浙江省公益性技术应用研究计划项目(2012C22041)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 相关作者：郝培应俞晓平马艳朱家骏更多>>
- 相关机构：中国计量学院中国计量大学更多>>
- 发文基金：浙江省公益性技术应用研究计划项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 褐飞虱表皮蛋白基因NlICP的克隆及功能研究被引量：9
- 2013年
- 表皮蛋白与几丁质结合构成抵御外界不良环境的昆虫角质层,在昆虫的生长发育及蜕皮硬化中具有重要的作用。为了探讨表皮蛋白基因在褐飞虱Nilaparvata lugens生长发育中的功能,本研究根据褐飞虱转录组测序信息,对其中1个预测为编码表皮蛋白的Unigene36450序列进行了克隆,并应用荧光定量PCR和RNA干扰(RNAi)技术分别对该基因的表达规律和功能进行了研究。结果表明:克隆的Unigene36450全长cDNA开放阅读框长585bp,编码的蛋白含194个氨基酸,具有典型的表皮蛋白R&R保守结构域,命名为NlICP。转录水平的时序表达分析发现,NlICP仅在褐飞虱若虫期表达,且在3龄若虫体内表达量最高,提示该基因编码的蛋白属于幼虫表皮蛋白。RNA干扰结果显示,取食dsNlICP的1龄末2龄初(孵化后第3天)若虫在干扰6 d和8 d时,NlICP基因的表达量分别较取食dsGFP的对照组下降58.8%和45.6%,差异极显著(P<0.01);干扰后部分褐飞虱若虫因蜕皮不完全死亡,干扰5 d的存活率较对照下降26.7%。本研究结果提示,NlICP与褐飞虱若虫的生长发育及蜕皮相关,可以作为褐飞虱防治的潜在靶标基因。
- 马艳郝培应陆潮峰俞晓平
- 关键词：褐飞虱表皮蛋白表达谱RNA干扰荧光定量PCR
- 褐飞虱ATP合酶b亚基基因ATPSb的克隆与功能分析被引量：1
- 2018年
- 【目的】克隆褐飞虱Nilaparvata lugens ATP合酶b亚基基因全长cDNA序列,并通过RNA干扰技术对该基因的功能进行研究,探讨其在褐飞虱防治中的潜在价值。【方法】根据本实验室获得的褐飞虱转录组测序数据提供的ATP合酶b亚基基因部分核心序列信息,以水稻品种TN1饲养的褐飞虱为材料,应用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得全长cDNA;通过实时荧光定量PCR技术研究其在褐飞虱不同发育阶段和5龄若虫不同组织中的表达谱;并利用褐飞虱2龄若虫通过饲喂法对该基因进行RNAi实验。【结果】成功克隆了褐飞虱ATP合酶b亚基基因ATPSb的全长cDNA序列(Gen Bank登录号:MF973493)。该序列包含一个843 bp的完整开放阅读框,编码280个氨基酸。荧光定量PCR表明,ATPSb基因的mRNA水平在褐飞虱不同发育阶段以1-2龄若虫期为高,随着龄期增大呈下降趋势,在雌成虫中也随着羽化时间增加而下降,在雄成虫中的表达量高于雌成虫。在5龄若虫不同组织中的表达量以胸部中为最高,头部、中肠、卵巢和脂肪体中相对表达量较低。从靶向ATPSb基因的RNA干扰第6天起,处理组中靶标基因的mRNA水平降低,并且RNA干扰对褐飞虱若虫具有显著致死效果;在RNA干扰后第18天时,对照组个体存活率仍保持在约80%的较高水平,而饲喂ds ATPSb的RNA干扰组基本无个体存活。【结论】本研究结果显示,ATPSb基因对褐飞虱的生存具有重要作用,靶向ATPSb基因的RNA干扰对褐飞虱具有显著的抑制效果,ATPSb基因可以作为褐飞虱防治的潜在靶标进行深入研究。
- 冯娅琳郝培应俞飞飞陆潮峰朱家骏俞晓平
- 关键词：褐飞虱ATP合酶RNA干扰存活率
- 褐飞虱磷脂酰肌醇3激酶p85α亚基基因NlPIK3R1的克隆与功能分析
- 2015年
