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北京市自然科学基金(7002009)

作品数:5 被引量:19H指数:3
相关作者:张志谦胡颖宁涛李金萍赵威更多>>
相关机构:北京肿瘤医院北京大学临床肿瘤学院新乡医学院更多>>
发文基金:北京市自然科学基金国家自然科学基金中华医学基金会基金更多>>
相关领域:生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 3篇生物学
  • 2篇医药卫生
  • 1篇自动化与计算...

主题

  • 3篇蛋白
  • 3篇蛋白酶
  • 3篇信号肽
  • 3篇金属蛋白
  • 3篇金属蛋白酶
  • 3篇基质
  • 3篇基质金属
  • 3篇基质金属蛋白...
  • 3篇PEX
  • 2篇基质金属蛋白...
  • 2篇MMP-2
  • 1篇血管
  • 1篇血管发生
  • 1篇原核表达
  • 1篇生长激素
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学活性
  • 1篇重组蛋白
  • 1篇重组腺病毒
  • 1篇细胞

机构

  • 4篇北京肿瘤医院
  • 1篇新乡医学院
  • 1篇北京大学临床...

作者

  • 5篇张志谦
  • 2篇胡颖
  • 1篇刘江莹
  • 1篇张光谋
  • 1篇李金萍
  • 1篇宋琳
  • 1篇赵威
  • 1篇林本耀
  • 1篇林仲翔
  • 1篇柯杨
  • 1篇纪素娟
  • 1篇赵威
  • 1篇李金萍
  • 1篇宁涛

传媒

  • 2篇中国生物化学...
  • 1篇中国肿瘤生物...
  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇中国生物工程...

