后获得的T细胞纯度为(74.12±3.08)%,细胞存活率为(92.82±3.21)%;(2)Treg的数量B1组较A1组显著降低(P<0.01);A2组显著高于A1组(P<0.05);B3和B4组较B1组显著增高(均P<0.01);(3)IL-17水平和RORγt mRNA表达B1组较A1组显著增高(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01,P<0.05);B2、B3、B4组均显著低于B1组(均P<0.01),呈剂量依赖性降低;而IL-10水平和Foxp3 mRNA表达B1组显著低于A1组(P<0.01);A2组显著高于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组均显著高于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性增高;(4)RORγt/Foxp3 mRNA的比值B1组显著高于A1组(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组显著低于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性降低;RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-17水平呈正相关(r=0.89,P<0.01);RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-10呈负相关(r=-0.86,P<0.01)。结论:哮喘小鼠存在Th17/Treg失衡,PI3K信号通过调控Treg/Th17失衡而参与哮喘发病过程。
- 聂颖张维溪崇蕾王婷李昌崇
- 关键词：哮喘PI3K信号通路辅助性T细胞17调节性T细胞白细胞介素17白细胞介素10
- PI3K和Notch信号通路对哮喘小鼠CD4＋T淋巴细胞活化及增殖的协同调控作用被引量：8
- 2013年
- 目的 探讨磷酯酰肌醇3激酶（PI3K）和Notch信号通路对哮喘小鼠CD4＋T淋巴细胞活化及增殖的协同调控作用.方法 以卵清白蛋白（OVA）致敏激发法制备16只小鼠哮喘模型,按随机数字表法分为对照组和哮喘组各8只,免疫磁珠法分离哮喘小鼠脾脏原代CD4＋T淋巴细胞.在细胞水平分组：未干预组（A组）,PI3K抑制剂组（LY294002）（B组）,Notch抑制剂组（γ-分泌酶抑制剂,DAPT）（C组）,PI3K抑制剂＋Notch抑制剂组（D组）,均以10 μg/ml的植物血凝素和1000 U/ml的白细胞介素（IL）-2刺激增殖6h后进行干预;用流式细胞术检测CD4＋T淋巴细胞内的细胞周期蛋白（Cyclin）A、Cyclin D1和P27kip1的蛋白表达,反转录-PCR测定各指标的mRNA表达.结果 分选后CD4＋T淋巴细胞纯度达90.0％±5.2％,CD4＋T淋巴细胞的存活率为94.8％±3.2％.哮喘组小鼠脾脏CD4＋T淋巴细胞Cyclin A、Cyclin D1蛋白（28.0％±3.5％、14.9％±3.4％）和mRNA（0.55±0.16、1.38±0.42）表达水平均显著高于对照组（13.4％±3.5％、7.7％±1.8％和0.32±0.10、0.92±0.37）（P=0.002、0.036和P=0.007、0.042）,而哮喘组P27 kip1蛋白和mRNA表达水平（23.3％±3.9％和0.16±0.03）均显著低于对照组（37.5％±5.8％和0.32 ±0.03,P=0.006和P=0.000）.A、B、C、D各干预组哮喘CD4＋T淋巴细胞Cyclin D1蛋白和mRNA表达水平分别为12.2％±3.7％、7.3％±3.0％、8.1％±2.3％、4.2％±1.7％和1.71 ±0.44、1.07 ±0.31、1.21 ±0.32、0.62±0.20,B、C、D组均显著低于A组（均P＜0.叭）,D组均较B、C组下降更为显著（均P＜0.05）.A、B、C、D各组P27 kip1蛋白表达水平分别为22.9％±3.0％、31.6％±5.3％、28.4％±5.6％、44.6％±2.8％,B组显著高于A组（P=0.叭6）,D组均显著高于A、B、C组（P =0.003、0.004、0.000）;mRNA表达水平分别为0.16 ±0.07、0.36±0.09、0.63±0.08、0.99±0.21,B、C、D组均显著高于A组（P=0.016、0.000、0.000）,D组均显著高于B、C组（P
- 聂颖杨邦坤盛安群张维溪李昌崇
- 关键词：哮喘小鼠CD4阳性T淋巴细胞NOTCH
- Notch2、Notch4受体在哮喘小鼠肺中的表达及布地奈德、姜黄素对其影响被引量：10
- 2012年
- 目的探讨Notch2、Notch4受体在哮喘小鼠肺组织中的表达水平以及布地奈德和姜黄素对其的影响。方法将32只Balb/c小鼠按随机数字表法随机分为正常对照组(A组),哮喘组(B组),布地奈德组(C组)和姜黄素组(D组),每组8只。以卵白蛋白致敏激发建立哮喘小鼠气道炎症模型,每组小鼠分别于末次激发后处死,取肺组织行HE染色观察炎症浸润程度,免疫组织化学染色和RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中Notch2和Notch4受体蛋白和mRNA的表达水平。结果 (1)C、D组Notch2蛋白及mRNA表达[分别为(0.075±0.002)、(0.073±0.002)和(0.088±0.012)、(0.085±0.008)]均明显低于B组[分别为(0.104±0.005)、(0.275±0.015)],但仍高于A组[分别为(0.049±0.004)、(0.041±0.007)],P均<0.05。(2)4组Notch4蛋白及mRNA表达分别为(0.121±0.004)、(0.118±0.003)、(0.117±0.004)和(0.117±0.005)以及(0.595±0.019)、(0.601±0.125)、(0.606±0.145)、(0.604±0.019),差异无统计学意义,均P>0.05。结论 Notch2受体参与哮喘小鼠气道炎症过程,布地奈德和姜黄素可能部分通过Notch2受体对哮喘小鼠气道炎症有一定抑制作用;Notch4受体对哮喘小鼠气道炎症无明显影响。
