浙江省自然科学基金(302077)
- 作品数：5 被引量：51H指数：3
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- 鸭源禽副黏病毒1型YH_(99) V株的毒力测定和致病特性分析
- 2007年
- 从浙江省某麻鸭养殖基地的产蛋下降病鸭生殖器官内分离到1株致产蛋锐减、不致鸭死亡的病毒,经鉴定该病毒属于禽副黏病毒1型,命名为YH99V株。该毒株经动物回归试验能成功诱导鸭发病并回收同样的病毒,通过SPF鸡胚盲传至第9代时致病性突然增强,第11代出现血凝特性,第15代血凝价趋于稳定,鸡胚半数致死量EF15ELD50为10-4.8。MDT、ICPI和IVPI毒力学指标测定以及毒力相关基因序列结构分析表明,分离株的MDT为112h,ICPI为0.225,IVPI为0.41;YH99 V株F0蛋白裂解位点(112～117位)区域氨基酸推导序列为Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu,与弱毒株相一致。证明该毒株为新城疫弱毒株。
- 何永强梁华丽华炯钢云涛倪征李双茂
- 关键词：毒力致病特性
- 鸭Ⅰ型禽副粘病毒YH_(99)V株F基因的克隆和序列分析被引量：3
- 2007年
- 从患病鸭群中分离到一株引起鸭产蛋锐减而不死亡的病毒,经鉴定该病毒属于Ⅰ型禽副粘病毒,命名为YH99V株。以YH99V株的基因组RNA为模板,用RT-PCR一步法扩增出其F基因的cDNA序列,然后将其克隆至pMD18-T载体中,对其进行序列测定。结果表明,所克隆的基因片段长度为1 750 bp,含有1个1 662bp的开放式阅读框架(ORF),编码553个氨基酸。将YH99V株F基因序列和推导的氨基酸序列与国内外新城疫毒株的F基因相应序列比较后发现,它们的核苷酸序列同源性分别在82.7%-99.6%,氨基酸序列同源性为87.2%-99.3%。YH99V株在F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与弱毒株在这一区域的序列完全相同,表明为弱毒株。根据F基因的全核苷酸序列,进一步绘制了Ⅰ型禽副粘病毒株F基因的系统发育树。分析结果显示YH99V株与Lasota等参考毒株同属于基因Ⅱ型,表明它们具有较近的亲缘关系。
- 云涛何永强刘光清梁华丽倪征华炯钢李双茂
- 关键词：F基因系统发育树
- 鸭新城疫病毒和流感病毒多重RT-PCR鉴别诊断技术的建立和应用被引量：7
- 2007年
- 对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT-PCR方法和多重RT-PCR方法,AIV的扩增片段大小为483bp,NDV的扩增片段为310bp,电泳快速,易于区分。敏感性试验表明,该方法比HA敏感100倍以上;对AIV、YH99V、IBV、IBDV及正常鸡胚尿囊液的混合液检测显示,多重RT-PCR法具有很强的特异性。对鸭病毒性产蛋下降征侯群送检病料的检测证明,该方法能有效鉴别AIV和/或NDV单独感染或混合感染,阳性检出率明显高于HA方法。
- 何永强云涛梁华丽林林华炯钢
- 关键词：鸭流感病毒
- 致麻鸭产蛋下降的副粘病毒的分离和鉴定被引量：42
- 2005年
- 从浙江省某麻鸭养殖基地产蛋锐减的病鸭生殖器官分离到1株致产蛋下降、不致鸭死亡的病毒株(YH99V)。该病毒易感蛋鸭,经SPF鸡胚传至第9代时致病性突然增强,第11代出现对鸡红细胞的血凝特性,通常在42～80h致死SPF鸡胚,EF15EID50为10-4.8。经磷钨酸负染电镜观察,YH99V粒子呈现圆形、杆状形、葫芦状形等多形态,直径70～400nm不等,病毒外表有囊膜,囊膜外层有排列整齐的纤突。病毒粒子和包涵体位于细胞浆内。病毒抵抗力由弱到强依次为0.2%甲醛、24h→56℃、45min→紫外线、1h→乙醚≈氯仿≈37℃、16h→pH9→pH5→1%Try。对人眼结膜易感,鸭眼结膜不易感。接种传代细胞BHK-21、IBRS-2均能引起细胞病变。YH99V株与同样引起鸭产蛋下降的AIV、鸭源EDSV无抗原相关性,而能被禽副粘病毒型阳性血清中和。根据试验结果,初步将YH99V判定为鸭副粘病毒。
- 何永强洪健吴旧生杜青云倪征
- 关键词：产蛋下降麻鸭SPF鸡胚血凝特性EDSV
- 鸭Ⅰ型禽副粘病毒YH_(99)V株HN基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2006年
- 在浙江地区进行鸭病病因的调查过程中,从患病鸭群中分离到一株引起鸭产蛋锐减而不死亡的病毒,经鉴定该病毒属于禽副粘病毒Ⅰ型,命名为YH_(99)V株。以YH_(99)V株的基因组RNA为模板,通过RT-PCR一步法扩增出其HN基因的cDNA片段,然后将其克隆至pMD18-T载体中,对其进行序列测定。测序后拼接出HN基因的序列长度为1785bp,该基因的ORF总长为1734bp,编码577个氨基酸。将YH_(99)V株HN基因序列和推导的氨基酸序列与新城疫毒株的HN基因相应序列比较后发现,它们的核苷酸序列同源性分别在82．1%～99．7%,氨基酸序列同源性为87．2%～99．5%。在同源性比较的基础上,进一步绘制了Ⅰ型禽副粘病毒株HN基因的系统发育树。这对于Ⅰ型禽副粘病毒毒力基因的功能分析和该病的分子流行病调查有着重要的意义。
- 云涛何永强刘光清梁华丽倪征华炯钢李双茂
- 关键词：HN基因序列测定与分析
