沈阳市科学技术计划项目(200241)
- 作品数：7 被引量：32H指数：4
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- 小分子干扰RNA诱导卵巢上皮性癌细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2006年
- 鲁艳明张淑兰赵彦艳
- 关键词：卵巢癌细胞凋亡小分子HER-2基因SKOV3细胞
- siRNA特异性抑制卵巢癌细胞生长因子受体-2基因表达及其意义的研究被引量：4
- 2006年
- 目的探讨RNA干扰(RNAi)抑制卵巢癌细胞表皮生长因子受体-2(HER-2)基因的表达及其细胞效应。方法实验分为以下3组空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV-3细胞)、转染非特异性的siRNA组及转染特异性的siRNA组。干涉后5d加顺铂。采用半定量PCR技术(RT-PCR)和Western印迹法检测HER-2mRNA和蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞对顺铂的化学敏感性的变化,分析观察细胞生物学特性的改变。结果HER-2siRNA对HER-2mRNA表达明显抑制,作用能持续10d左右;干涉第7天后开始出现蛋白质表达的明显减弱,转染特异性siRNA组的蛋白质阳性表达率为(25·5±0·8)%,非特异性siRNA组为(95·7±0·8)%,空白对照组为(96·6±1·2)%,前组与后两组比较差异有统计学意义(均P<0·001)。干涉后随着HER-2mRNA表达下降,细胞凋亡增加,第6天凋亡率最高,达(53·2±1·0)%,转染非特异性siRNA组为(4·1±0·3)%,空白对照组为(4·1±0·3)%,差异有统计学意义(P<0·001);干涉后,转染特异性siRNA组的细胞存活率为(58·4±0·8)%,转染非特异性siRNA组为(68·0±0·6)%,空白对照组为(67·0±0·3)%,前组与后两组比较差异有统计学意义(均P<0·001)。结论体外合成的siRNA能有效抑制SKOV-3细胞中HER-2表达,促进细胞的凋亡,提高细胞对顺铂的敏感性,RNAi为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。
- 鲁艳明张淑兰孟丽荣赵彦艳
- 关键词：受体卵巢肿瘤顺铂
- 表皮生长因子受体2靶向小分子干扰RNA对卵巢癌细胞化疗敏感性的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨表皮生长因子受体2（HER-2）靶向小分子干扰RNA（siRNA）对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响。方法采用蛋白质印迹法筛选出特异性的HER-2siRNA，将其转染人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞。将实验分为对照组（不转染HER-2siRNA），非特异性siRNA组（转染非特异性siRNA），HER-2siRNA组（转染特异性siRNA），3组分别加入0、0．05、0．2、0．4、0．8、1．0、2．0、10、20μg／ml不同浓度的顺铂，采用噻唑蓝法检测3组SKOV3细胞增殖情况；在给予1μg／ml顺铂后，采用膜联蛋白V法检测顺铂组、HER-2siRNA组与HER-2siRNA联合顺铂组在不同时间（2～4d）凋亡率变化的情况；应用蛋白印迹法检测顺铂组及HER-2siRNA＋顺铂组抗凋亡蛋白Bcl-2、存活素、X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和促凋亡蛋白第二线粒体衍生蛋白酶活化子（Smac）的表达。结果暴露于顺铂24h后，3组细胞增殖率均随顺铂浓度的增加而降低，但降低的幅度不同，其中，转染HER-2siRNA组细胞降低最为显著；在给予1μg／ml顺铂后，转染HER-2siRNA组细胞增殖率[（58．1±4．7）％]与转染非特异性siRNA组[（65．3±2．7）％]、空白对照组[（68．5±2．8）％]相比，差异均有统计学意义（P〈0．01），而非特异性组与空白对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；HER-2siRNA联合顺铂组细胞凋亡率明显增加，与单独使用顺铂及单独使用HER-2siRNA组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。HER-2siRNA联合顺铂组抗凋亡蛋白Bcl-2、存活素、XIAP明显低于顺铂组；促凋亡蛋白Smac明显高于顺铂组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HER-2siRNA能增加卵巢癌SKOV-3细胞对顺铂的敏感性，显著诱导凋亡。HER-2siRNA联合顺铂对卵巢癌治疗具有协同作用。HER-2siRNA和顺铂协同诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2、存活素、XIAP蛋白质的下调、Smac蛋白质的上调有关。
- 鲁艳明张淑兰孟丽荣赵彦艳
- 关键词：RNA卵巢肿瘤受体ERBB-2
- HER-2 siRNA对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响被引量：7
- 2005年
- 目的:观察表皮生长因子受体2(HER-2)siRNA转染SKOV-3细胞抑制HER-2表达后对卵巢癌细胞耐药性的影响.方法:体外转录合成HER-2序列特异性双链RNA(dsRNA),转染SKOV-3细胞株中,RT-PCR方法检测转染前后HER-2基因的mRNA的表达,MTT法检测顺铂对转染前后卵巢癌细胞的生长抑制率.结果:HER-2siRNA转染72 h后,对SKOV-3细胞HER-2 mRNA表达明显抑制.在不同浓度顺铂(0.05～50μg/ml)的作用下,转染HER-2 siRNA与转染非特异性siRNA、空白对照组相比,差异有十分显著性意义(P＜0.01).细胞对顺铂的敏感性约提高10倍.结论:体外转录合成的siRNA能有效抑制SKOV-3细胞中HER-2的表达,提高细胞对顺铂的敏感性,RNA干扰技术为卵巢癌的治疗提供了一种新策略.