- 崇蕾张维溪聂颖王婷李昌崇
- 关键词：哮喘气道炎症布地奈德姜黄素
- PI3K信号通路对T细胞发育、活化、增殖、分化及支气管哮喘的作用被引量：6
- 2011年
- T细胞是参与支气管哮喘发病的重要效应细胞,而磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)是T细胞的重要信号转导分子。PI3K信号通过影响双阴性细胞的β-选择而影响T细胞的成熟,还通过激活PKB、Rac等信号途径而参与T细胞的活化、分化。同时,PI3K通过参与Th1/Th2失衡的调节,嗜酸粒细胞、肥大细胞的黏附、脱颗粒等而参与支气管哮喘气道炎症反应。
- 聂颖李昌崇
- 关键词：T细胞分化哮喘
- 阻断Dll4-Notch信号通路对哮喘小鼠Th17细胞分化的影响被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨哮喘小鼠体内Delta样配体4(Delta-like ligand 4,Dll4)-Notch信号通路阻断对辅助性T细胞17(Th17细胞)分化的影响。方法:30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组、哮喘模型组、Dll4单克隆抗体干预组和Ig G对照组。肺组织切片进行免疫组织化学染色,定性分析Dll4的表达。流式细胞术分析各组小鼠脾脏Th17细胞在CD4^+T淋巴细胞中的比例。采用Western blot法检测小鼠脾脏分离淋巴细胞中维甲酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)的蛋白表达。应用酶联免疫吸附实验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)的含量。结果:与哮喘模型组比较,Dll4单克隆抗体干预组Dll4表达存在明显差异。与哮喘模型组比较,Dll4单克隆抗体干预组脾脏分离CD4^+T淋巴细胞中Th17细胞的比例和RORγt表达水平均存在统计学显著性(P<0.05)。Dll4单克隆抗体干预组小鼠血清IL-17的表达与哮喘模型组之间的差异也存在统计学显著性(P<0.01)。结论:阻断Dll4-Notch信号通路对哮喘小鼠Th17细胞分化起到抑制作用。
- 张维溪翁翠叶贾宵宵朱婷婷曾泽宇孔璐丹潘灵芝
- 关键词：哮喘辅助性T细胞17白细胞介素17
- Notch信号通路及其在支气管哮喘中的作用
- 2011年
- Notch信号通路参与多种组织细胞的分化成熟过程，尤其在外周T细胞的分化过程中起了决定性的作用，参与多种过敏性疾病（如支气管哮喘）的发生发展。近来研究表明Notch信号通路还参与诱发支气管哮喘的气道高反应性和促进气道黏液细胞增生。本文就Notch信号转导通路与支气管哮喘的关系作一综述。
- 崇蕾李昌崇张维溪
- 关键词：NOTCH信号通路支气管哮喘气道高反应性
- PI3K信号通路对T细胞发育、活化、增殖、分化及支气管哮喘的作用被引量：2
- 2011年
- T细胞是参与支气管哮喘发病的重要效应细胞，而磷脂酰肌醇－3－激酶（P13K）是T细胞的重要信号转导分子。P13K信号通过影响双阴性细胞的B－选择而影响T细胞的成熟，还通过激活PKB、Rac等信号途径而参与T细胞的活化、分化。同时，P13K通过参与Th1／Th2失衡的调节，嗜酸粒细胞、肥大细胞的黏附、脱颗粒等而参与支气管哮喘气道炎症反应。
- 聂颖李昌崇
- 关键词：T细胞分化哮喘
- 布地奈德对哮喘气道重塑大鼠尾加压素-Ⅱ及mRNA表达的影响被引量：8
- 2012年
- 目的探讨布地奈德对哮喘气道重塑大鼠尾加压素-Ⅱ(U-Ⅱ)及其mRNA表达的影响。方法 24只清洁级雄性SD大鼠分为3组:对照组、哮喘组和布地奈德组。以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备哮喘大鼠气道重塑模型,应用图像分析技术测定支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中U-Ⅱ的浓度,免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测U-Ⅱ蛋白和U-ⅡmRNA在肺组织中的表达。结果①哮喘组Wat和Wam均显著高于对照组,布地奈德组Wat和Wam均显著低于哮喘组(均P<0.01);②哮喘组血清和BALF中U-Ⅱ的浓度均显著高于对照组,布地奈德组上述指标均显著低于哮喘组(均P<0.01);③免疫组化及RT-PCR结果显示,肺组织中U-Ⅱ蛋白及其mRNA的表达,哮喘组显著高于对照组,布地奈德组较哮喘组显著减弱(均P<0.01);④相关性分析显示,大鼠肺组织Wat与U-Ⅱ蛋白、U-ⅡmRNA表达呈正相关(均P<0.01),Wam与U-Ⅱ蛋白、U-ⅡmRNA表达呈正相关(均P<0.01)。结论布地奈德对哮喘气道重塑的拮抗作用,可能通过抑制U-Ⅱ的表达起作用。
- 张维溪梁亚峰聂颖崇蕾王小明李昌崇
- 关键词：尾加压素哮喘气道重塑布地奈德
- Notch信号通路及其在支气管哮喘中的作用被引量：4
- 2011年
- Notch信号通路参与多种组织细胞的分化成熟过程,尤其在外周T细胞的分化过程中起了决定性的作用,参与多种过敏性疾病(如支气管哮喘)的发生发展。近来研究表明Notch信号通路还参与诱发支气管哮喘的气道高反应性和促进气道黏液细胞增生。本文就Notch信号转导通路与支气管哮喘的关系作一综述。
- 崇蕾李昌崇张维溪
- 关键词：NOTCH信号通路支气管哮喘气道高反应性