- 【目的】PI3K信号通路在生物体中发挥重要功能,涉及糖和脂质的代谢、细胞和组织生长以及生物个体寿命等。本研究旨在探明该通路中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在褐飞虱Nilaparvata lugens中的功能。【方法】根据转录组提供的PI3K p85α核心序列信息,应用c DNA末端快速克隆的技术(RACE)获得了编码PI3K p85α的基因Nl PIK3R1的全长c DNA(Gen Bank登录号为KP635379),并应用荧光定量PCR和通过给成虫喂食ds Nl PIK3R1对Nl PIK3R1进行RNA干扰(RNAi)分别对该基因的表达规律和功能进行了研究。【结果】荧光定量PCR测定结果表明,Nl PIK3R1在褐飞虱若虫和雄成虫中表达量均较低,但在怀卵雌成虫中大量表达。RNAi结果表明,给褐飞虱成虫喂食0.1和0.5μg/μL ds Nl PIK3R1均导致Nl PIK3R1的表达明显受到抑制,高浓度组的抑制效果尤为明显。喂食ds Nl PIK3R1对褐飞虱成虫具有极显著致死效果,高浓度组的褐飞虱成虫在饲喂第7天时存活率仅为37.5%,相比于空白对照组(87.00%)和ds GFP对照组(76.67%)均达到了极显著差异(P<0.01)。对Nl PIK3R1的RNAi导致褐飞虱成虫羽化率下降和体重变轻。【结论】本研究结果显示,Nl PIK3R1基因对褐飞虱的生存、生长和发育具有重要作用,可以作为防治褐飞虱的潜在靶标。
- 陆潮峰郝培应马艳朱家骏冯娅琳俞晓平
- 关键词：褐飞虱磷脂酰肌醇3激酶RNA干扰
- 褐飞虱核糖体小亚基蛋白S8基因NlRPS8的克隆及其表达分析被引量：3
- 2016年
- 【目的】核糖体蛋白在生物体内具有重要作用,本研究旨在探明核糖体蛋白S8在褐飞虱Nilaparvata lugens生长发育过程中的表达规律和功能。【方法】本文根据褐飞虱基因表达谱提供的差异表达基因信息及转录组提供的基因核心序列,结合褐飞虱基因组比对分析,对褐飞虱核糖体S8基因进行了预测,并通过RT-PCR获得了褐飞虱核糖体小亚基蛋白S8的全长c DNA序列,命名为NlRPS8（Gen Bank登录号：KU341337）。【结果】NlRPS8基因全长627 bp,编码208个氨基酸。进化分析表明,褐飞虱与桑粉介壳虫Maconellicoccus hirsutus亲缘关系最为接近。应用荧光定量PCR分析了基因NlRPS8的表达规律,结果表明,NlRPS8基因在褐飞虱怀卵雌虫中表达量最高,而在雄成虫、初羽化雌成虫与1~5龄若虫表达量相对较低;在褐飞虱体内,NlRPS8基因在卵巢中表达量最高,中肠次之,在其他部位表达量较低。在抗性品种ASD7和RHT上,NlRPS8基因表达量分别为感性品种TN1上的1.99倍和2.14倍。NlRPS8基因在经过饥饿处理1 d的褐飞虱组中表达量为正常组的1.6倍。【结论】研究结果显示NlRPS8基因在褐飞虱生长、繁殖中发挥作用,为进一步研究NlRPS8基因在褐飞虱生长发育和对抗性品种适应中的功能提供了线索。
- 朱家骏郝培应陆潮峰冯娅琳俞晓平
- 关键词：褐飞虱致害性变异
- 褐飞虱核糖体蛋白S6激酶基因NlRPS6KA2的克隆及其表达分析
- 2015年
- 根据转录组提供的RPS6KA2核心序列信息,应用RACE技术获得了一个编码褐飞虱核糖体蛋白S6激酶的基因NlRPS6KA2的全长cDNA,编码的蛋白含706个氨基酸,具有保守的S_TKc和S_TK_X结构域.荧光定量PCR测定结果表明,NlRPS6KA2基因在褐飞虱若虫和雄虫中表达量均较低,但在怀卵雌虫中大量表达.同时,褐飞虱从感性水稻品种TN1到抗性水稻品种RHT的适应过程中,该基因表达量呈现明显的下降趋势,在适应后有所回升.研究结果为进一步研究NlRPS6KA2基因在褐飞虱中的功能和阐明褐飞虱致害性变异机制提供了依据.
- 陆潮峰郝培应俞晓平
- 关键词：褐飞虱荧光定量PCR致害性变异
