河南省科技攻关计划(0424050015)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 相关作者：王建华张淑霞崔保安贺秀媛陈红英更多>>
- 相关机构：河南农业大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡传染性支气管炎病毒HN99株膜蛋白基因的分子特征分析被引量：1
- 2010年
- 根据GenBank中已经公布的鸡传染性支气管炎病毒株M基因序列,设计并合成1对特异引物,利用RT-PCR方法扩增出IBV河南分离株HN99株M基因的全长片段,然后进行克隆、测序,获得了长度为669 bp的HN99株M基因全序列,编码M蛋白222个氨基酸残基,其N端的前60 nt为前导序列,近N端含有1个潜在的N-糖基化位点,M基因编码的膜蛋白中含有9个高度保守的半胱氨酸;HN99株M蛋白点突变较多,且突变位点呈散在分布遍及整个ORF,主要表现为碱基的插入和缺失,在Glu 21~Leu 37,Ser 45~Ile 68,Pro 74~Phe 94位氨基酸的区域内形成3个跨膜区域,在39 Try^43 Thr,171 Ile^176 Pro,183 Arg^193 Ser位氨基酸处含有3个潜在的抗原位点;与GenBank中的11个国内外参考毒株相比,IBV-HN99株M基因核苷酸同源性为87.0%~90.3%,推导的氨基酸同源性为89.7%~94.2%;在系统发生进化树中,HN99株M基因与其他参考毒株属于不同的分支,亲缘关系均较远.
- 贺秀媛张淑霞张志平张君涛陈红英王川庆崔保安王建华
- 关键词：传染性支气管炎病毒M基因分子特征
- 鸡传染性支气管炎病毒W株膜蛋白基因的分子特征被引量：3
- 2009年
- 【目的】研究鸡传染性支气管炎病毒（IBV）W侏膜蛋白基因的分子特征。【方法】根据GenBank中已发表的鸡传染性支气管炎病毒M基因序列，设计并合成1对特异性引物，利用RT-PCR技术成功扩增了IBV河南地方分离毒株W株M基因全长片段，然后进行克隆、测序，并与GenBank中发表的11株国内外参考毒株进行比较分析。【结果】获得的W株M基因全长为681bp，编码M蛋白226个氨基酸残基，其N端的前60nt为前导序列，近N端含有2个潜在的N-糖基化位点；3个跨膜区域分别位于21-37，45～68，74～94aa处，在171～176，183～193aa处有2个潜在的抗原位点，且M蛋白上有9个高度保守的半胱氨酸；与参考毒株相比，IBV-W株M基因的核苷酸同源性为88．2％～92．7％，推导的氨基酸同源性为91．1％～95．67％；M蛋白的突变主要发生在前16位氨基酸，其中第2位缺失1个氨基酸，第3～6位连续插入4个氨基酸，第8～9位缺失2个氨基酸，第14～16位的3个氨基酸发生连续突变，其他位点的氨基酸变异为点突变，M蛋白核苷酸序列的变异主要表现为静默突变，亲水区较疏水区更易变易；在系统发生进化树中，W株与BJ株处于同一个小的分支上，亲缘关系较近，而与其他参考株的亲缘关系较远。【结论】推测W株可能是一个新的变异株。
- 贺秀媛张淑霞张君涛陈红英王川庆崔保安王建华
- 关键词：M基因分子特征
- 鸡传染性支气管炎病毒HN99株N基因在大肠杆菌中的表达及产物免疫活性检测被引量：7
- 2007年
- 鸡传染性支气管炎病毒HN99株核蛋白(N)基因PCR产物经BamHⅠ、HindⅢ双酶切,克隆入大肠杆菌原核表达载体pMAL-p2X,构建重组表达质粒pMAL-p2X-N,转化大肠杆菌TB1并进行诱导表达。通过pMALTM融合蛋白纯化系统对表达产物进行非变性纯化,将纯化的N蛋白按常规方法免疫新西兰大白兔,制备兔抗鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的多克隆抗体,并用ELISA法检测其生物活性。结果表明,表达的重组核蛋门纯化后出现2条带,相对分子质量分别约为92和82 ku,与Western blot出现的2条蛋白带一致;纯化的重组蛋白经裂解因子作用后,出现2条蛋白带,相对分子质量分别为45和35 ku,与预期结果相符合;制备的多克隆抗体可与不同鸡传染性支气管炎病毒株发生反应,与亲本毒株的反应性略高于与其他毒株的反应性。以上结果表明,原核表达的可溶性N蛋白具有高度的生物活性,有望作为新的基因工程抗原用于鸡传染性支气管炎病毒的群特异性诊断。
- 张淑霞贺秀媛崔保安王建华
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒N基因免疫活性
- 鸡传染性支气管炎病毒HN99株N基因的克隆与序列分析被引量：6
- 2006年
- 根据GenBank中已发表的鸡传染性支气管炎病毒（IBV）N基因序列，设计并合成1对特异性引物，用RT—PCR方法扩增IBV HN99株的N基因，并将其克隆入pMD18-T载体，转化感受态大肠杆菌Top10。提取pMD18-T-N重组质粒，进行酶切和PCR鉴定，并对阳性质粒进行测序。将测序结果与H52，Ark99，BJ等参考毒株进行序列分析。结果表明，N基因全长为1230bp，编码1条409个氨基酸组成的多肽；其核苷酸与H52，Ark99和BJ等毒株的同源性为88．4％～90．7％。氨基酸同源性为91．7％～94．4％；HN99株与H52，Ark99和BJ等其他各毒株的亲缘关系均较远，是1株新的IBV变异株。
- 张淑霞贺秀媛崔保安王建华
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒N基因基因克隆
- 鸡传染性支气管炎HN99株M基因在杆状病毒中的表达
- 鸡传染性支气管炎病毒HN99株膜蛋白(M)基因的阳性重组质粒pMD18-T-M经BainHⅠ、HindⅢ双酶切,克隆入杆状病毒真核表达载体pFastBacHTa-MBP。将所构建的重组表达质粒pFastBacHTa-MB...
- 贺秀媛
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒M基因真核表达
- 文献传递