- 鲁艳明张淑兰
- 关键词：双链RNA卵巢癌表皮生长因子受体2
- HER-2小分子干扰RNA对卵巢上皮性癌细胞侵袭和趋化能力的影响被引量：8
- 2007年
- 目的探讨 HER-2小分子干扰 RNA(siRNA)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭和趋化能力的影响。方法选用已知的干扰磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的特异性位点作为阳性对照,采用蛋白印迹法检测卵巢癌细胞株 SKOV3细胞 GAPDH 蛋白和 HER-2蛋白的表达水平,以吸光度(A)值表示。然后在 HER-2基因的编码区内根据干涉位点的筛选原则,选择 HER-2 siRNA Ⅰ、HER-2siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ3段靶序列,体外转录合成 HER-2 siRNA。实验分为4组:空白对照组、脂质体组、非特异性转染组(非特异性 siRNAⅢ)、特异性转染组(HER-2 siRNAⅢ),以β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,用荧光实时定量 PCR 和蛋白印迹法检测转染前后 SKOV3细胞 HER-2 mRNA 和蛋白表达的变化;细胞侵袭实验和细胞趋化实验检测转染前后 SKOV3细胞体外侵袭和趋化能力的变化。结果 GAPDH siRNA 能明显抑制 SKOV3细胞内源性 GAPDH 蛋白的表达,空白对照及加入不同剂量(0.5、1.0、1.5、2.0μg)的 GAPDH siRNA 转染 SKOV3细胞后,其 GAPDH 蛋白的表达水平分别为0.6855±0.0259、0.5698±0.0275、0.4542±0.0296、0.3341±0.0178及0.1816±0.0180,各剂量间比较,差异有统计学意义(F=198.126,P<0.01)。HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ均有抑制 HER-2蛋白表达的作用,HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ转染后 SKOV3细胞中 HER-2蛋白的相对表达水平(分别为0.2162±0.1589、0.1562±0.0067),分别与空白对照组、非特异性转染组及转染 HER-2siRNA Ⅰ的 SKOV3细胞(分别为0.3674±0.0350、0.3839±0.0188、0.3532±0.0197)比较,差异均有统计学意义(F=69.461,P<0.01)。不同剂量(0.5、1.0、1.5、2.0μg)的 HER-2 siRNAⅢ转染后,SKOV3细胞中 HER-2 mRNA 的相对表达水平比较,差异有统计学意义(F=174.53,P<0.01);HER-2siRNAⅢ转染后第1、3、6天,SKOV3细胞中 HER-2 mRNA 的相对表达水平分别为0.0506±0.0017、0.0266±0.0011及0.0154±0.0020,不同时间点比较,HER-2 mRNA 的相对表达水平呈明显下降趋势
- 张淑兰鲁艳明孟丽荣赵彦艳
- 关键词：基因,ERBB-2
- 移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病的研究被引量：10
- 2007年
- 目的通过移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的方法试治疗大鼠糖尿病。方法贴壁生长的MSC与大鼠胰腺的细胞共培养以检测其向胰岛细胞分化的潜能。并将体外培养扩增的MSC移植入糖尿病大鼠体内,观测其能否改善糖尿病病情及其在大鼠体内微环境中的分化情况。结果共培养法可使MSC分化为胰岛样细胞。对大鼠的MSC移植能明显缓解糖尿病病情。结论MSC移植的方法对大鼠糖尿病有一定的治疗作用。
- 刘弘光夏鲲刘晓玉庞希宁
- 关键词：骨髓间充质干细胞胰腺细胞共培养糖尿病细胞移植
- HER-2基因沉默对卵巢癌细胞体外增殖能力的影响被引量：2
- 2006年
- 目的体外转录合成HER-2siR-NA,转染卵巢癌细胞,检测其对细胞生长增殖能力的影响。方法采用real-timePCR检测HER-2mRNA表达情况,采用细胞计数及MTT绘制细胞生长曲线及检测细胞增殖率的变化,并同时采用TUNEL法检测细胞凋亡形态学的变化。结果特异性干涉组细胞HER-2基因的表达水平明显下降,real-timePCR结果显示在干涉后第3天及第6天,特异性干涉组与非特异性干涉组及空白对照组相比,差异有统计学意义,P值均为0.000;而非特异性干涉组与空白对照组之间相比,差异无统计学意义,P值分别为0.653和0.522。特异性干涉组细胞的增殖能力在48、72及96h不同时间点与非特异性干涉组及空白对照组相比,差异均有统计学意义,P值分别为0.023、0.000和0.030。TUNEL结果显示,特异性干涉组出现细胞胞质浓缩,胞核浓聚致密的斑点状,大小不一,形成凋亡小体。结论体外转录合成的HER-2siRNA能特异抑制HER-2基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,siRNA有望成为卵巢癌分子靶向治疗的一个新工具。
- 鲁艳明张淑兰赵彦艳
- 关键词：RNA干扰HER-2卵巢肿瘤
