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在离子液体中合成有机磷农药通用半抗原被引量：1: 2012年; 以离子液体[Bmim]Br为溶剂和催化剂,O,O-二烷基二硫代磷酸铵盐(1a,1b)与氯乙酸于45℃反应40min,合成了有机磷农药半抗原S-羧甲基-O,O-二乙基二硫代磷酸酯和S-羧甲基-O,O-二甲基二硫代磷酸酯,产率分别为97.9%和98.4%。1a和1b低温(<5℃)酸化后与丙烯酸在[Bmim]Br中于室温反应60 min,合成了两个有机磷农药半抗原S-羧乙基-O,O-二乙基二硫代磷酸酯和S-羧乙基-O,O-二甲基二硫代磷酸酯,产率分别为93.7%和94.2%。[Bmim]Br重复使用4次后依然保持较高的催化活性。; 温万东刘喜保高履桐杨润亚祁志军; 关键词：离子液体

有机磷杀虫剂多残留免疫分析技术研究进展被引量：2: 2013年; 有机磷杀虫剂是一类重要的农业生产资料,在防治害虫和增加粮食产量方面发挥了极大的作用,但由于其大量使用带来的环境问题越来越受到人们的关注。因此,如何快速准确地检测其在农作物及环境中的残留、尤其是多种农药的残留,一直是研究的热点。近年来,基于抗原抗体特异性识别反应机理,研究者在农药多残留免疫分析方面做了大量的探索。本文针对有机磷类杀虫剂的多残留免疫分析,从采用混合抗体、多抗原决定簇抗体、共性结构抗体及单链可变区抗体几个方面做了详细地总结,并对存在的问题进行了探讨,以期为今后的研究提供借鉴。; 祁志军寇立泉王东方刘爽; 关键词：有机磷多残留抗原免疫分析

硫代磷酸酯类农药通用抗原的合成与鉴定被引量：4: 2012年; 【目的】合成具有硫代磷酸酯类农药共性结构的系列半抗原,制备此类农药的通用人工抗原。【方法】以烷氧基硫代磷酸盐和卤代羧酸为原料合成半抗原,采用1 HNMR、13 CNMR及EIS-MS谱图对其结构进行表征。将合成的半抗原分别通过活性酯法、混合酸酐法与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫人工抗原和包被人工抗原。用紫外扫描法定性分析人工抗原的偶联情况,用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)法间接测定其偶联比。【结果】合成了H1～H6 6种具有硫代磷酸酯类农药共性结构的半抗原,其中H1、H2为包被半抗原,H3～H6为免疫半抗原。制备了H1-OVA、H2-OVA、H3-BSA、H4-BSA、H5-BSA、H6-BSA、H2-BSA、H4-OVA和H6-OVA 9种人工抗原,其偶联比分别为9∶1、10∶1、23∶1、26∶1、39∶1、43∶1、28∶1、14∶1和12∶1。【结论】成功合成硫代磷酸酯类农药的人工抗原,为下一步用其免疫动物制备抗体进而进行有机磷农药酶联免疫分析奠定了基础。; 刘喜保温万东祁志军胡兆农杨润亚; 关键词：有机磷农药酶联免疫分析

拟除虫菊酯类农药多残留酶联免疫分析方法的条件优化被引量：11: 2017年; [目的]优化拟除虫菊酯类农药多残留检测条件,建立适用于多种菊酯类农药的酶联免疫分析方法。[方法]优化多残留酶联免疫检测方法,建立半抗原对单链抗体的标准抑制曲线。对7种拟除虫菊酯类农药进行交叉反应,计算交叉反应率。[结果]最佳检测条件:包被抗原以质量浓度5 mg/L于37℃包被微孔2 h、单链抗体稀释640倍、稀释液中甲醇体积分数为10%、竞争时间为80 min、HRP/Anti-His酶标二抗稀释质量浓度为1/7000 g/L、显色20 min。该方法对氯菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯有较强交叉反应,交叉率分别为62.31%、43.43%、36.93%。[结论]成功建立可检测多种拟除虫菊酯类农药的酶联免疫分析方法,为免疫分析试剂盒的研发奠定基础。; 吴元元金朵付骋宇祁志军; 关键词：拟除虫菊酯半抗原多残留酶联免疫分析

拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、鉴定及其特异性分析被引量：1: 2017年; 目的制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达。可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用FactorXa切除GST标签获得scFv,然后采用Western blotting法对其进行鉴定。scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析。结果经0.1mmol/LIPTG诱导后,重组菌BL21(DE3)-p ET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体。经鉴定,可溶性scFv相对分子量约为30k Da,效价为1:25600。同源半抗原Hap1对单链抗体sc Fv的IC50为2.43μg/mL,检出限为0.045μg/mL;scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性,IC50分别为3.29、4.72和5.55μg/mL。结论本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体,该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性,该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据。; 吴元元金朵付骋宇祁志军; 关键词：拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体

拟除虫菊酯类农药通用人工抗原合成及免疫原性鉴定被引量：4: 2015年; [目的]为建立拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析方法,对拟除虫菊酯通用人工抗原的合成鉴定进行研究。[方法]根据拟除虫菊酯农药公共结构设计合成了3种通用半抗原,并通过高分辨质谱和核磁共振氢谱对其结构进行鉴定。通过活性酯法将3种通用半抗原分别与多聚赖氨酸(PLL)和牛血清蛋白(BSA)偶联制备成免疫抗原和包被抗原,采用紫外吸收法鉴定。将3种免疫抗原免疫小鼠,制备了拟除虫菊酯抗血清,非竞争间接酶联免疫吸附分析方法测定抗血清效价。[结果]通用半抗原和人工抗原制备成功,合成的人工抗原具有较高的免疫原性,3种抗血清效价分别达到3.2×104、3.2×104、6.4×104。[结论]成功制备了拟除虫菊酯通用人工抗原,为拟除虫菊酯农药多残留免疫分析的方法研究奠定了基础。; 王东方刘爽付骋宇赵吉建祁志军; 关键词：拟除虫菊酯半抗原人工抗原免疫原性

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国家自然科学基金(30900955)