年份

  • 1篇2007
  • 2篇2006
  • 1篇2005
  • 1篇2002
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
生长激素信号肽可诱导重组蛋白外分泌表达被引量:4
2005年
Signal peptide capable of efficiently directing many protein secretion in mammalian cells is one of the key elements in recombinant protein production,gene therapy and the development of DNA vaccines.In order to explore the possibility of rat growth hormone signal peptide as such an element,a new vector based on the mammalian expression vector pcDNA3 was constructed by employing rat growth hormone(rGH) signal peptide as leading sequence,followed by multiple cloning sites,the myc epitope-tag and 6×his purification tag in the expression cassette.The vector was validated by successfully expressing and secretion of chick MMP-2 C-terminal PEX domain,a potential angiogenesis inhibitor,and tandem peptide repeats of myc epitope-tag in COS-7 cells.These results suggest that rat growth hormone signal peptide is effective in the mediation of recombinant protein expression and secretion,and this vector provides a new tool for universal cloning and secretion of exogenous proteins in mammalian cells.
张志谦李金萍胡颖
关键词:重组蛋白生长激素信号肽SIGNALSIGNALPCDNA3COS-7
基质金属蛋白酶-2C端片段PEX的原核表达及其对血管发生的抑制作用被引量:12
2002年
为了克隆表达鸡的基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )的C端片段PEX ,并探讨其对血管发生的抑制作用 ,利用RT PCR从鸡胚成纤维细胞克隆MMP 2C端片段PEX ,构建原核表达载体pCal n PEX ;转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLys,异丙基β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生PEX融合蛋白 ,包涵体蛋白用盐酸胍法变性、复性 ;生长曲线观察PEX融合蛋白对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响 ;鸡胚绒毛尿囊膜血管发生实验研究其对血管发生的抑制作用 .结果表明融合蛋白CBP/PEX具有抑制人脐静脉血管内皮细胞的生长和鸡胚绒毛尿囊膜血管发生的作用 .提示PEX是有待进一步开发的潜在抑制血管发生的药物 .
李金萍张光谋柯杨林本耀赵威胡颖宁涛林仲翔张志谦
关键词:MMP-2血管发生基质金属蛋白酶-2原核表达
利用骨骼肌细胞高效表达人基质金属蛋白酶-9
2006年
为探讨利用培养的骨骼肌细胞表达人基质金属蛋白酶的可行性,利用PCR和DNA重组技术构建人mmp-9-myc-his/pcDNA3基因表达载体,转染成肌细胞QM-7,G418筛选阳性转染子.诱导细胞分化成肌管后,收集细胞培养上清.经Western印迹检测,表达产物分子量为93 kD,与蛋白标准品对照推测表达量约10~15 mg/L.利用Ni-NTA琼脂糖从1 L培养上清中纯化到4~6 mg MMP-9纯品,纯化效率约50%.经明胶酶谱检测,表达蛋白可以降解明胶.这些结果表明:所表达的MMP-9具有生物活性,为以MMP-9为靶分子的特异拮抗剂和/或药物的筛选、MMP-9定量检测试剂盒的开发以及MMP-9的功能研究奠定了基础;以鹌鹑成肌细胞QM-7作为外源蛋白脊椎动物细胞表达体系具有表达量高、经济等优点,有可能进一步研究开发成为新的外源重组蛋白脊椎动物细胞表达体系.
刘江莹赵威张志谦
关键词:骨骼肌细胞基因表达
MMP-9信号肽高效诱导PEX重组蛋白在COS7细胞中分泌表达被引量:3
2007年
为了便于收集和纯化,重组蛋白常需要引导至真核细胞外。蛋白能否分泌主要取决于其是否含有信号肽,由于不同信号肽诱导蛋白分泌的效率不同,高效信号肽的筛选已成为生物工程领域提高重组蛋白产量的重要策略之一。为了筛选诱导MMP-2C末端PEX在COS7细胞中高效分泌表达的信号肽,在PEX的N末端分别融合大鼠生长激素(rGH)、小鼠IgGκ链和人基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)的信号肽并比较三种信号肽引导PEX分泌表达的效率。Western免疫印迹和ELISA蛋白定量检测表明MMP-9的信号肽引导PEX蛋白分泌的效率约为其它两种信号肽的两倍。利用Ni-NTA亲和柱对细胞培养基中的PEX进行纯化,蛋白产量约为1mg/L,纯化的PEX重组蛋白具有抑制鸡尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)血管发生的作用。以上结果提示MMP-9的信号肽有效诱导具有生物活性的PEX重组蛋白在COS7细胞中分泌表达。
宋琳张志谦
关键词:基质金属蛋白酶-9信号肽分泌表达载体PEX
含MMP-9信号肽、人MMP-2PEX片段腺病毒载体的构建及其生物学活性被引量:1
2006年
目的:构建含MMP-9信号肽、人MMP-2PEX片段融合蛋白的重组腺病毒(ET-M9-PEX),通过基因治疗策略建立患者体内药物生物反应器,以期利用抗血管因子的体内表达实现肿瘤的有效治疗。方法:利用PCR、基因重组等技术,构建含M9-PEX融合蛋白的腺病毒载体,经L293细胞包装、扩增后得到有感染力的ET-M9-PEX重组腺病毒。用Westernblotting和免疫荧光检测其感染细胞后PEX的表达和分泌,通过生长曲线观察其感染内皮细胞(endothelialcell,EC)的培养上清对EC增殖的影响,利用鸡胚绒毛尿囊膜(chickenchorioallantoicmembrane,CAM)实验检测其对血管发生和种植瘤生长的影响。结果:ET-M9-PEX构建成功,感染细胞后有PEX的表达和分泌。体外实验表明,ET-M9-PEX感染细胞的培养上清能抑制EC增殖。体内实验证实,ET-M9-PEX感染后的PG细胞接种于CAM,与E-T相比,对瘤重的抑制率为57.57%(P<0.01),对一级血管的抑制率为33.52%(P<0.01);而E-T和PBS组之间瘤重和一级血管数均无显著性差异。结论:构建的ET-M9-PEX重组腺病毒能显著抑制EC细胞增殖,抑制CAM种植瘤生长和血管发生,ET-M9-PEX有望成为肿瘤基因治疗的有效药物。
纪素娟张志谦
关键词:PEXMMP-2信号肽重组腺病毒
共1页<1>
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