江苏省自然科学基金(BK2001155)
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
- 相关作者：张寄南杨笛吴恒芳万文辉马文珠更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院南京军区南京总医院南京医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种新发现的肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白Ⅰ基因突变被引量：10
- 2003年
- 万文辉吴恒芳杨笛张寄南马文珠
- 关键词：肥厚型心肌病基因突变病理机制
- 大鼠心肌肌钙蛋白I基因Lys184缺失突变重组腺病毒载体的构建被引量：5
- 2008年
- 目的:构建SD大鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)赖氨酸(Lys)184缺失突变重组腺病毒载体。方法:利用PCR定点突变方法给大鼠cTn I基因引入Lys184缺失突变,将扩增片段克隆至pMD18-T载体,在C末端用PCR法加6×组氨酸(His)标签序列后,再亚克隆至Adeno-X腺病毒DNA,转染HEK 293细胞,包装形成重组腺病毒(Ad-cTnILys184del)。结果:PCR及测序结果表明,重组腺病毒序列正确,Western blot证明有融合突变蛋白表达。结论:本研究成功地构建了大鼠cTnI Lys184缺失突变重组腺病毒载体,为后续的功能研究提供了有价值的研究材料。
- 万文辉吴恒芳杨笛张寄南
- 关键词：定点突变重组腺病毒
- PCR-SSCP检测肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白Ⅰ基因7号外显子突变
- 2008年
- 目的研究聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)法检测肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因7号外显子突变的可行性。方法肥厚型心肌病患者59例(2例曾直接测序证实7号外显子Arg145Trp突变),PCR扩增cTnI基因7号外显子,予PCR-SSCP检测突变,与直接测序结果进行比较。结果2例Arg145Trp突变者均有异常条带,余未证实突变者未见阳性条带。结论PCR-SSCP检测肥厚型心肌病cTnI基因Arg145Trp突变具有良好的检出性,可作为大规模人群筛查的工具。
- 万文辉吴恒芳张寄南
- 关键词：肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白I突变单链构象多态性
- 中国人群肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白基因突变研究被引量：3
- 2003年
- 目的:初步探讨中国人群肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白T基因突变情况,为该病的早期防治和康复介入奠定理论基础。方法:提取58例肥厚型心肌病(hypertrophiccardiomyopathy,HCM)患者外周血白细胞基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增心肌肌钙蛋白T(cTnT)基因8、9、11号外显子,产物做单链构象多态性(SSCP)分析,出现异常条带者直接测序验证。结果:58例临床确诊的HCM患者cTnT基因8,9,11号外显子,除160位密码子存在ATC和ATT多态性外,未发现基因位点的异常。结论:与国外报道的肥厚型心肌病约20%是由肌钙蛋白T基因突变引起相比较,中国人群肥厚型心肌病患者基因突变可能存在不同的特点。
- 吴恒芳万文辉杨笛卞智萍徐晋丹马文珠张寄南
- 关键词：肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白T聚合酶链反应单链构象
- 中国肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白I基因突变类型的研究被引量：10
- 2003年
- 目的研究中国肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因突变类型。方法肥厚型心肌病患者58例,男36例,女22例,年龄10～77岁,平均(46±18)岁。正常对照100例,男60例,女40例,年龄10～68岁,平均(33±12)岁。聚合酶链反应(PCR)扩增肥厚型心肌病患者及正常对照组cTnI基因5、7及8号外显子,结合单链构型多态性及直接测序法分析结果。结果未见国外已报道的cTnI基因突变类型(Pro82Ser,Arg145Gly,Arg145Gln,Arg162Trp,ΔAAG183,Asp196Asn,Gly203Ser,Ser199Asn,Lys206Gln,8号外显子缺失33bp),但在7号外显子发现一新的Arg145Trp突变。此外,在7号外显子尚见179位密码子GAG→GAA多态性。结论所研究的肥厚型心肌患者群未发现国外报道的cTnI基因突变类型。与国外比较,中国肥厚型心肌病cTnI基因突变类型可能具有不同的特点。
- 万文辉吴恒芳杨笛卞智萍徐晋丹马文珠张寄南
- 关键词：肥厚型心肌病基因突变类型聚合酶链反应
- 构建检测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变的寡核苷酸探针
- 2008年
- 目的:等位基因特异性寡核苷酸杂交是基于分子杂交原理而建立的经典的突变检测方法,也是DNA芯片技术的重要组成部分,常用于突变筛查。实验拟建立一种适合快速大规模检测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T)的方法。方法:实验于2002-07/2004-06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所临床生物学诊断与治疗实验室完成。直接测序研究证实的具有cTnⅠ基因Arg145Trp突变的肥厚型心肌病患者2例,正常对照1名,受试者对实验均知情同意。自外周血白细胞抽提DNA,聚合酶链反应扩增心肌肌钙蛋白Ⅰ基因含有突变位点的外显子,点于硝纤膜上,分别在不同的温度条件(48,52,56℃)下再与生物素标记的突变及野生探针杂交,摸索最佳杂交条件。根据最佳杂交条件,分别在100倍浓度无关探针条件下行非特异性竞争杂交,在100倍浓度未标记的特异寡核苷酸探针条件下行特异性竞争杂交。结果:采用碱性磷酸酶标记的链霉亲和素和NBT/BCIP观察杂交结果:①突变及野生探针在48℃杂交时,除阴性对照外,2个患者及正常对照样本均见明显阳性信号。②在52℃及56℃条件下突变探针正确检出两个突变样本,但以56℃结果最佳。③100倍浓度无关探针杂交存在时,对生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果没有影响,2个患者样本均见明显阳性信号。100倍浓度未标记的突变寡核苷酸探针存在时杂交,完全抑制生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果。结论:所设计的寡核苷酸探针能够检测出肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T),适合该突变的快速大规模筛选。
- 万文辉钱晓明吴恒芳杨笛张寄南
- 关键词：肥厚型心肌病突变寡核苷酸探针
